Секционирование, окрашивание и ПЭМ-визуализация встроенных экзосом: протокол визуализации структурных особенностей экзосом с помощью ПЭМ

0 views • 2:32 min • April 30th, 2023

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Экзосомы представляют собой наноразмерные сферические везикулы, окруженные липидным бислоем, содержащим молекулы ДНК, РНК и белка, присутствующие внутри просвета.

Чтобы визуализировать структуру экзосом с помощью просвечивающей электронной микроскопии, или ПЭМ, начните с взятия блока экзосомы — блока твердой матрицы, содержащего встроенные экзосомы. С помощью ультра-микротома получают ультратонкие срезы экзосомного блока.

Соберите секцию экзосомы на подходящую сетку и дайте ей прилипнуть к поверхности. Сетка обеспечивает стабильную поддержку образца экзосомы для последующих этапов окрашивания.

Затем поместите сетку над каплей уранилацетата - пятина тяжелого металла - и инкубируйте в течение желаемой продолжительности. Ионы уранила взаимодействуют с липидами, белками, ДНК и РНК, присутствующими в экзосомах.

Впоследствии окрашивают участок экзосомы цитратом свинца, который также связывается с экзосомальными биомолекулами. Цитрат свинца слабо связывается с предварительно связанными ионами уранила и усиливает контраст на фоне при визуализации.

Наблюдайте за дважды окрашенными экзосомами с помощью ПЭМ. ПЭМ фокусирует электронный пучок на образце экзосомы. Окрашенные участки в экзосоме рассеивают электроны сильнее по сравнению с неокрашенными областями.

Апертура объектива фильтрует эти сильно рассеянные электроны. Таким образом, экзосомы, содержащие окрашенные биомолекулы, кажутся темнее фона.

С помощью ультра-микротома подготовьте срезы толщиной 60 нанометров. Поместите срезы на никелевую сетку и дважды покрасьте некоторые из них 2% уранилацетатом на 20 минут, а затем цитратом свинца на 10 минут. Затем поместите окрашенный срез в просвечивающий электронный микроскоп и просмотрите образец с помощью напряжения 80 кВ и следуйте автоматическим настройкам времени экспозиции. Имея в виду изображение экзосомы, получите и сохраните изображение с помощью программного обеспечения микроскопа.

09:46

Метод для получения последовательного ультратонких разделы микроорганизмов в просвечивающей электронной микроскопии

Related Videos

0 Views

08:52

Встраивание парафин и тонкий секционирование колонии микробной биоплёнки для микроскопического анализа

Related Videos

0 Views

05:00

Резка и плавающий метод для парафин врезанных тканей для разрезания

Related Videos

0 Views

12:10

Одной частицы электронной микроскопии Реконструкция комплекса Exosome Использование случайных Коническая Метод Tilt

Related Videos

0 Views

03:10

Негативное окрашивание очищенных экзосом: процедура визуализации морфологии экзосом с помощью просвечивающей электронной микроскопии

Related Videos

0 Views

08:00

Корреляционный конфокальной и 3D Электронная микроскопия конкретного чувственного Cell

Related Videos

0 Views

06:59

Выделение и профилирование микроРНК содержащих экзосомы от человека Bile

Related Videos

0 Views

11:16

Коррелятивное свето- и электронной микроскопии с помощью Quantum Dot Наночастицы

Related Videos

0 Views

11:15

Подготовка образцов и изображений Exosomes, просвечивающей электронной микроскопии

Related Videos

0 Views

09:21

Митохондрии и эндоплазмические ретикулами imaging коррелятийным светом и объемной электронной микроскопией

Related Videos

0 Views

Last updated: 11 July 2026