基本护理程序

Lab Animal Research

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Overview

来源: 凯斯图尔特, RVT, RLATG, CMAR;瓦莱丽. 施罗德, RVT, RLATG。圣母大学, 在

老鼠和老鼠占超过90% 的动物用于生物医学研究。对这些研究动物的适当照顾对实验结果至关重要。有一般的程序, 适用于大多数的这些小鼠和老鼠, 但一些动物, 如免疫缺陷的, 需要采取额外的步骤, 以维持他们的实验。

常用免疫缺陷小鼠包括那些自然发生在近交系小鼠和通过基因工程创造的老鼠。最初用于研究的免疫缺陷小鼠是 "裸鼠"。balb/c/c 裸鼠发现于 1966年, 在一个 balb/c/c 的殖民地, 生产的小鼠缺乏头发和胸腺。这些裸的小鼠有一个抑制免疫系统, 是缺乏 T 细胞。这种动物的价值很快就被发现用于研究微生物感染、免疫缺陷和自身免疫。虽然不像裸鼠一般使用, 也有裸鼠。裸鼠是 T 细胞缺乏, 并显示在胸腺相关区域的周围淋巴器官衰竭细胞的数量。另一个自然出现的免疫缺陷小鼠是严重的联合免疫缺陷小鼠。这些小鼠有一个缺陷, 损害了功能性 B 和 T 细胞的生产。由于无法进行足够的免疫应答, 这些小鼠可以作为移植人体细胞的宿主受体。一些具有免疫缺陷的基因修饰的小鼠菌株在商业上是可用的。 1 缺陷的严重程度随着基因的改变而变化;然而, 所有的免疫抑制小鼠和大鼠也同样处理.

这篇手稿将描述免疫和免疫缺陷动物的护理。这两组动物的住房, 饮食, 环境要求和处理将被讨论。

Cite this Video

JoVE Science Education Database. 实验动物研究精要. 基本护理程序. JoVE, Cambridge, MA, (2017).

Principles

外壳/锁定

小鼠和大鼠主要安置在鞋盒型锁定中, 固体底部含有寝具材料。典型的鞋盒鼠标笼提供75平方英寸的地板空间, 这是足够的最多五成年老鼠。然而, 实验设计可能需要四只老鼠。在这种情况下, 小鼠应在接受四组, 以避免在实验开始时社会群体的破坏。一般而言, 大鼠锁定允许最多两个成年动物。如果这些老鼠要长期居住, 就应该在双人住房中建立.

笼可以是静态或单独通风的 (下腔)。静态笼子要么盖上一条金属丝盖, 要么放在架子下面, 然后放在笼子的顶部。过滤材料被添加到笼顶, 无论是作为一个阀盖上方的电线酒吧盖, 或作为一张滤纸的货架货架上。IVCs 被设置成一个笼, 线栏盖, 和阀盖放在一个机架上, 提供空气流入笼中。IVCs 的使用消除了改变笼子的需要, 就像改变了静态笼子一样.

标准网箱系统提供了水源和食物分配的区域。水可以通过放置在笼顶的水瓶或通过一个 sipper 管, 是一个内置的动物笼的组成部分。当笼被啮合到机架上时, 水被运入 sipper 管, 用于自动浇水系统, 以满足动物整个动物设施的需要。锁定必须做好适当的准备, 为动物提供适当的照料。在动物笼内放置有喂食器, 或将一条铁丝条盖用作食物贮存。食物必须放在不被动物弄脏的位置.

关于实验室动物的护理和使用的 指南 2 (#34; 指南和 #34;) 指出, 所有锁定的实施必须至少每2周消毒一次。一些笼子和配件可能需要改变更多的往往是由气味和氨的水平在围栏。一般而言, 除非有四或以上男性或女性有垃圾, 否则 IVCs 计划每两星期更换一次;这些机箱可能需要每周更换。由于笼型的改变是小鼠接触病原体的机会, 因此, 对免疫缺陷小鼠锁定的改变应尽可能少地进行.

食谱

在蛋白质、碳水化合物和脂肪水平上有很多不同的饮食组合。通常, 饲料应该由15-19% 蛋白质, 44% 碳水化合物, 和4-9% 脂肪组成。增加脂肪含量的食物通常用于繁殖菌落以提高繁殖力。由于食物可能是免疫缺陷小鼠的污染源, 所以它必须是蒸汽灭菌或辐照。受灭菌过程的食物必须经过特殊的配制才能经受住这一过程。然而, 辐照过程不会改变食物的含量.

水是免疫缺陷动物的另一个潜在污染源。水应该通过高压釜或过滤器来处理, 包括通过紫外线过滤的水。蒸汽灭菌釜中的水, 个别瓶的水覆盖铝箔。瓶盖与 sipper 管在高压釜袋中单独灭菌。水的酸化到 pH 值为 2.5-3 帮助控制生长细菌有机体在水瓶。水是酸化的, 加入两滴12摩尔 (M) 盐酸 (HCl) 到八升的反渗透 (RO) 水。自动浇水系统可以在整个系统中使用, 包括微粒过滤器和紫外线滤光器.

环境

动物保育设施内的环境条件必须严格控制。联邦法规和指导方针已经确立了对常用动物的护理和处理标准。提供照明、环境温度、湿度和气流, 以满足动物的生理需要。除了需要略微增加室温外, 免疫缺陷动物的参数与常规动物相同。裸裸动物还需要在他们的笼子里增加寝具和碎纸式的嵌套材料, 以协助调节.

