Name: Visualização de Variações do ciclo celular e Determinação de Nucleação no pós-natais Cardiomyocytes (Vídeo) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-02-24T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 41 s
Description: Aprenda a visualizar atividade do ciclo celular em cardiomiócitos pós-natais usando linhagens transgênicas de camundongos. Este método permite distinguir divisão celular de variações de ploidia com alta resolução.

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Agradecemos a S. Grünberg (Bonn, Alemanha) e P. Freitag (Bonn, Alemanha) por sua assistência técnica.

<ol><li>Bergmann, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Evidence+for+cardiomyocyte+renewal+in+humans%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Evidence for cardiomyocyte renewal in humans.</a> Science. 324 (5923), 98-102 (2009).</li>
<li>Raulf, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transgenic+systems+for+unequivocal+identification+of+cardiac+myocyte+nuclei+and+analysis+of+cardiomyocyte+cell+cycle+status%5BTitle%5D)+AND+%22Basic+Res.Cardiol%22%5BJournal%5D)">Transgenic systems for unequivocal identification of cardiac myocyte nuclei and analysis of cardiomyocyte cell cycle status.</a> Basic Res.Cardiol. 110 (3), 33(2015).</li>
<li>Field, C. M., Alberts, B. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Anillin%2C+a+contractile+ring+protein+that+cycles+from+the+nucleus+to+the+cell+cortex%5BTitle%5D)+AND+%22J.Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Anillin, a contractile ring protein that cycles from the nucleus to the cell cortex.</a> J.Cell Biol. 131 (1), 165-178 (1995).</li>
<li>Hesse, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Direct+visualization+of+cell+division+using+high-resolution+imaging+of+M-phase+of+the+cell+cycle%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.Commun%22%5BJournal%5D)">Direct visualization of cell division using high-resolution imaging of M-phase of the cell cycle.</a> Nat.Commun. 3, 1076(2012).</li>
<li>Eulalio, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+screening+identifies+miRNAs+inducing+cardiac+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Functional screening identifies miRNAs inducing cardiac regeneration.</a> Nature. 492 (7429), 376-381 (2012).</li>
<li>Di, S. V., Giacca, M., Capogrossi, M. C., Crescenzi, M., Martelli, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Knockdown+of+cyclin-dependent+kinase+inhibitors+induces+cardiomyocyte+re-entry+in+the+cell+cycle%5BTitle%5D)+AND+%22J.Biol.Chem%22%5BJournal%5D)">Knockdown of cyclin-dependent kinase inhibitors induces cardiomyocyte re-entry in the cell cycle.</a> J.Biol.Chem. 286 (10), 8644-8654 (2011).</li>
<li>Hosoda, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Clonality+of+mouse+and+human+cardiomyogenesis+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A%22%5BJournal%5D)">Clonality of mouse and human cardiomyogenesis in vivo.</a> Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A. 106 (40), 17169-17174 (2009).</li>
<li>Soonpaa, M. H., Field, L. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+cardiomyocyte+DNA+synthesis+in+normal+and+injured+adult+mouse+hearts%5BTitle%5D)+AND+%22Am.J.Physiol%22%5BJournal%5D)">Assessment of cardiomyocyte DNA synthesis in normal and injured adult mouse hearts.</a> Am.J.Physiol. 272 (1 Pt 2), H220-H226 (1997).</li>
<li>Ang, K. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Limitations+of+conventional+approaches+to+identify+myocyte+nuclei+in+histologic+sections+of+the+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Am.J.Physiol+Cell+Physiol%22%5BJournal%5D)">Limitations of conventional approaches to identify myocyte nuclei in histologic sections of the heart.</a> Am.J.Physiol Cell Physiol. 298 (6), C1603-C1609 (2010).</li>
<li>Engel, F. B., Schebesta, M., Keating, M. T. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/16889791">Anillin localization defect in cardiomyocyte binucleation.</a> J Mol Cell Cardiol. 41 (4), 601-612 (2006).</li>
<li>Bergmann, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamics+of+Cell+Generation+and+Turnover+in+the+Human+Heart%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Dynamics of Cell Generation and Turnover in the Human Heart.</a> Cell. 161 (7), 1566-1575 (2015).</li>
</ol>

Os autores declaram que não têm interesses financeiros concorrentes.

