Трансфекция Мышь ганглиозных клеток сетчатки при В естественных условиях Электропорация

Общей целью данного эксперимента является трансфекция отдельных или небольших групп ганглиозных клеток сетчатки с использованием электропорации in vivo у постнатальных мышей для изучения развития угальных проекций сетчатки. Это достигается путем хирургического воздействия на глазное яблоко и введения небольшого объема раствора плазменной ДНК непосредственно в сетчатку. В качестве второго шага электроды размещаются на глазном яблоке непосредственно над местом инъекции и подаются электрические импульсы, что позволяет перенести плазменную ДНК в нейроны сетчатки.

Затем, в желаемом возрасте, электропорированные клетки сетчатки и мозга собирают для визуализации трансфицированных ганглиозных клеток сетчатки и получают их проекции на результаты ЦНС, которые показывают флуоресцентное мечение как дендритов, так и аксональных БРА меченых ганглиозных клеток сетчатки в их различных подкорковых структурах-мишенях. Основное преимущество этой методики перед существующими методами, такими как внутриутробная электропорация сетчатки, заключается в том, что эта техника менее инвазивна и не препятствует ранним событиям наведения аксонов, таким как кроссинговер в зрительной хиазме. Это также позволяет нам помечать небольшую популяцию или отдельные ганглиозные клетки сетчатки у постнатальных мышей с точным пространственным и временным контролем.