动物房间应保持在68-72 和 #176 之间的温度; F 的湿度级别为40-60%。 2 湿度水平低于40% 会导致老鼠和老鼠的浣, 这种情况会导致尾部的皮肤干燥到它在尾部收缩的地步, 从而导致尾部脱落。光照周期应设置为避免因不适当的光或光照强度而引起的动物的压力。正常情况下, 光是12小时, 12 小时休息。照明强度应根据房间内的活动而变化。当技术人员在动物室工作时, 可以使用更高的光照水平。然而, 一旦所有的活动结束, 照明应该降低到大约325勒克斯。 2 指示灯应为计时器和通过监视系统验证的周期。按照指南的指示, 动物房间必须至少有10-15 的空气变化, 每小时100% 新鲜空气。 2 空气的变化会减少动物室的微生物和异味。在人口稠密的动物房间里, 每小时的空气变化数量可能需要增加.

笼级环境因素包括锁定类型、笼内使用的基板、水输送系统和饮食。社会住房是强制性的, 除非科学合理, 或动物是不相容的所有其他。环境富集的规定, 如纸棚屋和筑巢材料, 允许动物表现出 species-specific 的行为, 反过来又降低了压力水平, 增加了动物的整体福祉。筑巢材料还提供了一个沉睡的区域, 在平静的信息素中, 帮助同一个笼子里的多个雄性老鼠的外壳。巢区被移动到干净的笼子在笼子改变, 以帮助防止攻击在男性, 当他们被介绍入一个新的环境。 3

Procedure

1. 处理免疫 (常规) 小鼠

已经证明, 小鼠的免疫失调与人类非常相似. 2 由于这些动物具有有限的免疫能力, 因此, 在处理和照料这些动物的过程中, 通过使用工程控制、个人防护设备来减少感染性疾病的风险。动物护理人员和标准操作规程;这些减少了锁定和其他动物接触的设备的污染.

  1. 从装运容器中取出: 接收来自其他机构或动物供应商的动物对已在动物设施内的动物构成风险。在转运过程中, 动物运输箱可以接触到致病剂。因此, 在拆解装运集装箱时应执行适当的程序。
    1. 最低限度的个人防护设备 (PPE) 要求是手套、干净的实验室大衣或磨砂、微粒面罩和安全眼镜来处理动物.
    2. 选择适当的固定架, 包括电线条盖和护栏顶。笼应配备适当的床上用品和筑巢材料。所有锁定都应在动物到达之前准备好并放置在接收区.
    3. 到达时, 运输箱放置在安全和温度控制的房间内。然后, 检查容器是否损坏.
    4. 使用胆碱产品对装运容器的外部表面进行消毒, 以销毁任何有害的病原体。确保消毒剂与包装箱的接触符合厂家的推荐, 通常为15-30 分钟.
    5. 将容器放置在动物转移站 (ATS) 中。ATS 在引擎盖内提供高效过滤的气流, 通过在用户和工作区之间创建真空空气屏障来提供过敏原保护。这确保了最小的接触动物毛发/毛屑和笼床上用品材料。单向空气还能保护动物免受周围空气的污染, 从而最大限度地减少了感染的几率.
    6. 一旦打开了装运容器, 评估动物的总体健康状况。记下任何受伤或患病的动物.
    7. 将动物放置在适当的组大小的组合笼子里。分组应符合空间规则, 以及它们将被分配到的实验协议.
    8. 用铁丝盖盖住笼子。确保线栏盖上的分隔条在盖子上创建两个区域.
    9. 选择合适的食物并将食物放在铁丝条盖子的一侧。离开第二方开放, 以便更好地流通的空气.
    10. 水将通过水瓶或自动浇水系统提供。水瓶是用于新断奶的小鼠, 以确保他们能够保持其水化水平。对于有自动浇水的下腔锁定, 在将其放在机架上之前, 先将浇水管充电.
    11. 将笼子放在机架上。如果使用 IVCs, 检查笼是否完全啮合到机架上, 并确保 sipper 管固定在浇水系统上.
  2. 更改常规鼠标
    1. 动物笼在安非他明类兴奋剂中改变。在每届会议结束时对苯丙胺类兴奋剂进行消毒.
    2. 一次只能打开一个笼子.
    3. 锁定用适当的床上用品和筑巢材料准备的, 被带进动物的房间。在安非他明类兴奋剂中放置了少量的笼子.
    4. 有内部 sipper 管的下腔静脉笼必须充电以迫使水进入 sipper, 以消除 sipper 管内空气的死亡空间。如果没有适当的充电, 老鼠可能无法提供足够的压力, sipper 管, 以消除空气.
    5. 最小的个人防护设备 (PPE) 要求是手套、干净的实验室大衣或磨砂、微粒面罩以及处理动物时的安全眼镜.
    6. 要更改的动物笼被放入一个新的笼子, 然后在 ATS 中.
    7. 动物可以用手或用填充钳来转移。手套在笼子之间或在小组之间改变老鼠。手套也可以用无毒的化学物质在笼子之间消毒.
    8. 已经证明, 将小鼠的巢状区域转移到一个干净的笼子里有助于过渡到干净的笼子里, 特别是对于那些有团体居住的雄性。其他浓缩物品也转移到新的笼子里.
    9. 一旦将笼顶或进纸器放置在新的笼子中, 就会添加食物.
    10. 屏障顶部放置在新的笼子上, 并且将笼子返回到机架上.
    11. 下腔静脉笼必须正确停靠在机架上, 以确保空气和水阀门已啮合.

