Name: Desenvolvimento de uma colite Modelo Antigen-driven para o Estudo de apresentação de antígenos por células apresentadoras de antígenos às células T (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-09-18T15:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 57 s
Description: Aprenda a desenvolver um modelo de colite antigen-driven para estudar a apresentação de antígenos por fagócitos mononucleares CX3CR1+ às células T CD4+ na lâmina própria intestinal. Este método permite monitorar eventos imunes durante a progressão da doença inflamatória intestinal.

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Os autores não têm nada a divulgar.

Tal como acontece com todos os outros modelos, o modelo de colite-driven antigénio descrito acima pode apresentar alguns problemas que o investigador realização da técnica deve estar ciente. Ao injetar o OT-II / Vermelho + CD4 + T CD62L + células nos hospedeiros, o investigador deve ser muito gentil e cuidadosa para inserir a agulha para dentro da cavidade peritoneal. Não fazer isso pode resultar na ruptura do intestino do rato que pode levar à morte ou a administração subcutânea de célu...

O intestino é a maior superfície do corpo que é exposta ao ambiente externo. Vastas matrizes de micróbios residentes colonizar o intestino humano para formar a microbiota intestinal (ou microflora). Este é estimado para consistir de até 100 trilhões de células microbianas e constitui um dos habitats bacterianas mais densamente povoadas conhecidos na biologia 1-3. No GIT bactérias colonizar um nicho intestinal onde eles sobreviver e se multiplicar 4. Em troca, a microbiota dota o anfitrião com características funcionais adicionais não codificados em seu genoma 1. Por exemplo a microbiota estimula a proliferação de células epiteliais, produz vitaminas que hospeda não pode produzir por si mesmas, regula o metabolismo e protege contra agentes patogénicos 4-6. Dada esta relação benéfica, alguns autores têm sugerido que os seres humanos são &quot;super-organismos&quot; ou &quot;holobionts&quot;, que são uma mistura de genes de bactérias e humanos 7,8. Dado o impacto benéfico da microbiota do hospedeiro (humano), o sistema imunitário do intestino necessita de tolerar micróbios comensais para permitir a sua existência no lúmen, mas também matar os patogénios que invadem a partir do lado luminal 9-11. O sistema imunológico intestinal tem desenvolvido mecanismos para distinguir entre os micróbios luminais inofensivos e potencialmente prejudiciais; No entanto, estes mecanismos ainda não são bem compreendidos 12. Manter a integridade intestinal requer uma homeostase imune fortemente regulada para manter o equilíbrio entre tolerância e imunidade 13. Um desequilíbrio na homeostase imune contribui para a indução de doenças intestinais, tais como doença inflamatória do intestino (IBD) 3,14. Existem dois principais tipos de DII: doença de Crohn (CD) e colite ulcerativa (UC). Os pacientes com estas doenças geralmente sofrem de sangramento retal, diarréia severa e dor abdominal 15,16. A única causa da DII ainda édesconhecida, mas uma combinação de fatores genéticos, influências ambientais e respostas imunes desreguladas pode ser o evento chave para o desenvolvimento da doença 15. Modelos animais para IBD têm sido utilizados por mais de 50 anos. Nas últimas décadas foram desenvolvidos novos sistemas modelo IBD para testar as várias hipóteses relativas à patogénese da DII 17,18. O modelo melhor caracterizado de colite crónica é o modelo de transferência de células T que induz perturbações da homeostase de células T 19,20. Este modelo envolve a transferência de células T naive a partir de ratinhos imunocompetentes em hospedeiros que não têm T e as células B (tais como RAG - / - e ratinhos SCID) 16,21. O desenvolvimento da doença neste modelo