Секционирование, окрашивание и ПЭМ-визуализация встроенных экзосом: протокол визуализации структурных особенностей экзосом с помощью ПЭМ

Экзосомы представляют собой наноразмерные сферические везикулы, окруженные липидным бислоем, содержащим молекулы ДНК, РНК и белка, присутствующие внутри просвета.

Чтобы визуализировать структуру экзосом с помощью просвечивающей электронной микроскопии, или ПЭМ, начните с взятия блока экзосомы — блока твердой матрицы, содержащего встроенные экзосомы. С помощью ультра-микротома получают ультратонкие срезы экзосомного блока.

Соберите секцию экзосомы на подходящую сетку и дайте ей прилипнуть к поверхности. Сетка обеспечивает стабильную поддержку образца экзосомы для последующих этапов окрашивания.

Затем поместите сетку над каплей уранилацетата - пятина тяжелого металла - и инкубируйте в течение желаемой продолжительности. Ионы уранила взаимодействуют с липидами, белками, ДНК и РНК, присутствующими в экзосомах.

Впоследствии окрашивают участок экзосомы цитратом свинца, который также связывается с экзосомальными биомолекулами. Цитрат свинца слабо связывается с предварительно связанными ионами уранила и усиливает контраст на фоне при визуализации.

Наблюдайте за дважды окрашенными экзосомами с помощью ПЭМ. ПЭМ фокусирует электронный пучок на образце экзосомы. Окрашенные участки в экзосоме р