2。处理免疫缺陷小鼠

  1. 从装运容器中拆箱
    1. 免疫缺陷动物必须在无菌条件下进行解压。所有处理免疫缺陷小鼠的人都必须佩戴蒸汽灭菌的礼服、面罩、头发罩和无菌手套。在搬运这些动物的时候, 应随时使用无菌技术.
    2. 所有设备和锁定都应通过蒸汽、紫外线辐射或化学杀菌消毒, 浸泡在70% 乙醇中至少30分钟有两种选择无菌锁定: 标准锁定已被包装和蒸汽灭菌, 或锁定那被消毒-通常通过辐照-由卖主。这些笼子是一个用途, 一次性单位.
    3. 在控制层流罩下的小鼠之前, 引擎盖用70% 乙醇喷洒, 鼓风机操作。风帽鼓风机应保持在任何时候, 以保持无菌环境。每次使用后, 引擎盖喷上消毒剂, 擦拭所有杂物, 再喷洒70% 乙醇.
    4. 最理想的情况是, 需要两个人来正确接受免疫力低下的小鼠: 一种是使用无菌技术 (无菌技术员) 处理动物, 另一个是处理受污染物品 (菌技术员)。菌的人还要穿一件干净的长袖礼服;实验室大衣或工作服;掩;盖;和无菌手套, 以防止污染的内部不育, 他们需要达到的遮光罩.
    5. 准备一个层流罩, 如前所述。最好有一个专门为免疫缺陷动物的遮光罩。建议在抽油烟机的内部使用紫外线 (UV) 杀菌灯, 可用于杀菌。使用定时器来确保发动机罩的表面有足够的紫外线照射.
    6. 将所有放置在引擎盖上的物品的外部喷洒70% 酒精, 包括食品、水和锁定的外包装.
    7. 装运集装箱在放置在引擎盖之前, 先用二氧化氯溶液喷洒。一旦放置在引擎盖, 他们将保持15-30 分钟未开封.
    8. 指定的动物处理程序打开引擎盖下的无菌食物和水.
    9. 菌技术员打开引擎盖下的装运箱。必须由菌技术员, 以避免接触的内部表面的引擎盖和内部的航运箱.
    10. 动物处理员打开无菌笼子, 并把食物和水放在笼子顶端来准备笼子。然后将小鼠从装运箱中取出, 放入无菌笼中.
    11. 动物状态由无菌动物处理员注意。任何出现疾病或有明显伤害的动物都将被隔离。所有标记有动物需要兽医注意的笼子将 be 放置在处理, 笼子改变, 或实验操作最后, 以减少潜在的污染其他动物.
    12. 菌人将从引擎盖中卸下填充的笼子。笼子可以放在一个标准的架子上作为静态笼子, 或在通风架上作为 IVCs。在 IVCs, 小鼠应提供额外的筑巢材料, 以协助热调节.
    13. 动物处理员应在每个装运容器后更换手套, 以避免可能的动物群的交叉污染。装运集装箱号记录在笼卡上, 以便在发生疾病时跟踪动物的起源.
    14. 可以保存未使用的耗材以备将来使用, 前提是原始容器可以密封。未使用的食物从房间被去除.
    15. 小鼠在实验前应经历一个为期一周的驯化期.
  2. 免疫缺陷小鼠的保持架更改
    1. 每星期至少更改一次鼠标笼, 如果认为有必要, 则更频繁.
    2. "引擎盖准备"、"笼子准备" 和 "人员 PPE" 的步骤与 "打开" 动物的方法相同.
    3. 动物可以用手或用填充钳来转移。指定的动物处理员应在每5-10 笼后 reglove, 如果手套被撕裂或被污染, 或者动物出现疾病.
    4. 任何有动物出现病的笼子将被放置在笼子的末端改变顺序, 避免健康动物可能暴露于病原体或污染物.
    5. 如果食物和/或水必须在下一个预定的笼子更改之前添加到笼子中, 则必须在准备好的引擎盖下进行菌.

由于老鼠和老鼠占生物医学研究的90% 以上, 因此, 适当地照顾这些生物体对实验的结果至关重要。这些护理程序从开始就开始, 从装运容器中取出动物, 到笼子改变, 保持适当的住房条件, 提供适当的饮食, 并确保适当的环境。虽然, 有一般的程序, 适用于大多数的小鼠和老鼠在实验室中, 一些动物, 如那些是免疫缺陷, 需要额外的注意, 以维持它们的实验目的.

该视频将描述免疫和免疫缺陷动物的标准和基本护理程序。最后, 我们将举例说明科学家如何将这些知识用于不同的研究目的.

从其他机构接收动物对已安置在设施内的动物构成危险, 如在运输过程中, 运送箱可与致病剂接触。因此, 在拆解装运集装箱时应采用适当的程序.

在处理任何动物之前, 必须佩戴适当的个人防护设备或 PPE。最小的 PPE 要穿的是实验室大衣, 手套, 安全眼镜, 和手术型口罩, 将减少接触灰尘和过敏原。下一步是为即将到来的动物选择合适的笼子。然后, 提供适当的床上用品和筑巢材料的笼子。把准备好的笼子带到温度控制的接收室, 以便在动物到达之前准备好.

