Um método QuEChERS-HPLC modificado para detecção de hidrocarbonetos aromáticos policíclicos em embriões de peixe-zebra expostos a partículas finas

Esta pesquisa tem como objetivo desenvolver um método QuEChERS-HPLC modificado para quantificar PAHs em embriões de peixe-zebra expostos a MOE, abordando a lacuna atual causada por desafios técnicos na medição dos níveis internos de PAHs devido ao tamanho da massa dos embriões e à complexidade de sua matriz biológica. A obtenção de resultados confiáveis requer 200 embriões por grupo, apresentando um desafio prático. A combinação de HPLC com detector de fluorescência pode aumentar ainda mais a sensibilidade do método. Em comparação com outras técnicas, este método QuEChERS-HPLC modificado reduz significativamente o tempo de suspensão da amostra e fornece uma abordagem rápida e eficiente para analisar os níveis de 16 PAHs em embriões de peixe-zebra expostos a EOM.

[Narrador] Para começar, prepare a amostra QuEChERS retirando os pratos contendo os embriões da incubadora 72 horas após a fertilização. Lave os embriões três vezes com água pura. Transfira os embriões para tubos de 1,5 mililitro e remova o excesso de água. Coloque os tubos em um freezer de 80 graus Celsius negativos por 30 minutos para liofilizar os embriões. Após a liofilização, triture os embriões usando uma haste de vidro. Adicione 25 microlitros de hidrocarboneto aromático policíclico 16, ou PAH, misture a solução padrão ao grupo de controle DMSO para testar a recuperação do pico. Em seguida, adicione um mililitro de n-hexano e vórtice por 30 segundos. Ultrassonicar a mistura a 35 graus Celsius por 30 minutos. Agora, centrifugue a amostra a 7.000g por cinco minutos. Transferir o sobrenadante para um novo tubo. Evaporar os sobrenadantes recolhidos até à secura sob fluxo de azoto num banho-maria a 35 graus Celsius. Adicione um mililitro de acetonitrila e vórtice por 30 segundos. Adicione 10 miligramas de amina secundária primária, 45 miligramas de sulfato de magnésio e 15 miligramas de empacotamento de C18 à amostra e, em seguida, vórtice por 30 segundos. Centrifugue a 7.000 g durante cinco minutos e transfira o sobrenadante para um novo tubo. Evaporar o sobrenadante a 0,5 mililitros sob nitrogênio e filtrar a amostra através de uma membrana microporosa de 0,22 micrômetro. Preparar uma série de soluções de trabalho que variam de um a 500 nanogramas por mililitro para o padrão de mistura de 16 PAH usando acetonitrilo. Injete 20 microlitros das soluções de amostra em um cromatógrafo líquido usando uma acetonitrila ou fase móvel de água e siga o procedimento de eluição mostrado na tela. Traçar uma curva padrão com concentrações mássicas das soluções de trabalho padrão no eixo x e as áreas de pico correspondentes no eixo y, cobrindo uma faixa de cinco nanogramas por mililitro a 500 nanogramas por mililitro. Injetar a amostra purificada no cromatógrafo líquido equipado com um detector de fluorescência, ou FLD, e detector de arranjo de diodos, ou DAD. Identifique a presença de HPAs comparando os tempos de retenção. Meça as áreas de pico para determinar a concentração. Por fim, calcule as concentrações internas dos 16 PAHs com base nas concentrações mássicas medidas. As concentrações de hidrocarbonetos aromáticos policíclicos, ou PAHs, em embriões de peixe-zebra 72 horas após a fertilização são fornecidas nesta tabela. Seis PAHs foram detectados com sucesso em matéria orgânica extraível, ou EOM, em embriões de peixe-zebra expostos. Em contraste, apenas dois PAHs foram identificados nas amostras de controle DSMO, em níveis significativamente mais baixos do que os das amostras EOM.