é monitorizada durante 3-10 semanas por avaliação da presença de diarreia, a redução da actividade física, e perda de peso corporal. Este é assim chamado a síndrome de caquexia 16. Em comparação com os ratos saudáveis ​​do tecido do cólon dos exércitos transplantados é thickeR, mais curtos e mais pesado 16. Utilizando o modelo de transferência de células T, é possível compreender como as diferentes populações de células T pode contribuir para a patogénese do IBD 22. O modelo de transferência de células T não analisar as interacções entre as APCs e as células T no processo da doença de uma forma específica para o antigénio. Demonstrou-se que uma interacção entre as células mielóides e células linfóides pode ser responsável pelo desenvolvimento de inflamação intestinal 23. Embora muitos aspectos de DII foram clarificados, os eventos iniciais que conduzem ao desenvolvimento da doença têm ainda de ser claramente entendido. Foi demonstrado que na ausência da colite transferência microbiota não pode ser estabelecida 24. Recentemente, várias teorias que sugerem IBD pode ser um resultado de uma resposta imunitária contra bactérias comensais 25. Os autores propuseram também que as bactérias comensais são essenciais para induzir a inflamação no intestino distal26. Em livre de germes (GF) os animais o sistema imunitário do intestino é geralmente deficientes 27,28, mas uma colonização destes ratos com uma mistura de-específica isentos de agentes patogénicos bactérias resulta no desenvolvimento do sistema imunitário intestinal totalmente competente 29. Assim, a microbiota parece ser um elemento chave na patogénese do IBD, ou como um mecanismo que predispõe para ou protege contra o desenvolvimento de inflamação intestinal 30,31. As teorias atuais sugerem que IBD é um resultado de desequilíbrio microbiano, chamado disbiose, em pacientes geneticamente predispostos 32, mas ainda não está claro se a disbiose é a causa ou a consequência da doença 12. Considerando o papel de microorganismos no desenvolvimento de DII, em experiências in vitro mostraram que as células T CD4 + podem ser activadas por APCs pulsadas com bactérias intestinais 33,34. Além disso, demonstrou-se que os antigénios deespécies bacterianas diferentes comensais, tais como E. coli, Bacteroides, Eubacterium e Proteus, é capaz de activar células T CD4 + 35. Isto indica que a apresentação de antigénios bacterianos de células T é de importância para o desenvolvimento de IBD. Para reduzir a complexidade de múltiplos antigénios derivados pela microflora no processo da doença, de uma estirpe de E. coli foi criada que produz o antigénio OVA. Transferência colite foi induzida por injecção de células T específicas de OVA em RAG - / - de animais colonizado com E. expressam OVA coli. Este modelo baseia-se em evidências recentes sugerindo que CX 3 CR1 + MPs, um grande subconjunto de células na lâmina do cólon (CLP) 36, estão interagindo com células T CD4 + durante a transferência de colite 37. MPs provar o lúmen intestinal para antígeno particulado, tais como bactérias, usando suas dendrites 36, 38,39. Estudos anterioresdemonstrou que MPs também pode levar até antigénios solúveis, tais como óvulos, introduzidos na intestinal lúmen 40,41. Dada a abundância de CX 3 CR1 + MPs no CLP, é possível que essas células podem provar bactérias luminais e interagir com células T CD4. De imagem confocal de murganhos transplantados com células específicas de OVA T CD4 + colonizadas com E. coli PCP-OVA, mostram que CX 3 CR1 + MPs estão em contacto com células AT-II T CD4 + durante o desenvolvimento de colite conduzido pelo antigénio. Este modelo permite o estudo do processo de apresentação de antigénio entre as APCs e as células intestinais T específicas apenas para determinadas bactérias que expressam os antigénios no lúmen do intestino.

