Энциклопедия экспериментов JoVE
Биологические методы
0 просмотров • 5:03 мин. • July 8th, 2025
Флуоресцентное окрашивание серебра белков в полиакриламидных гелях использует флуорогенные зонды для обнаружения и количественного определения белков.
Начните с полиакриламидного геля с белками, разделенными на полосы с помощью электрофореза. Замочите в фиксирующей смеси этанола и уксусной кислоты, которая предотвращает диффузию полос за счет денатурации белков.
Смойте гель, чтобы удалить остатки уксусной кислоты и этанола. Погрузите гель в пятно серебристой селитры. Ионы серебра прочно связываются с отрицательно заряженными группами белков.
Инкубируйте в темноте. Промойте гель в ультрачистой воде, чтобы удалить несвязанные комплексы ионов серебра.
Погрузите гель в проявочный раствор, содержащий многокомпонентный флуорогенный зонд - TPE-4TA. Этот анионный зонд нацелен на ионы серебра, связанные с белком, образуя нерастворимые агрегаты, которые активируют флуорогенные свойства зонда, тем самым придавая флуоресценцию.
Поскольку флуоресцентная активация зависит от агрегации, несвязанные зонды не излучают никакого сигнала, что позволяет проводить полное окрашивание белков с уменьшенным фоновым излучением.
Инкубируйте гель в темноте при легком перемешивании, обеспечивая полное развитие
Просмотрите полный транскрипт и получите доступ к тысячам научных видео