Há uma controvérsia sobre se os cardiomiócitos são capazes de reentrar no ciclo celular e dividir após a lesão e durante a homeostase do tecido. Os valores para o volume de base de cardiomiócitos foram dadas no intervalo entre 1% e 1 80% 7. Também após uma lesão cardíaca, a indução da actividade do ciclo celular e a geração de novos cardiomiócitos tem sido relatado na zona de fronteira, com valores entre 0,0083% 8 e 25 - 40% 7.</su...

A correta identificação dos núcleos dos cardiomiócitos e o estado do ciclo celular é de importância crucial para a determinação do volume de negócios do músculo cardíaco e regeneração. Isto é especialmente verdadeiro para a utilização de marcadores nucleares, tal como pHH3, Ki-67, ou análogos de timidina, para identificar actividade do ciclo celular. Como a capacidade proliferativa dos cardiomiócitos de mamíferos adultos é muito pequeno 1, uma falsa identificação de um núcleo positivo para um marcador de proliferação de um núcleo de cardiomiócitos pode fazer uma diferença fundamental no resultado de um ensaio de proliferação. Além disso, os cardiomiócitos são propensos a variações no ciclo celular, tais como a endo-reduplicação e mitose acytokinetic, o que resulta em células poliplóides e multinucleadas em vez de na divisão celular. Para este fim, a interpretação de coloração de anticorpos contra marcadores do ciclo celular comuns não são conclusivas em todos os casos. Aqui, apresentamos métodos para o straight-forwa<html> Rd reconhecimento de cardiomiócitos de rato e a sua nuclearidade em células isoladas nativas e secções de tecido de espessura em fases pós-natal e adulto por a identificação inequívoca dos seus núcleos. Para esse efeito, uma linha de ratinhos transgénicos com expressão específica de cardiomiócitos de uma proteína de fusão que consiste de histona H2B humana e mCherry sob o controlo do promotor Myh6 (Myh6-H2B-MCH) foi usada 2. Cruzamentos esta linha de rato com uma linha de ratinhos indicador de proliferação transgénico, em que a expressão de uma proteína de fusão EGFP-anillin está sob o controlo do promotor de frango actina ubíqua com um intensificador de CMV (CAG-eGFP-anillin), permite a determinação do estado do ciclo celular. A proteína anillin andaime é especificamente expresso em células do ciclo celular activas 3, e a sua localização subcelular diferencial durante o ciclo celular permite a progressão do ciclo celular, o rastreio ao vivo com uma alta resolução de fase MEF &quot;&gt; 4. Por conseguinte, os ratinhos transgénicos dupla pode ser utilizado para discriminar entre proliferantes cardiomiócitos e aqueles que sofrem variações do ciclo celular. Isto prova especialmente úteis no rastreio de substâncias indutoras de proliferação in vitro.