<table><tbody><tr><td>LB Broth, Miller (Luria-Bertani)</td><td>Difco</td><td>244620</td><td></td></tr><tr><td>Agitação Rotativa</td><td>Reiss Laborbedarf e. K.</td><td>Modelo 3020 GFL</td><td></td></tr><tr><td>2 mm gap couvettes&nbsp;</td><td>Peqlab Biotechnologie GmbH</td><td>71-2020</td><td></td></tr><tr><td>Glycerol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G5516-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Gene Pulser Xcell system&nbsp;</td><td>BioRad Laboratories GmbH</td><td>1652660</td><td></td></tr><tr><td>LB Agar, Miller (Luria-Bertani)</td><td>Difco</td><td>244510</td><td></td></tr><tr><td>Ampicilina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9393-5G</td><td></td></tr><tr><td>SOC Medium</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S1797-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Kit de isolamento de plasmídeo de alta pureza</td><td>Roche</td><td>11754777001</td><td></td></tr><tr><td>Agarose</td><td>Carl Roth GmbH & Co</td><td>3810.1</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E9884-100G</td><td></td></tr><tr><td>Tris-HCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T5941</td><td></td></tr><tr><td>Ácido acético glacial</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>537020&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Câmara de gel&nbsp;</td><td>PEQLAB Biotechnology GmbH</td><td>40-0708</td><td></td></tr><tr><td>Corante de Carregamento</td><td>Thermo Fisher</td><td>R0611</td><td></td></tr><tr><td>GeneRuler 1 kb DNA Ladder&nbsp;</td><td>Thermo Fisher</td><td>SM0312</td><td></td></tr><tr><td>Solução de brometo de etídio</td><td>Carl Roth GmbH & Co. KG</td><td>2218.3</td><td></td></tr><tr><td>Sistema de documentação fotográfica</td><td>Decon Science Tech GmbH</td><td>DeVision G&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Sequenciamento de DNA&nbsp;</td><td>MWG-Biotech GmbH</td><td></td><td></td></tr> Microscópio fluorescente <tr><td>com tampão fosfato (PBS)</td><td>Biochrom</td><td>L182-50</td><td></td></tr><tr><td></td><td>Zeiss</td><td>HBO 100</td><td></td></tr><tr><td>Mini-PROTEAN Tetra System</td><td>Bio-Rad Laboratories GmbH</td><td>1658005</td><td></td></tr><tr><td>PageRuler Escada de Proteína Prestada&nbsp;</td><td>Fermentas, St. Leon-Rot, Alemanha</td><td></td><td></td></tr><tr><td>IstanBlue Solution</td><td>Expedeon, Cambridgeshire, Reino Unido</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Membrana de nitrocelulose</td><td>Macherey-Nagel GmbH & Co. KG</td><td>741280</td><td></td></tr><tr><td>Eletro-mata-borrão&nbsp;</td><td>Biometra GmbH</td><td>846-015-600</td><td></td></tr><tr><td>Albuminas de Soro Bovino (BSA)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A6003-25G</td><td></td></tr><tr><td>Anti-Ovalbumina anticorpo&nbsp;</td><td>Abcam</td><td>ab181688</td><td></td></tr><tr><td>Anti-coelho IgG&nbsp; HRP</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A0545&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Substrato de Blotting Western Pierce ECL Plus</td><td>Pierce Biotechnology, Thermo Fischer Scientific Inc</td><td>32132</td><td></td></tr><tr><td>Forene</td><td>Abbott</td><td>2594.00.00</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>Invitrogen</td><td>10500-064</td><td></td></tr><tr><td>Filtros de Células Falcon</td><td>Fischer Scientific&nbsp;</td><td>08-771-2</td><td></td></tr><tr><td>Cloreto de amônio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>254134-5G</td><td></td></tr><tr><td>Tris Base</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>10708976001</td><td></td></tr><tr><td>CD4+ CD62 L+ Kit de isolamento T&nbsp;</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-093-227&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Colunas MACS LS&nbsp;</td><td>Colunas Miltenyi Biotec</td><td>130-042-401</td><td></td></tr><tr><td>MACS MS&nbsp;</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-201</td><td></td></tr><tr><td>Separador MidiMACS</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-302</td><td></td></tr><tr><td>Separador MiniMACS</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-102</td><td></td></tr><tr><td>MACS MultiStand</td><td>Miltenyi Biotec</td><td>130-042-303</td><td></td></tr><tr><td>Agulha de alimentação 20G</td><td>SouthPointe Surgical Supply, Inc</td><td>FN-7903</td><td></td></tr><tr><td>Solução de formalina, neutra tamponado, 10%</td> <td>Sigma-Aldrich</td><td>HT501128</td><td></td></tr><tr><td>Parafina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>1496904</td><td></td></tr><tr><td>Hematoxilina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>H9627</td><td></td></tr><tr><td>Eosina Y</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>230251&nbsp;</td><td></td></tr><tr><td>Ditiotreitol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D9779</td><td></td></tr><tr><td>Colagenase tipo VIII</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C-2139</td><td></td></tr><tr><td>Roswell Park Memorial Institute (RPMI) medium</td><td>AppliChem</td><td>A2044, 9050</td><td></td></tr><tr><td>Azida de sódio</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>438456</td><td></td></tr><tr><td>Mouse BD Fc Block</td><td>BD Pharmingen</td><td>553141</td><td></td></tr><tr><td>Ligação mAb conjugada com FITC V&szlig; 5.1, 5.2&nbsp;</td><td>BD Pharmingen</td><td>553189</td><td></td></tr> ligação de <tr><td>mAb conjugada com APC CD4 GK1.5&nbsp;</td><td>eBioscience</td><td>17-0041-83</td><td></td></tr><tr><td>FACS Calibur&nbsp;</td><td>Software BD Biosciences</td><td></td><td></td></tr><tr><td>FCS Express V3</td><td>DeNovo</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Microscópio confocal de varredura Meta&nbsp;</td><td>Zeiss</td><td>LSM 710</td><td></td></tr><tr><td>Estação de trabalho Zeiss</td><td>Zeiss</td><td>LSM 7</td><td></td></tr><tr><td>Software Zeiss ZEM&nbsp;</td>Placas imunológicas <td>Zeiss</td><td>v4.2.0.121</td><td></td></tr><tr><td>Maxisorp&nbsp;</td><td>NUNC, Roskilde</td><td>442404</td><td></td></tr><tr><td>Estreptavidin fosfatase alcalina conjugada</td><td>Jackson Immuno Research</td><td>016-050-084</td><td></td></tr><tr><td>Substrato de fosfatase alcalina 4-Nitrofenil fosfato dissódico sal hexahidratado</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>71768-5G</td><td></td></tr><tr><td>mAb R4-6A2</td><td>BD Biosciences</td><td>551216</td><td></td></tr><tr><td>mAb XMG1.2&nbsp;</td><td>BD Biosciences</td><td>554410</td><td></td></tr><tr><td>TECAN microplaca-ELISA</td> leitor <td>Tecan</td><td></td><td></td></tr><tr><td>EasyWin software</td><td>Tecan</td><td></td><td></td></tr><tr><td>DNase I 4536282001</td><td></td><td></td> recombinante <td></td></tr></tbody></table>