装运到达时, 将运输箱放置在接收房间的安全位置。检查容器是否有任何损坏, 并对外部表面进行消毒, 以销毁任何有害的病原体。根据制造商的建议, 确保消毒剂与盒子保持至少15-30 分钟的接触。然后, 将容器放在动物转运站或苯丙胺类兴奋剂中。该站提供高效率的微粒空气, 或在引擎盖内过滤单向气流。高效空气过滤保护用户免受过敏原和盾牌的动物从周围的房间里, 尽量减少污染的机会。然后, 打开装运容器, 评估啮齿类动物的整体健康状况。记下任何看似受伤或患病的动物。之后, 将它们放入已装配好的笼中, 放入适当的组大小, 用金属丝盖盖住笼子, 并确保分压器创建两个区域。选择合适的食物, 把它放在一边, 让第二面保持开放, 以便更好的空气流通。最后, 如果动物没有被放置在一个自动浇水机架上, 添加一个水瓶, 以确保足够的供水。请记住, 在每次会议结束时, 必须对苯丙胺类兴奋剂进行消毒, 并在消毒时鼓风机关闭.

对于保持架的更换, 将两个笼子--一个带有适当的寝具材料的新鲜笼子和-安非他明类兴奋剂的二手笼子。人们可以手工将动物从旧笼子转移到新的笼子里, 或者用软垫钳把它们移出。这两种方法都在这个集合的另一个视频中讨论过。记住只有一个笼子里的动物可以一次打开。对于雄性小鼠或有枯枝落叶的雌性, 已经证明, 将小鼠的巢状区域转移到干净的笼子里有助于动物过渡。一旦笼顶被放置在新的笼子, 从旧笼顶转移食物到新的顶部, 并添加更多的食物, 如果必要的。然后, 将屏障顶部, 并将笼子交还给机架。在笼子之间或在群体之间更换手套是一种很好的做法.

免疫缺陷动物的开箱程序有点不同, 因为事情需要消毒。建议在使用前至少24小时在发动机罩内的鼓风机。如 immunocompenent 动物, 装运到达时, 在接收室用消毒剂溶液喷洒容器, 并将其保持不开封15-30 分钟。在为免疫缺陷小鼠指定的 ATS 中, 在操纵动物之前, 用70% 乙醇喷出30分钟的层流罩。这是理想的两个人参与这个包装活动-一个人将是无菌技师穿着蒸汽灭菌礼服和双无菌手套处理动物使用无菌技术和其他将是消毒技术员穿着干净的隔离袍和一副手套来处理受污染的物品。两个都应该戴口罩, 头发罩, 和安全眼镜。

在打开引擎盖内的装运容器之前, 将所有的用品和锁定放在这些中, 然后用酒精喷洒它们的外部。装运到达后, 将收到的生命l 箱在引擎盖和喷雾它与70% 乙醇以及。有两种选择无菌锁定, 无论是标准的锁定, 已被包装和蒸汽灭菌, 或一次性单位已被消毒使用的供应商.

打开无菌食品, 打开包装盒, 启动开箱过程。此时, 处理程序应丢弃第一对无菌手套。接下来, 消毒人打开无菌笼和菌把它传给动物处理员, 然后去掉帽子和铁丝条盖, 然后把它们倒在引擎盖上。随后, 笼中的 sipper 管充满了位于引擎盖的站内的水。最后, 动物处理员把动物放到笼子里, 用铁丝棒盖住它, 添加食物并设置引擎盖。注意, 油烟机应保持在任何时候, 以保持无菌环境。最后, 消毒人从引擎盖中移除填充的笼子, 并将其放置在适当的机架上。为了避免各组之间可能发生交叉污染, 动物处理员应在每个装运容器后更换手套.

对于免疫缺陷动物的笼型变化, 罩和笼子和 PPE 的准备与这些动物的拆解是一样的。转移技术与免疫动物相同, 但在无菌条件下.

现在让我们讨论动物的适当的居住条件, 这是提供基本护理的另一个重要方面。小鼠和大鼠主要安置在鞋盒式锁定中, 底部含有寝具材料。典型的鼠标笼提供75平方英寸的地板空间, 这是足够的最多5成年老鼠。另一方面, 老鼠笼的面积为142平方英寸, 对2只成年老鼠是足够的。静态笼通常覆盖有一个金属丝条盖, 过滤材料被添加在笼顶作为阀盖。单独通风的笼子, 或 IVCs, 也有一个线栏盖和帽子, 但他们被放置在一个机架上, 提供气流进入笼中。这就消除了改变笼子的需要, 就像静态笼子一样, 这对免疫力低下的动物也有好处.

所有锁定系统都有食物和水供应的规定。在动物笼内放置喂食器, 或将一条丝条盖子用作食物贮存。食物必须放在不被动物弄脏的位置。水通常是通过放置在笼顶的水瓶, 或通过自动浇水阀, 是一个内置的动物笼的组成部分。对于饮水阀的选择, 当笼是从事一个机架, 水是运输到管道的自动浇水系统, 旨在满足动物的需要在整个动物设施.

关于实验室动物的护理和使用的 指南 指出所有锁定的实施必须至少每2周消毒一次。一些笼子和配件可能需要改变更多的往往是由气味和氨水的水平在围栏.

现在让我们来讨论免疫和免疫缺陷动物的适当食物和水供应。市面上有许多可供选择的饲料, 有可变蛋白质、碳水化合物和脂肪成分。理想情况下, 饲料应包括15-19% 蛋白质, 44% 碳水化合物, 4-9% 脂肪。对于免疫力低下的动物, 确保饲料已被灭菌.