<table><tbody><tr><td>Placa de Petri de 10 cm</td><td>Sarstedt</td><td>821472</td><td></td></tr><tr><td>100 &micro; filtro de células m</td><td>Becton Dickinson GmbH/Falcon</td><td>352360</td><td></td></tr><tr><td>Monóxido de 2,3-butanodiona (BDM)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>B0753</td><td></td></tr><tr><td>G20x1 &frac12; cânula de injeção, Sterican</td><td>Braun, Melsungen</td><td>4657519</td><td></td></tr><tr><td>agulha de calibre 20</td><td>Becton Dickinson GmbH</td><td>301300</td><td></td></tr><tr><td>Placas de 24 poços</td><td>Becton Dickinson GmbH/Falcon</td><td>353047</td><td></td></tr><tr><td>2-Metil-butano</td><td>Carl Roth GmbH + Co. KG</td><td>3927.1</td><td></td></tr><tr><td>Solução de formaldeído a 37%</td><td>AppliChem GmbH&nbsp;</td><td>A0936,1000</td><td></td></tr><tr><td>torneira de 3 vias</td><td>B. Braun Medical Inc.</td><td>Seringa 16494C</td><td></td></tr> de <tr><td>50 mL</td><td>B. Braun Medical Inc.</td><td>8728810F</td><td></td></tr><tr><td>70% etanol</td><td>Otto Fischar GmbH</td><td>27669</td><td></td></tr><tr><td>Anticorpo secundário conjugado com Alexa-Fluor</td><td>Jackson ImmunoResearch</td><td>115-605-205</td><td></td></tr><tr><td>Alfa-Aktinina EA-53, IgG de camundongo</td><td>Sigma-Aldrich, Steinheim</td><td>A7811</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C4901</td><td></td></tr><tr><td>Microplaca de cultura de células, 96 poços, Half Area</td><td>Greiner bio-one</td><td>675986</td><td></td></tr><tr><td>Collagenase B</td><td>Roche</td><td>11088815001</td><td></td></tr><tr><td>microscópio confocal Eclipse Ti-E</td><td>Nikon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>cryostat CM 3050S</td><td>Soro de burro Leica</td><td></td><td></td></tr><tr><td></td><td>Jackson Immuno Research, Suffolk, GB</td><td>017-000-121</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco's Phosphate Buffered Saline</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D8537</td><td></td></tr><tr><td>EDTA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>E4884</td><td></td></tr><tr><td>soro fetal para bezerros</td><td>PromoCell,</td> solução de formaldeído Heidelberg <td></td><td></td></tr><tr><td>(4%)</td><td>PanReac AppliChem</td><td>A3697</td><td></td></tr><tr><td>Gelatina de pele suína, Tipo A</td><td>Sigma-Aldrich, lamínulas de vidro Steinheim</td><td>G2500</td><td></td></tr><tr><td></td><td>VWR</td><td>631-0146</td><td></td></tr><tr><td>Tubo</td><td>de extensão Glucose Sigma-Aldrich</td><td>G7021</td><td></td></tr><tr><td>Heidelberger</td><td>IMPROMEDIFORM GmbH</td><td>MF 1833</td><td></td></tr><tr><td>Heparina-Natrium</td><td>Ratiopharm</td><td>5394.02.00</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Lâminas de microscópio Sigma-Aldrich</td><td>H3375</td><td></td></tr><tr><td>HistoBond</td><td>Marienfeld</td><td>0810000</td><td></td></tr><tr><td>Hoechst 33342 (1&nbsp; mg/mL)</td><td>Sigma Aldrich, Taufkirchen</td><td>B2261</td><td></td></tr><tr><td>Seringa de insulina</td><td>Becton Dickinson GmbH</td><td>300334</td><td></td></tr><tr><td>Iscove' s ModificadoDulbecco' s Medium (IMDM)</td><td>Gibco/Life Technologies, Darmstadt</td><td>21980-032</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P9333</td><td></td></tr><tr><td>Laminin</td><td>Corning</td><td>354221</td><td></td></tr><tr><td>Laser Scanning Mikroskop Eclipse Ti</td><td>Nikoninstruments, D&uuml; sseldorf</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Lipofectamine RNAiMAX</td><td>Invitrogen/Life Technologies, Darmstadt</td><td>13778075</td><td></td></tr><tr><td>Mouse IgG Cy5 (burro)</td><td>Jackson ImmunoResearch</td><td>715-175-151</td><td></td></tr><tr><td>MgCl2</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M8266</td><td></td></tr><tr><td>tubo de microcentrífuga</td><td>Sarstedt</td><td>72690</td><td></td></tr><tr><td>Mini shaker</td><td>VWR</td><td>12620-940</td><td></td></tr><tr><td>miRNA mirVana mimic, has-miR199a-3p</td><td>Ambion/Thermo Fischer Scientific</td><td>4464066</td><td></td></tr><tr><td>Biopsy Mold</td><td>Sakura Finetek/ VWR</td><td>4565</td><td></td></tr><tr><td>M-slide 8-well ibiTreat</td><td>ibidi</td><td>80826</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S9888</td><td></td></tr><tr><td>NaOH</td><td>Merck Millipore</td><td>567530</td><td></td></tr><tr><td>negativo controle(RNA embaralhado)</td><td>Ambion/Thermo Fischer Scientific</td><td>AM4611</td><td></td></tr><tr><td>Kit de Dissociação Cardíaca Neonatal</td><td>Miltenyi Biotech, Bergisch Gladbach</td><td>130-098-373</td><td></td></tr><tr><td>NIS Elements AR 4.12.01-4.30.02-64bit</td><td>Nikoninstruments, D&uuml; sseldorf</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Aminoácidos não essenciais, NEAA</td><td>Gibco / Life Technologies, Darmstad</td><td>11140-035</td><td></td></tr><tr><td>Opti-MEM, Soro Reduzido Meio</td><td>Gibco</td><td>51985-026</td><td></td></tr><tr><td>P21-siRNA</td><td>Ambion / Thermo Fischer Scientific</td><td>4390771</td><td></td></tr><tr><td>P27-siRNA</td><td>Ambion / Thermo Fischer Scientific</td><td>4390771</td><td></td></tr><tr><td>Penicilina / Estreptomicina</td><td>Gibco/Life Technologies, Darmstadt</td><td>15140-122</td><td></td></tr><tr><td>Solução salina tamponada com fosfato (PBS)</td><td>Sigma-Aldrich, Steinheim</td><td>14190-094</td><td></td></tr><tr><td>Meio de montagem de álcool polivinílico com DABCO&reg;, antidesvanecimento</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>10981</td><td></td></tr><tr><td>RNase A</td><td>Qiagen</td><td>1007885</td><td></td></tr><tr><td>RNaseZap</td><td>Invitrogen/Life Technologies, Darmstadt</td><td>AM9780</td><td></td></tr><tr><td>recipientes de amostra</td><td>Vitlab</td><td>80731</td><td></td></tr><tr><td>Pipeta sorológica</td><td>Greiner</td><td>607180</td><td></td></tr><tr><td>software NIS Elements</td><td>Nikon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Sacarose</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S0389</td><td></td></tr><tr><td>Tissue-Tek O.C.T. Composto</td><td>Sakura Finetek/ VWR</td><td>25608-930</td><td></td></tr><tr><td>ToPro3 iodeto (642/661)</td><td>Molecular sondas/ThermoFisher Scientific</td><td>T3605</td><td></td></tr><tr><td>Tris</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T1503</td><td></td></tr><tr><td>Triton X</td><td>Fluka</td><td>93418</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Fluka</td><td>93418</td><td></td></tr><tr><td>Tripsina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T1426</td><td></td></tr><tr><td>Aglutinina de gérmen de trigo (WGA) Fluoresceína marcada</td><td>Vector Laboratories</td><td>VEC-FL-1021-5</td><td></td></tr><tr><td>anticorpo &alfa;-actinina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A7811</td><td></td></tr><tr><td>&beta;-mercaptoetanol</td><td>Sigma-Aldrich, Steinheim</td><td>M3148</td><td></td></tr></tbody></table>

