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Immunology and Infection
Um modelo de rato In Vivo para ativação de células T Naïve CD4 medida, proliferação e di...
Um modelo de rato In Vivo para ativação de células T Naïve CD4 medida, proliferação e di...
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Immunology and Infection
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JoVE Journal Immunology and Infection
An In Vivo Mouse Model to Measure Naïve CD4 T Cell Activation, Proliferation and Th1 Differentiation Induced by Bone Marrow-derived Dendritic Cells

Um modelo de rato In Vivo para ativação de células T Naïve CD4 medida, proliferação e diferenciação de células Th1 induzida pelas células dendríticas derivadas de medula óssea

Full Text
20,643 Views
08:39 min
August 22, 2018

DOI: 10.3791/58118-v

Raquel Toribio-Fernandez1, Virginia Zorita1, Beatriz Herrero-Fernandez2, Jose M. Gonzalez-Granado1,2,3

1LamImSys Lab,Centro Nacional de Investigaciones Cardiovasculares Carlos III (CNIC), 2LamImSys Lab,Instituto de Investigación Sanitaria Hospital 12 de Octubre (imas12), 3CIBER de Enfermedades Cardiovasculares

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Overview

This article presents a protocol for in vivo determination of na茂ve CD4 T cell activation, proliferation, and Th1 differentiation induced by GM-CSF bone marrow-derived dendritic cells. The protocol includes steps for bone marrow and T-cell isolation, dendritic cell generation, and adoptive transfer of both dendritic and T-cells.

Key Study Components

Area of Science

  • Immunology
  • T-cell biology
  • Dendritic cell function

Background

  • Understanding T-cell activation and differentiation is crucial for immunological research.
  • GM-CSF derived dendritic cells play a significant role in stimulating T-cell responses.
  • In vivo studies provide insights that are often not achievable through in vitro methods.
  • Adoptive transfer techniques are essential for studying immune responses in a controlled manner.

Purpose of Study

  • To establish a reliable protocol for studying T-cell activation and differentiation in vivo.
  • To facilitate the understanding of dendritic cell-T cell interactions.
  • To provide a visual demonstration of complex isolation and transfer techniques.

Methods Used

  • Isolation of bone marrow cells from adult mice.
  • Preparation of GM-CSF bone marrow-derived dendritic cells.
  • Adoptive transfer of dendritic cells and T-cells into recipient mice.
  • Assessment of T-cell activation and differentiation in vivo.

Main Results

  • The protocol successfully demonstrates T-cell activation and Th1 differentiation.
  • Visual aids significantly enhance understanding of complex procedures.
  • In vivo manipulation of T-cells allows for real-time observation of immune responses.
  • Findings contribute to the broader understanding of adaptive immunity.

Conclusions

  • This protocol is a valuable tool for researchers studying T-cell biology.
  • It bridges the gap between in vitro and in vivo studies in immunology.
  • Future applications may expand our understanding of immune system dynamics.

Frequently Asked Questions

What is the main advantage of this protocol?
The protocol allows for the study of T-cell activation and differentiation in an in vivo environment while enabling cell manipulation in vitro.
Why is visual demonstration important?
Visual demonstration is critical as the organ and bone isolation and adoptive transfer steps are difficult to master through text instructions alone.
What type of cells are isolated in this protocol?
The protocol involves the isolation of bone marrow cells and T-cells from adult mice.
How does GM-CSF influence dendritic cells?
GM-CSF is used to derive dendritic cells from bone marrow, which play a key role in T-cell activation.
What are the implications of this research?
The findings enhance our understanding of adaptive immunity and T-cell responses, which can inform therapeutic strategies.

Aqui, apresentamos um protocolo para a determinação na vivo da ativação de células (células T) de T CD4 naïve, proliferação e diferenciação de células Th1 induzida pela medula óssea de GM-CSF (BM)-derivado de células dendríticas (DCs). Além disso, este protocolo descreve isolamento BM e células T, geração de DC e DC e células T transferência adotiva.

Este método pode ajudar a responder a questões-chave no campo da imunologia sobre ativação de células T, proliferação e diferenciação Th1, bem como estimulação celular de antígeno apresentando imunidade adaptativa. A principal vantagem desta técnica é que ela permite o estudo de um ambiente in vivo e, ao mesmo tempo, permite a manipulação celular in vitro. A demonstração visual desse método é crítica, pois as etapas de isolamento de órgãos e ossos e transferência adotiva são difíceis de dominar apenas por meio de instruções de texto.

Para isolamento de células da medula óssea, desinfete os membros posteriores de um camundongo adulto com etanol a 70% e use uma tesoura para fazer uma incisão lateral na pele nos membros posteriores. Insira a tesoura na face medial das pernas e corte a pele com a tesoura até o início dos membros posteriores. Em seguida, use uma pinça para separar a pele das pernas.

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Imunologia e infecção edição 138 imunologia T CD4 celulares ativação de célula T T células de proliferação diferenciação de células T células dendríticas derivadas da medula óssea transferência de células adotivo rato isolamento de célula magnética de diferenciação OTII medula do osso

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