自来水, 或反渗透是 RO 水, 可用于免疫动物, 但对于缺陷动物, 水可能是污染源, 因此需要消毒。在水中的不育通过加入2滴12摩尔盐酸到8公升 RO 水, 这将酸化水的 pH 值为 2.5-3 和限制细菌生长。然后把水倒入单独的瓶子里, 用铝箔盖住。将瓶盖与 sipper 管分别放在高压釜袋中, 并将所有东西放在高压釜中进行蒸汽灭菌.

现在让我们来讨论动物保育所必需的标准环境条件.

在笼子一级, 除非有科学理由或动物与所有其他人不相容, 否则社会住房是强制性的。用纸棚屋和筑巢材料丰富环境, 使动物能够表现出 species-specific 的行为, 如筑巢和挖洞, 反过来又降低了压力水平, 增加了动物的整体福祉。筑巢材料还提供了一个沉睡的区域, 在平静的信息素中, 帮助同一个笼子里的多个雄性老鼠的外壳。如前所述, 将巢状区域移到笼中的清洁笼中有助于防止特别是雄性的攻击, 因为动物被引入新的环境。对于裸裸动物, 应考虑在笼中提供额外的寝具和碎纸式嵌套材料, 以协助调节.

在室温下, 小鼠和鼠的体温应介于68和 79 ° F 之间。房间的湿度应该是 30-70%, 因为较低的水平会导致一个条件称为浣。第三个房间的参数是照明。这包括光的强度和周期。通常, 动物室设置为12小时 light/12-hour 的黑暗周期。照明强度应根据房间内的活动而变化。当技术人员工作时, 可以使用更高的照明级别。然而, 一旦所有活动结束, 它应该被降下到大约325勒克斯。最后, 房间内的气流也应小心控制。每小时至少需要10-15 空气变化100% 新鲜空气。这减少了动物房间里的微生物和气味.

最后, 让我们看看研究人员如何在实验中使用这些关于实验室动物的知识, 饮食和环境偏好.

如前所述, 实验室动物通常表现出筑巢的行为, 从而减少压力, 研究人员将此作为动物福利的指标。在这个特殊的实验中, 科学家们开发了一个无偏的系统来评分筑巢, 然后利用它研究环境温度对筑巢行为的影响。正如你所看到的, 气温的升高导致了分数的显著下降, 凸显了周围温度在动物福利中的作用.

由于老鼠喜欢碳水化合物, 研究人员用不同形状的饲料来测试动物的运动功能。这包括分析不同类型的食物处理任务的灵巧性, 以及检查手术或药理干预后的行为.

最后, 人们知道老鼠是夜行动物, 他们不喜欢 lit-up 的区域。科学家利用这些知识来建立环境来研究这些物种的焦虑。例如, 本研究将动物引入简单开放场, 研究了野生型和挖空小鼠在内、外区所花的时间, 分析了基因击倒对焦虑样行为的影响.

你刚刚看了朱庇特的介绍基本护理程序的老鼠和老鼠。你现在应该更好地了解这项措施我们应该确保这些动物的环境和处理不会对动物的健康造成任何伤害, 你也应该知道研究人员如何修改这些参数以达到不同的科学目标。一如既往, 感谢收看!

Summary

对生物医学研究中使用的动物进行适当的护理和处理对实验结果至关重要。条例和既定的准则决定了许多使用的做法。然而, 对于那些有免疫缺陷的小鼠和老鼠, 还需要采取额外的措施来减少偶然接触到的机会病原体。实践证明, 实验动物的健康和福祉得到了提高, 实验结果得到了较好的效果.

References

  1. Belizário J.E. 2009. Immunodeficient Mouse Models: An Overview. The Open Immunology Journal. 2. 79-85.
  2. Institute for the Laboratory Animal Research. 2011. Guide for the care and use of laboratory animals, 8th ed. Washington (DC): National Academies Press.
  3. Van Loo, P. 2001. Modulation of aggression in male mice: influence of cage cleaning regime and scent marks. In Male Management: Coping with Aggression Problems in Male Laboratory Mice. Surrey: UK.

1. 处理免疫 (常规) 小鼠

已经证明, 小鼠的免疫失调与人类非常相似. 2 由于这些动物具有有限的免疫能力, 因此, 在处理和照料这些动物的过程中, 通过使用工程控制、个人防护设备来减少感染性疾病的风险。动物护理人员和标准操作规程;这些减少了锁定和其他动物接触的设备的污染.