visualização de variações do ciclo celular e determinação de nucleação no pós-natais cardiomyocytes

Visualization of Cell Cycle Variations and Determination of Nucleation in Postnatal Cardiomyocytes

Os cardiomiócitos são propensos a variações do ciclo celular, como endoreduplicação (rodadas contínuas de síntese de DNA sem cariocinese e citocinese) e mitose acitocinética (cariocinese, mas sem citocinese). Tais variações atípicas do ciclo celular resultam em células poliplóides e multinucleadas, em vez de divisão celular. Portanto, para determinar a renovação e regeneração cardíaca, é de crucial importância identificar corretamente os núcleos dos cardiomiócitos, o número de núcleos por célula e seu estado no ciclo celular. Isso é especialmente verdadeiro para o uso de marcadores nucleares para identificar a atividade do ciclo celular, como análogos da timidina Ki-67, PCNA ou pHH3. Aqui, apresentamos métodos para reconhecer cardiomiócitos e sua nuclearidade e para determinar sua atividade do ciclo celular. Usamos dois sistemas transgênicos publicados: a linha de camundongos transgênicos Myh6-H2B-mCh, para a identificação inequívoca de núcleos de cardiomiócitos, e a linha de camundongos CAG-eGFP-anilina, para distinguir a divisão celular das variações do ciclo celular. Combinados, esses dois sistemas facilitam o estudo da regeneração cardíaca e da plasticidade.