desenvolvimento de uma colite modelo antigen-driven para o estudo de apresentação de antígenos por células apresentadoras de antígenos às células t

Development of an Antigen-driven Colitis Model to Study Presentation of Antigens by Antigen Presenting Cells to T Cells

A doença inflamatória intestinal (DII) é uma inflamação crônica que afeta o trato gastrointestinal (TGI). Uma das melhores maneiras de estudar os mecanismos imunológicos envolvidos durante a doença é o modelo de transferência de células T da colite. Neste modelo, camundongos imunodeficientes (receptores RAG-/-) são reconstituídos com células T CD4+ virgens de hospedeiros saudáveis do tipo selvagem.
Este modelo permite o exame dos primeiros eventos imunológicos que levam à doença e inflamação crônica, quando a inflamação intestinal se perpetua, mas não depende de um antígeno definido. Para estudar o papel potencial das células apresentadoras de antígenos (APCs) no processo da doença, é útil ter um modelo de doença orientado por antígeno, no qual um antígeno derivado de comensal definido leva à colite. Um modelo de colite conduzida por antígeno foi, portanto, desenvolvido. Neste modelo, as células T OT-II CD4 +, que podem reconhecer apenas epítopos específicos na proteína OVA, são transferidas para hospedeiros RAG-/- desafiados com E. coli que expressa CFP-OVA. Este modelo permite o exame das interações entre APCs e células T na lâmina própria.