  1. 从装运容器中取出: 接收来自其他机构或动物供应商的动物对已在动物设施内的动物构成风险。在转运过程中, 动物运输箱可以接触到致病剂。因此, 在拆解装运集装箱时应执行适当的程序。
    1. 最低限度的个人防护设备 (PPE) 要求是手套、干净的实验室大衣或磨砂、微粒面罩和安全眼镜来处理动物.
    2. 选择适当的固定架, 包括电线条盖和护栏顶。笼应配备适当的床上用品和筑巢材料。所有锁定都应在动物到达之前准备好并放置在接收区.
    3. 到达时, 运输箱放置在安全和温度控制的房间内。然后, 检查容器是否损坏.
    4. 使用胆碱产品对装运容器的外部表面进行消毒, 以销毁任何有害的病原体。确保消毒剂与包装箱的接触符合厂家的推荐, 通常为15-30 分钟.
    5. 将容器放置在动物转移站 (ATS) 中。ATS 在引擎盖内提供高效过滤的气流, 通过在用户和工作区之间创建真空空气屏障来提供过敏原保护。这确保了最小的接触动物毛发/毛屑和笼床上用品材料。单向空气还能保护动物免受周围空气的污染, 从而最大限度地减少了感染的几率.
    6. 一旦打开了装运容器, 评估动物的总体健康状况。记下任何受伤或患病的动物.
    7. 将动物放置在适当的组大小的组合笼子里。分组应符合空间规则, 以及它们将被分配到的实验协议.
    8. 用铁丝盖盖住笼子。确保线栏盖上的分隔条在盖子上创建两个区域.
    9. 选择合适的食物并将食物放在铁丝条盖子的一侧。离开第二方开放, 以便更好地流通的空气.
    10. 水将通过水瓶或自动浇水系统提供。水瓶是用于新断奶的小鼠, 以确保他们能够保持其水化水平。对于有自动浇水的下腔锁定, 在将其放在机架上之前, 先将浇水管充电.
    11. 将笼子放在机架上。如果使用 IVCs, 检查笼是否完全啮合到机架上, 并确保 sipper 管固定在浇水系统上.
  2. 更改常规鼠标
    1. 动物笼在安非他明类兴奋剂中改变。在每届会议结束时对苯丙胺类兴奋剂进行消毒.
    2. 一次只能打开一个笼子.
    3. 锁定用适当的床上用品和筑巢材料准备的, 被带进动物的房间。在安非他明类兴奋剂中放置了少量的笼子.
    4. 有内部 sipper 管的下腔静脉笼必须充电以迫使水进入 sipper, 以消除 sipper 管内空气的死亡空间。如果没有适当的充电, 老鼠可能无法提供足够的压力, sipper 管, 以消除空气.
    5. 最小的个人防护设备 (PPE) 要求是手套、干净的实验室大衣或磨砂、微粒面罩以及处理动物时的安全眼镜.
    6. 要更改的动物笼被放入一个新的笼子, 然后在 ATS 中.
    7. 动物可以用手或用填充钳来转移。手套在笼子之间或在小组之间改变老鼠。手套也可以用无毒的化学物质在笼子之间消毒.
    8. 已经证明, 将小鼠的巢状区域转移到一个干净的笼子里有助于过渡到干净的笼子里, 特别是对于那些有团体居住的雄性。其他浓缩物品也转移到新的笼子里.
    9. 一旦将笼顶或进纸器放置在新的笼子中, 就会添加食物.
    10. 屏障顶部放置在新的笼子上, 并且将笼子返回到机架上.
    11. 下腔静脉笼必须正确停靠在机架上, 以确保空气和水阀门已啮合.

2。处理免疫缺陷小鼠

  1. 从装运容器中拆箱
    1. 免疫缺陷动物必须在无菌条件下进行解压。所有处理免疫缺陷小鼠的人都必须佩戴蒸汽灭菌的礼服、面罩、头发罩和无菌手套。在搬运这些动物的时候, 应随时使用无菌技术.
    2. 所有设备和锁定都应通过蒸汽、紫外线辐射或化学杀菌消毒, 浸泡在70% 乙醇中至少30分钟有两种选择无菌锁定: 标准锁定已被包装和蒸汽灭菌, 或锁定那被消毒-通常通过辐照-由卖主。这些笼子是一个用途, 一次性单位.
    3. 在控制层流罩下的小鼠之前, 引擎盖用70% 乙醇喷洒, 鼓风机操作。风帽鼓风机应保持在任何时候, 以保持无菌环境。每次使用后, 引擎盖喷上消毒剂, 擦拭所有杂物, 再喷洒70% 乙醇.
    4. 最理想的情况是, 需要两个人来正确接受免疫力低下的小鼠: 一种是使用无菌技术 (无菌技术员) 处理动物, 另一个是处理受污染物品 (菌技术员)。菌的人还要穿一件干净的长袖礼服;实验室大衣或工作服;掩;盖;和无菌手套, 以防止污染的内部不育, 他们需要达到的遮光罩.
    5. 准备一个层流罩, 如前所述。最好有一个专门为免疫缺陷动物的遮光罩。建议在抽油烟机的内部使用紫外线 (UV) 杀菌灯, 可用于杀菌。使用定时器来确保发动机罩的表面有足够的紫外线照射.
    6. 将所有放置在引擎盖上的物品的外部喷洒70% 酒精, 包括食品、水和锁定的外包装.
    7. 装运集装箱在放置在引擎盖之前, 先用二氧化氯溶液喷洒。一旦放置在引擎盖, 他们将保持15-30 分钟未开封.
    8. 指定的动物处理程序打开引擎盖下的无菌食物和水.
    9. 菌技术员打开引擎盖下的装运箱。必须由菌技术员, 以避免接触的内部表面的引擎盖和内部的航运箱.
    10. 动物处理员打开无菌笼子, 并把食物和水放在笼子顶端来准备笼子。然后将小鼠从装运箱中取出, 放入无菌笼中.
    11. 动物状态由无菌动物处理员注意。任何出现疾病或有明显伤害的动物都将被隔离。所有标记有动物需要兽医注意的笼子将 be 放置在处理, 笼子改变, 或实验操作最后, 以减少潜在的污染其他动物.
    12. 菌人将从引擎盖中卸下填充的笼子。笼子可以放在一个标准的架子上作为静态笼子, 或在通风架上作为 IVCs。在 IVCs, 小鼠应提供额外的筑巢材料, 以协助热调节.
    13. 动物处理员应在每个装运容器后更换手套, 以避免可能的动物群的交叉污染。装运集装箱号记录在笼卡上, 以便在发生疾病时跟踪动物的起源.
    14. 可以保存未使用的耗材以备将来使用, 前提是原始容器可以密封。未使用的食物从房间被去除.
    15. 小鼠在实验前应经历一个为期一周的驯化期.
  2. 免疫缺陷小鼠的保持架更改
    1. 每星期至少更改一次鼠标笼, 如果认为有必要, 则更频繁.
    2. "引擎盖准备"、"笼子准备" 和 "人员 PPE" 的步骤与 "打开" 动物的方法相同.
    3. 动物可以用手或用填充钳来转移。指定的动物处理员应在每5-10 笼后 reglove, 如果手套被撕裂或被污染, 或者动物出现疾病.
    4. 任何有动物出现病的笼子将被放置在笼子的末端改变顺序, 避免健康动物可能暴露于病原体或污染物.
    5. 如果食物和/或水必须在下一个预定的笼子更改之前添加到笼子中, 则必须在准备好的引擎盖下进行菌.