De modo a analisar os efeitos dos siRNAs / miARNs sobre a actividade do ciclo celular de cardiomiócitos pós-natal in vitro, os cardiomiócitos de ratos Myh6-H2B-MCH / CAG-eGFP-anillin duplo-transgénicos foram isolados no dia pós-natal 3 (P3) e transfectadas com actividade indutora de miR199 5, p27 siRNA, e siRNA Fzr1 ciclo celular. Em comparação com o controlo negativo (Figura 1A), as imagens de miR199- (Figura 1B) e p27- ...

Para distinguir a divisão celular das variações do ciclo celular em cardiomiócitos, apresentamos protocolos usando duas linhagens de camundongos transgênicos: camundongos transgênicos Myh6-H2B-mCh, para a identificação inequívoca de núcleos de cardiomiócitos, e camundongos CAG-eGFP-anilina, para distinguir a divisão celular das variações do ciclo celular.

Visualização de Variações do ciclo celular e Determinação de Nucleação no pós-natais Cardiomyocytes

Cardiomyocytes are prone to variations of the cell cycle, such as endoreduplication (continuing rounds of DNA synthesis without karyokinesis and ...

O objetivo geral deste procedimento é visualizar a atividade do ciclo celular em cardiomiócitos pós-natais e determinar sua nuclearidade. Este método pode ajudar a responder perguntas fundamentais na área de regeneração cardíaca, como por exemplo: um cardiomiócito realmente se divide ou simplesmente aumenta sua ploidia ou se torna multinucleado? As principais vantagens desta técnica são a possibilidade de visualizar a fase M do ciclo celular com alta resolução espaciotemporal e a identificação dos núcleos de cardiomiócitos por fluorescência.Quem demonstrará o procedimento será Patricia Freitag, uma técnica do nosso laboratório. Se forem utilizados pares de cruzamento não homozigóticos, identifique primeiro os corações transgênicos por meio de microscopia fluorescente para verificar a expressão de EGFP analina e H2B-mCherry. Os sinais nucleares de EGFP analina podem ser detectados mais facilmente nas bordas das aurículas, focando através das camadas do tecido.Para isolar os cardiomiócitos, coloque o número apropriado de corações em tubos de reação de 1,5 mililitro contendo um mililitro da mistura enzimática de um kit de dissociação de coração neonatal e corte os corações em pequenos

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Research

JoVE Journal

Developmental Biology

Biologia do Desenvolvimento

Nós estabelecemos um protocolo para indução de cardioblasts direta de pluripotentes células estaminais embrionárias humanas mantidas sob condições definidas com pequenas moléculas, que permite a derivação de uma grande oferta de recursos humanos progenitores cardíaca e funcional cardiovascular cardiomiócitos para reparação.

Derivação eficiente dos recursos humanos Precursores cardíaca e Cardiomyocytes pluripotentes a partir de células estaminais embrionárias humanas com a indução de moléculas pequenas

Núcleos cardíaca são isolados através de sedimentação densidade e immunolabeled com anticorpos contra o material pericentriolar 1 (PCM-1) para identificar e classificar os núcleos dos cardiomiócitos por citometria de fluxo.

Isolamento dos núcleos dos cardiomiócitos a partir de Post-mortem de tecidos

O artigo descreve a metodologia detalhada para diferenciar de forma eficiente as células estaminais pluripotentes em cardiomiócitos de modular selectivamente a via Wnt, seguido por análise de citometria de fluxo de marcadores de referência para avaliar a homogeneidade e a identidade da população.