Para estabelecer um modelo de colite-driven antígeno um E. coli Foi construído um plasmídeo que contém na qual o gene para a PCP é fundido à sequência de codificação para a proteína de ovalbumina de galinha e a construção de fusão é expressa sob o controlo do promotor forte constitutivo hiper P (Figura 1A). Microscopia de fluorescência demonstra que a E. recombinante coli pCFP-OVA, mas não a de E. parenta...

Neste modelo de colite dirigida por antígeno, as células T OT-II CD4+ que expressam uma proteína fluorescente vermelha foram transferidas adotivamente para camundongos RAG-/- que expressam uma proteína fluorescente verde em fagócitos mononucleares (MPs). Os hospedeiros foram desafiados com Escherichia coli (E.coli) expressando a proteína ovalbumina (OVA) fundida a uma proteína fluorescente ciano (CFP).

Desenvolvimento de uma colite Modelo Antigen-driven para o Estudo de apresentação de antígenos por células apresentadoras de antígenos às células T

Inflammatory bowel disease (IBD) is a chronic inflammation which affects the gastrointestinal tract (GIT). One of the best ways to study the immunological ...

O objetivo geral deste modelo de colite induzida por antígeno é determinar se fagócitos mononucleares positivos para CX3CR1 interagem com e ativam linfócitos T CD4 positivos durante a colite específica para antígeno e se essa expansão de linfócitos T efetores dependente de fagócitos mononucleares ocorre na lâmina própria intestinal. Este método pode ajudar a responder perguntas fundamentais na área das doenças inflamatórias intestinais, como quais tipos de interação ocorrem entre células apresentadoras de antígenos e linfócitos T efetores na lâmina própria do cólon. A principal vantagem desta técnica é que ela permite o estudo da interação entre células imunes e dos elementos que levam à patogenicidade da doença inflamatória intestinal.Este método utiliza o modelo de colite por transferência de células T, no qual linfócitos T CD4 naïve específicos por antígeno, marcados com fluorescência vermelha, são transferidos para um hospedeiro imunodeficiente que expressa a proteína verde fluorescente em células mononucleares. Após a transferência celular, realiza-se a gavagem oral com bactérias que expressam antígeno marcado com fluorescência azul. Os eventos imunológicos que ocorrem na lâmina própria intestinal dos hospedeiros podem ser monitorados em diversas fases do desenvolvimento da doença.Use uma tesoura de dissecação para abrir o cólon longitudinalmente e lave o tecido em uma placa de Petri contendo 25 mililitros de PBS para remover qualquer detrito e muco. Corte o cólon em pedaços de cinco a oito milímetros e coloque os fragmentos resultantes em 20 mililitros de DPBS fresco sem cálcio e magnésio, suplementado com 10 milimolares de HEPES e 5 milimolares de EDTA. Vortexe o tubo com a amostra por 30 segundos na velocidade máxima.Em seguida, incubar a 37 graus Celsius por dez minutos com agitação suave para remover o epitélio. Ao final da incubação, vortexar novamente por 30 segundos. Depois disso, descartar o sobrenadante contendo as células epiteliais.Transfira os fragmentos de tecido para um novo tubo contendo 20 mililitros de tampão PBS, HEPES e EDTA fresco, e repita a incubação com os passos de vortexação antes e depois. Após a terceira repetição, todas as células epiteliais são removidas e o sobrenadante fica claro. Lave suavemente os fragmentos de tecido em PBS para remover quaisquer células epiteliais residuais.Corte os fragmentos de tecido em pedaços de dois por dois milímetros e transfira-os para digestão em dez mililitros de meio RPI, suplementado com 0,5 miligramas por mililitro de colagenase tipo oito e dez unidades por mililitro de DNAse um. Vortexe as amostras por 30 segundos. Em seguida, incube os fragmentos de tecido a 37 graus Celsius com agitação por 30 a 35 minutos, vortexando o tubo a cada cinco minutos durante a incubação.Quando o tecido estiver