由于老鼠和老鼠占生物医学研究的90% 以上, 因此, 适当地照顾这些生物体对实验的结果至关重要。这些护理程序从开始就开始, 从装运容器中取出动物, 到笼子改变, 保持适当的住房条件, 提供适当的饮食, 并确保适当的环境。虽然, 有一般的程序, 适用于大多数的小鼠和老鼠在实验室中, 一些动物, 如那些是免疫缺陷, 需要额外的注意, 以维持它们的实验目的.

该视频将描述免疫和免疫缺陷动物的标准和基本护理程序。最后, 我们将举例说明科学家如何将这些知识用于不同的研究目的.

从其他机构接收动物对已安置在设施内的动物构成危险, 如在运输过程中, 运送箱可与致病剂接触。因此, 在拆解装运集装箱时应采用适当的程序.

在处理任何动物之前, 必须佩戴适当的个人防护设备或 PPE。最小的 PPE 要穿的是实验室大衣, 手套, 安全眼镜, 和手术型口罩, 将减少接触灰尘和过敏原。下一步是为即将到来的动物选择合适的笼子。然后, 提供适当的床上用品和筑巢材料的笼子。把准备好的笼子带到温度控制的接收室, 以便在动物到达之前准备好.

装运到达时, 将运输箱放置在接收房间的安全位置。检查容器是否有任何损坏, 并对外部表面进行消毒, 以销毁任何有害的病原体。根据制造商的建议, 确保消毒剂与盒子保持至少15-30 分钟的接触。然后, 将容器放在动物转运站或苯丙胺类兴奋剂中。该站提供高效率的微粒空气, 或在引擎盖内过滤单向气流。高效空气过滤保护用户免受过敏原和盾牌的动物从周围的房间里, 尽量减少污染的机会。然后, 打开装运容器, 评估啮齿类动物的整体健康状况。记下任何看似受伤或患病的动物。之后, 将它们放入已装配好的笼中, 放入适当的组大小, 用金属丝盖盖住笼子, 并确保分压器创建两个区域。选择合适的食物, 把它放在一边, 让第二面保持开放, 以便更好的空气流通。最后, 如果动物没有被放置在一个自动浇水机架上, 添加一个水瓶, 以确保足够的供水。请记住, 在每次会议结束时, 必须对苯丙胺类兴奋剂进行消毒, 并在消毒时鼓风机关闭.

对于保持架的更换, 将两个笼子--一个带有适当的寝具材料的新鲜笼子和-安非他明类兴奋剂的二手笼子。人们可以手工将动物从旧笼子转移到新的笼子里, 或者用软垫钳把它们移出。这两种方法都在这个集合的另一个视频中讨论过。记住只有一个笼子里的动物可以一次打开。对于雄性小鼠或有枯枝落叶的雌性, 已经证明, 将小鼠的巢状区域转移到干净的笼子里有助于动物过渡。一旦笼顶被放置在新的笼子, 从旧笼顶转移食物到新的顶部, 并添加更多的食物, 如果必要的。然后, 将屏障顶部, 并将笼子交还给机架。在笼子之间或在群体之间更换手套是一种很好的做法.

免疫缺陷动物的开箱程序有点不同, 因为事情需要消毒。建议在使用前至少24小时在发动机罩内的鼓风机。如 immunocompenent 动物, 装运到达时, 在接收室用消毒剂溶液喷洒容器, 并将其保持不开封15-30 分钟。在为免疫缺陷小鼠指定的 ATS 中, 在操纵动物之前, 用70% 乙醇喷出30分钟的层流罩。这是理想的两个人参与这个包装活动-一个人将是无菌技师穿着蒸汽灭菌礼服和双无菌手套处理动物使用无菌技术和其他将是消毒技术员穿着干净的隔离袍和一副手套来处理受污染的物品。两个都应该戴口罩, 头发罩, 和安全眼镜。

在打开引擎盖内的装运容器之前, 将所有的用品和锁定放在这些中, 然后用酒精喷洒它们的外部。装运到达后, 将收到的生命l 箱在引擎盖和喷雾它与70% 乙醇以及。有两种选择无菌锁定, 无论是标准的锁定, 已被包装和蒸汽灭菌, 或一次性单位已被消毒使用的供应商.

