Dialyse : Diffusion basé séparation

Biochemistry

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Summary

Dialyse est une technique courante utilisée en biochimie pour séparer des molécules basées sur la diffusion. Dans cette procédure, une membrane semiperméable permet le mouvement de certaines molécules selon la taille. Cette méthode peut être appliquée à l’enlèvement de tampon, appelée dessalage, ou échange tampon molécules ou d’ions d’une solution protéique.

Cette vidéo couvre les principes de la dialyse ainsi qu’une procédure générale. plusieurs demandes de dialyse sont examinées, y compris la suppression des réactifs dégradés après ultracentrifugation, la suppression de détergent après une protéine de la membrane d’extraction et de la reconstitution des protéines en modifiant l’environnement de la solution.

échantillons biochimiques ont généralement des concentrations de tampon haute qui peuvent perturber le traitement en aval et l’analyse. Dialyse est une technique commune, peu coûteuse, utilisée pour séparer les molécules basées sur la diffusion. La méthode utilise une membrane semi-perméable qui permet la circulation de certains composants, selon la taille. Cette vidéo va expliquer les concepts de dialyse, une procédure générale et certaines de ses utilisations en biochimie.

l’aspect le plus important de la dialyse est une membrane semi-perméable, qui a des pores qui imposent un seuil de poids moléculaire, permettant aux molécules au-dessous d’une certaine taille de passer à travers. Par exemple, une membrane k 10 conservera généralement des molécules plus grands que 10 kilodaltons. Toutefois, le seuil de poids moléculaire n’est pas une frontière discrète ou précise. La membrane contient généralement une large gamme de tailles de pores, donc une petite fraction des molécules proches du seuil peut être perdue.

Depuis le seuil de poids moléculaire est défini à l’aide de protéines globulaires, des molécules linéaires de même masse, comme l’ADN ou d’ARN, peut passer à travers. Les membranes sont généralement choisies une moitié à un tiers le poids moléculaire de la molécule désirée.

Pour exécuter la procédure, un échantillon est placé dans la membrane, qui est ensuite ajoutée à un grand volume de solution, appelée le dialysat. Au fil du temps, des molécules plus petites seront diffuser librement à travers la membrane entre l’échantillon et le dialysat, tandis que les plus grande et biomolécules sont détenues au sein. Dialyse est un processus lent. Il est commun pour lui permettre d’exécuter toute la nuit, ou même sur plusieurs jours.

Si le dialysat est l’eau pure, diminue la concentration globale de la mémoire tampon, un processus appelé dessalage. Si la solution contient des autres petites particules, certains seront déplaceront dans l’échantillon, conduisant à l’échange de la mémoire tampon. Parce que la dialyse est un processus d’équilibre, le dialysat peut être actualisé plusieurs fois à déplacer de plus petites molécules. Une fois le processus terminé l’échantillon est re-recueilli aux fins de traitement ultérieur.

Maintenant que vous avez ' ai vu les rudiments de la dialyse, laissez ' s jetez un oeil à un mode opératoire général.

avant de commencer la procédure, la membrane est préalablement trempée dans le dialysat. Cela rend plus facile à utiliser et supprime tous les préservatifs. Une fois prêt, l’échantillon est recueillie, généralement avec une seringue et est ensuite ajouté au conteneur de dialyse. Ceci peut être nu tube, ou contenue dans une cassette. Excès d’air est supprimée de la configuration de dialyse à maximiser l’échantillon ' superficie s avec la membrane. Le programme d’installation est ensuite placé dans le dialysat avec agitateurs pour maximiser la diffusion. Elle doit flotter pour n'inhiber pas brasser.

Le dialysat est renouvelé à des intervalles pertinents comme l’équilibre entre l’échantillon et le dialysat est atteint. Après la dernière modification, la réaction est généralement laissée pour exécuter toute la nuit. Après une période suffisamment longue, l’échantillon sans tampon ou - échangée est supprimée de la cassette. Une fois collectés, l’échantillon peut être analysé ou traitée ultérieurement, selon la nature de l’expérience.

maintenant que nous ' ve regardé une procédure générale de dialyse, laissez ' s voir quelques-unes des façons cette technique est utilisée en biochimie.

Gradients de densité de

sont un moyen courant pour séparer les échantillons biologiques complexes. Ce concept repose sur la distribution en petites particules, typiquement saccharose ou césium ions chlorure. Une fois terminé, ces réactifs doivent généralement être retiré avant l’échantillon prélevé peut être traitée. Dialyse permet d’utiliser l’échantillon purifié pour l’analyse future.

Certaines protéines sont présentes dans une cellule ' bicouche lipidique s et sont généralement étudiés par eux entremêlant dans des vésicules lipidiques sphériques appelées liposomes. Les protéines et les lipides sont d’abord extraites avec un détergent. Dialyse peut être utilisé pour retirer lentement le détergent, formant protéoliposomes.

Après purification, certaines protéines sont misfolded, ou dénaturés, conduisant à une perte de fonctionnalité. Les composés qui causent ces changements dans la structure peuvent être enlevés avec la dialyse, conduisant à la réforme du fonctionnement des analytes.

vous ' ve juste regardé JoVE ' s-vidéo sur la dialyse. Vous devez maintenant comprendre cette méthode axée sur la diffusion et l’utilisation de cette technique une simple procédure expérimentale.

Merci pour regarder !

Cite this Video

JoVE Science Education Database. L'essentiel de la biochimie. Dialyse : Diffusion basé séparation. JoVE, Cambridge, MA, (2017).

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