digerido, filtre a suspensão resultante através de um filtro celular de 70 mícrons para um tubo cônico de 50 mililitros. Lave o filtro celular uma vez e centrifugue a suspensão de células isoladas. Por fim, lave as células uma vez com PBS e centrifugue.Em seguida, determine o número de células viáveis pelo método de exclusão com azul de tripano. A proteína ovalbumina com proteína fluorescente ciano produzida por e. coli ativa a produção de interferon gama em células OT-II in vitro, em contraste com e.coli que expressam apenas CFP. A imagem confocal tridimensional ex vivo do tecido colônico de camundongos transgênicos que expressam proteína verde fluorescente, alimentados com ovos de E. coli PCFP, demonstra a presença de bactérias que expressam a proteína fluorescente dentro das criptas colônicas próximas às células epiteliais intestinais e co-localizadas com os fagócitos intestinais do hospedeiro.Em animais OT-II vermelhos, os linfócitos T positivos para CD4 são caracterizados pela sua coexpressão da proteína fluorescente vermelha e do V beta cinco ponto um. Quando desafiados com E. coli PCFP ova, camundongos transgênicos deficientes em linfócitos BNT e que expressam proteína fluorescente verde, os quais foram transplantados adotivamente com linfócitos T positivos para CD4 OT-II vermelhos e positivos para ligante CD62, perdem rapidamente peso corporal e desenvolvem sinais clínicos de colite.Sete dias após a transferência das células, apenas alguns fagócitos do hospedeiro ingeriram ovas de e. coli PCFP e células OT-II vermelhas positivas não são detectadas. Quatorze dias após a transferência das células, fagócitos do hospedeiro que ingeriram o e.Os ovos de PCFP de e. coli estão localizados em estreita proximidade com as células OT-II vermelho positivas transferidas adotivamente. Vinte e um dias após a transferência celular, um grande número de células hospedeiras já amostrou os ovos de PCFP de e. coli e as células doadoras OT-II vermelho positivas, que são encontradas dispersas por toda a lâmina própria do cólon, estão em contato próximo com os fagócitos intestinais do hospedeiro.Quando dominada, esta técnica pode ser concluída em quatro horas, se realizada corretamente. Após este procedimento, outros métodos, como a coloração dos linfócitos intestinais e a análise de citocinas no soro, podem ser realizados para responder perguntas adicionais sobre o estado de ativação dos linfócitos T CD4 e para confirmar a gravidade da colite. Após cada avanço, esta técnica abre caminho para pesquisas na área de imunologia, permitindo explorar os pequenos eventos que levam à doença inflamatória intestinal no modelo murino.Após assistir a este vídeo, você deverá ter uma boa compreensão de como isolar células imunes da lâmina própria colônica para análise ex vivo subsequente.

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Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

Imunologia e Infecção

Aqui, nós detalhe uma metodologia para o isolamento rápido de células de ratinho intestinais dendríticas (DC) e macrófagos. Caracterização fenotípica de DCs intestinais e macrófagos é realizada utilizando várias cores análise de fluxo citométrico enquanto enriquecimento grânulo magnético seguido por separação de células é usado para produzir populações altamente puros para estudos funcionais.

Isolamento e caracterização de células dendríticas e macrófagos a partir do intestino do rato

Este vídeo demonstra uma técnica para gerar um modelo murino de colite induzido por produtos químicos - uma doença inflamatória intestinal. O camundongo pode consumir uma solução de sulfato de sódio dextrano (DSS) por um período adequado. Após o consumo, o DSS danifica o muco e a barreira da camada epitelial no cólon, permitindo que os micróbios intestinais entrem no tecido subjacente - onde são detectados pelas células imunes residentes para mediar uma resposta imune exagerada, resultando em...