打开无菌食品, 打开包装盒, 启动开箱过程。此时, 处理程序应丢弃第一对无菌手套。接下来, 消毒人打开无菌笼和菌把它传给动物处理员, 然后去掉帽子和铁丝条盖, 然后把它们倒在引擎盖上。随后, 笼中的 sipper 管充满了位于引擎盖的站内的水。最后, 动物处理员把动物放到笼子里, 用铁丝棒盖住它, 添加食物并设置引擎盖。注意, 油烟机应保持在任何时候, 以保持无菌环境。最后, 消毒人从引擎盖中移除填充的笼子, 并将其放置在适当的机架上。为了避免各组之间可能发生交叉污染, 动物处理员应在每个装运容器后更换手套.

对于免疫缺陷动物的笼型变化, 罩和笼子和 PPE 的准备与这些动物的拆解是一样的。转移技术与免疫动物相同, 但在无菌条件下.

现在让我们讨论动物的适当的居住条件, 这是提供基本护理的另一个重要方面。小鼠和大鼠主要安置在鞋盒式锁定中, 底部含有寝具材料。典型的鼠标笼提供75平方英寸的地板空间, 这是足够的最多5成年老鼠。另一方面, 老鼠笼的面积为142平方英寸, 对2只成年老鼠是足够的。静态笼通常覆盖有一个金属丝条盖, 过滤材料被添加在笼顶作为阀盖。单独通风的笼子, 或 IVCs, 也有一个线栏盖和帽子, 但他们被放置在一个机架上, 提供气流进入笼中。这就消除了改变笼子的需要, 就像静态笼子一样, 这对免疫力低下的动物也有好处.

所有锁定系统都有食物和水供应的规定。在动物笼内放置喂食器, 或将一条丝条盖子用作食物贮存。食物必须放在不被动物弄脏的位置。水通常是通过放置在笼顶的水瓶, 或通过自动浇水阀, 是一个内置的动物笼的组成部分。对于饮水阀的选择, 当笼是从事一个机架, 水是运输到管道的自动浇水系统, 旨在满足动物的需要在整个动物设施.

关于实验室动物的护理和使用的 指南 指出所有锁定的实施必须至少每2周消毒一次。一些笼子和配件可能需要改变更多的往往是由气味和氨水的水平在围栏.

现在让我们来讨论免疫和免疫缺陷动物的适当食物和水供应。市面上有许多可供选择的饲料, 有可变蛋白质、碳水化合物和脂肪成分。理想情况下, 饲料应包括15-19% 蛋白质, 44% 碳水化合物, 4-9% 脂肪。对于免疫力低下的动物, 确保饲料已被灭菌.

自来水, 或反渗透是 RO 水, 可用于免疫动物, 但对于缺陷动物, 水可能是污染源, 因此需要消毒。在水中的不育通过加入2滴12摩尔盐酸到8公升 RO 水, 这将酸化水的 pH 值为 2.5-3 和限制细菌生长。然后把水倒入单独的瓶子里, 用铝箔盖住。将瓶盖与 sipper 管分别放在高压釜袋中, 并将所有东西放在高压釜中进行蒸汽灭菌.

现在让我们来讨论动物保育所必需的标准环境条件.

在笼子一级, 除非有科学理由或动物与所有其他人不相容, 否则社会住房是强制性的。用纸棚屋和筑巢材料丰富环境, 使动物能够表现出 species-specific 的行为, 如筑巢和挖洞, 反过来又降低了压力水平, 增加了动物的整体福祉。筑巢材料还提供了一个沉睡的区域, 在平静的信息素中, 帮助同一个笼子里的多个雄性老鼠的外壳。如前所述, 将巢状区域移到笼中的清洁笼中有助于防止特别是雄性的攻击, 因为动物被引入新的环境。对于裸裸动物, 应考虑在笼中提供额外的寝具和碎纸式嵌套材料, 以协助调节.

在室温下, 小鼠和鼠的体温应介于68和 79 ° F 之间。房间的湿度应该是 30-70%, 因为较低的水平会导致一个条件称为浣。第三个房间的参数是照明。这包括光的强度和周期。通常, 动物室设置为12小时 light/12-hour 的黑暗周期。照明强度应根据房间内的活动而变化。当技术人员工作时, 可以使用更高的照明级别。然而, 一旦所有活动结束, 它应该被降下到大约325勒克斯。最后, 房间内的气流也应小心控制。每小时至少需要10-15 空气变化100% 新鲜空气。这减少了动物房间里的微生物和气味.

最后, 让我们看看研究人员如何在实验中使用这些关于实验室动物的知识, 饮食和环境偏好.

如前所述, 实验室动物通常表现出筑巢的行为, 从而减少压力, 研究人员将此作为动物福利的指标。在这个特殊的实验中, 科学家们开发了一个无偏的系统来评分筑巢, 然后利用它研究环境温度对筑巢行为的影响。正如你所看到的, 气温的升高导致了分数的显著下降, 凸显了周围温度在动物福利中的作用.

由于老鼠喜欢碳水化合物, 研究人员用不同形状的饲料来测试动物的运动功能。这包括分析不同类型的食物处理任务的灵巧性, 以及检查手术或药理干预后的行为.

最后, 人们知道老鼠是夜行动物, 他们不喜欢 lit-up 的区域。科学家利用这些知识来建立环境来研究这些物种的焦虑。例如, 本研究将动物引入简单开放场, 研究了野生型和挖空小鼠在内、外区所花的时间, 分析了基因击倒对焦虑样行为的影响.

你刚刚看了朱庇特的介绍基本护理程序的老鼠和老鼠。你现在应该更好地了解这项措施我们应该确保这些动物的环境和处理不会对动物的健康造成任何伤害, 你也应该知道研究人员如何修改这些参数以达到不同的科学目标。一如既往, 感谢收看!

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