Imagem celular ao vivo super-resolução de estruturas subcelulares

Nosso protocolo usa sondas fluoróforas regulares e técnicas simples de preparação de espécimes que mantêm a célula imagem em condições fisiológicas para estudar processos celulares altamente dinâmicos e estruturas subcelulares detalhadas. Essa técnica nos permite investigar processos celulares em uma super resolução e em condições fisiológicas por um período prolongado sem sacrificar a resolução especial ou temporária. Comece cortando uma membrana de diálise de corte de peso molecular de 12 a 14 kilodalton em pequenos pedaços e absorvendo as peças com 100 microliters de meio de célula viva por cerca de cinco minutos.

Enquanto as membranas estão encharcadas, corte o anel externo de um tubo de 50 mililitros em pequenos pedaços e esterilize as peças em 70% de etanol. Para dissecção e montagem de testes, transfira dez de dois a três dias de idade anesthetizado moscas machos em um prato de dissecção sob um microscópio dissecando e usar fórceps finos para remover os testículos. Quando todos os testículos tiverem sido coletados, lave os testículos duas vezes no meio da célula viva e use uma ponta de pipeta para espalhar de 100 a 150 microliters de meio de célula viva para o prato de fundo de vidro preparado.