Uma técnica para gerar um modelo murino de colite induzida por sulfato de dextrano e sódio

DNBS / colite induzida por TNBS oferece um método alternativo e de baixo custo para estudar a fisiopatologia das doenças inflamatórias do intestino. O protocolo discutidos neste documento descreve a aplicação bem-sucedida de DNBS para induzir colite em camundongos e ratos e permite estudar minuciosamente respostas intestinais com hospedeiros.

DNBS / TNBS Colite Modelos: elucidando sua Doença Inflamatória Intestinal e Efeitos de gordura na dieta

Aqui, apresentamos um protocolo para induzir inflamação colônica em camundongos por transferência adotiva de células Taltas CD4+CD45RB singênicas para receptores deficientes em células T e B. As características clínicas e histopatológicas mimetizam as doenças inflamatórias intestinais humanas. Este método permite o estudo do início da inflamação colônica e da progressão da doença.

Indução de Murino inflamação intestinal por transferência adotiva de Effector CD4<sup&gt; +</sup&gt; CD45RB<sup&gt; Alta</sup&gt; Células T em imunodeficientes Mice

Subconjuntos distintos de células dendríticas existem como populações raras em órgãos linfóides e, portanto, são difíceis de isolar em número e pureza suficientes para experimentos imunológicos. Aqui descrevemos um método de alta eficiência e alto rendimento para isolamento de todos os principais subconjuntos atualmente conhecidos de células dendríticas esplênicas de camundongos.

Um método de rendimento eficiente e alta para o isolamento de subpopulações de células dendríticas Rato

Descrevemos aqui um modelo de camundongo repórter transgênico para visualizar as células produtoras de IL-22 dentro de diferentes tecidos de camundongos. Este método pode ser usado para rastrear a localização de outras citocinas ou proteínas secretas no camundongo.

Visualização de IL-expressando-22 Linfócitos Usando ratos repórter

Murino colostomia distal fornece um modelo murino para colite de diversão humana, uma colite linfocítica predominantemente no segmento de cólon excluído do fluxo fecal.

Murino colostomia Distal, um novo modelo de colite de diversão em camundongos C57BL/6

O protocolo apresenta um modelo completo de murina induzida por TNBS da doença de Crohn e métodos para visualização de receptores de estrogênio por imunohistoquímica usando imunofluorescência de seções de cólon fixas de formalina embutidas em parafina.

Visualização de receptores de estrogênio em cólons de camundongos com doença de Crohn induzida pelo TNBS usando imunofluorescência

Neste protocolo, é descrito um modelo de colite de transferência de células T específica de microbiota intestinal. As células T CD4+ são isoladas de camundongos transgênicos CBir1 TCR. Estes são específicos para um antígeno de microbiota intestinal imunodominante CBir1 flagellin, que é transferido para camundongos Rag1-/- receptores, levando à inflamação intestinal.

Indução da Inflamação Intestinal por Transferência Adotiva de Células CD4+ T Transgênicas CBir1 T para camundongos imunodeficientes

Um método novo CD independente para indução e expansão de células T antígeno-específicos é descrito. HLA A2-Ig baseada Células Antigen Presenting artificial (AAPC) são carregados com HLA-A2 peptídeos restrito a expandir de forma eficiente CTL de especificidade do antígeno diversas. Esta tecnologia tem um grande potencial para CTL baseada imunoterapia adotiva.

HLA-Ig Baseado Artificial células apresentadoras de antígenos para a eficiente Ex vivo Ampliação da CTL Humanos

Aprenda a desenvolver um modelo de colite antigen-driven para estudar a apresentação de antígenos por fagócitos mononucleares CX3CR1+ às células T CD4+ na lâmina própria intestinal. Este método permite monitorar eventos imunes durante a progressão da doença inflamatória intestinal.

Desenvolvimento de uma colite Modelo Antigen-driven para o Estudo de apresentação de antígenos por células apresentadoras de antígenos às células T (Vídeo) | JoVE Journal

Desenvolvimento de uma colite Modelo Antigen-driven para o Estudo de apresentação de antígenos por células apresentadoras de antígenos às células T

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