Diferenciação de alta eficiência de pluripotentes humanas células-tronco para Cardiomyocytes e Caracterização por citometria de fluxo

Mutações que levam a defeitos cardíacos congênitos se beneficiam da investigação in vivo da estrutura cardíaca durante o desenvolvimento, mas estudos estruturais de alta resolução no coração embrionário de camundongos são tecnicamente desafiadores. Aqui apresentamos um método robusto de imunofluorescência e análise de imagem para avaliar estruturas específicas de cardiomiócitos no coração de camundongo em desenvolvimento.

Análise do Cardiomyocyte Desenvolvimento utilizando imunofluorescência em Embryonic Coração do rato

A quantificação da renovação de cardiomiócitos é um desafio. O protocolo aqui descrito faz uma contribuição importante para esse desafio, permitindo a quantificação precisa e sensível da geração de núcleos de neocardiomiócitos e ploidia de núcleos.

Avaliação simultânea de Cardiomyocyte DNA Síntese e Ploidia: Um Método de Assistência Quantificação dos cardiomiócitos Regeneração e volume de negócios

Descrevemos um protocolo para obter imagens volumétricas de células marcadas com proteínas fluorescentes profundamente dentro de corações embrionários e pós-natais intactos. Utilizando métodos de limpeza de tecido em combinação com coloração de montagem inteira, células marcadas com proteína fluorescente única dentro de um coração embrionário ou pós-natal podem ser visualizadas com clareza e precisão.

Imagiologia Cleared embrionário e pós-natal Corações na resolução de célula única

Os métodos convencionais para iniciar a diferenciação cardíaca baseada suspensão total dos pluripotentes humanas células-tronco (hPSCs) são atormentado com a heterogeneidade da cultura com relação ao tamanho e forma agregada. Aqui, descrevemos um método robusto para a diferenciação cardíaca empregando micropoços para gerar controlado-size HPSC agrega cultivadas em condições de promoção cardíacos.

Agregada Optimization Tamanho em micropoços para sistemas baseados em Suspensão Cardiac diferenciação de células estaminais pluripotentes humanas

Este manuscrito descreve um protocolo passo a passo para a geração e quantificação de diversos subtipos cardíacos reprogramados usando uma entrega mediada por retrovírus de Gata4, Hand2, Mef2c e Tbx5.

Avaliando cardiomiócitos subtipos Seguindo Reprogramação Fator de Transcrição mediada por embrionárias de camundongos Fibroblastos

Aqui descrevemos e validamos um método para gerar consistentemente cardiomiócitos pluripotentes derivados de células-tronco induzidas por humanos robustos e caracterizar sua função. Essas técnicas podem ajudar no desenvolvimento de insights mecanicistas sobre as vias de sinalização, fornecer uma plataforma para o rastreamento de medicamentos em larga escala e doenças cardíacas de modelo confiável.

Geração de cardiomiócitos derivados de HiPSC semelhantes ao Ventricular e preparações celulares de alta qualidade para caracterização de manuseio de cálcio

O objetivo deste trabalho é desenvolver um método para isolar os cardiomiócitos do coração adulto e medir o conteúdo e a nucleação do DNA.

Isolamento de Cardiomiócitos de Corações Fixos para Imunocitoquímica e Análise ploidy

Os cardiomiócitos derivados de células-tronco pluripotentes induzidos por humanos (hiPSC-CMs) oferecem uma alternativa ao uso de animais para triagem pré-clínica de cardiotoxicidade. Uma limitação à adoção generalizada de hiPSC-CMs na triagem pré-clínica de toxicidade é o fenótipo imaturo e semelhante ao fetal das células. São apresentados protocolos para maturação robusta e rápida de hiPSC-CMs.

Triagem de cardiotoxicidade de alto rendimento usando monocamadas de cardiomiócitos derivadas de células-tronco pluripotentes induzidas por humanos maduros

Aprenda a visualizar atividade do ciclo celular em cardiomiócitos pós-natais usando linhagens transgênicas de camundongos. Este método permite distinguir divisão celular de variações de ploidia com alta resolução.

Visualização de Variações do ciclo celular e Determinação de Nucleação no pós-natais Cardiomyocytes

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