Выделение микроглии из демиелинизирующих поражений мозга мыши с помощью магнитно-активированной сортировки клеток

Препарировать окрашенные демиелинизирующие поражения из мозолистого тела мозга мыши.

Эти поражения содержат резидентную в мозге микроглию, экспрессирующую интегрин клеточной поверхности CD11b.

Соберите ткань и добавьте раствор, содержащий протеолитический фермент и ДНКазу.

Фермент разрушает внеклеточный матрикс, в то время как ДНКаза разрушает свободную ДНК.

Добавьте холодный буфер и отфильтруйте суспензию через ситечко, чтобы удалить клеточные комки.

Центрифугуйте, выбросьте надосадочную жидкость и повторно суспендируйте гранулированные клетки в среде с градиентом плотности.

Покрыть буфером и центрифугой собрать оставшийся мусор в верхних слоях, неповрежденные ячейки оседают на дне.

Удалите мусор и снова суспендируйте клетки в буфере.

Добавьте магнитные шарики, анти-CD11b, чтобы пометить микроглию.

Загрузите ячейки на колонку, содержащую ферромагнитные сферы, помещенные в магнитное поле магнитного сепаратора.

Под действием внешнего магнитного поля микроглии, связанная с шариками, удерживается в колонке, в то время как через нее протекают несвязанные клетки.

Извлеките колонку из магнитного поля. Добавьте буфер для размытия микроглии.

Начните с микрорассечения поражений, помеченных