Этот протокол описывает, как создавать электроды углеродного волокна. Электроды в дальнейшем использоваться для обнаружения катехоламинов освобождение от пузырьков с углекислым amperometry волокна.
Abstract
Электроды из углеродного волокна имеют решающее значение для выявления выпуска катехоламинов из везикул в одиночных камерах для amperometry измерений. Здесь мы описываем методы, необходимые для создания низкий уровень шума (<0,5 мкА) электроды. Методы были изменены из опубликованных описаний предыдущими исследователями (1,2). Электроды изготавливаются путем подготовки углеродных волокон и резьбы по отдельности в каждом капилляре с помощью вакуума с фильтром для аспирации волокна. Далее, капиллярная трубка с волокна, запряженных электрода съемник, создавая две половины, каждая из которых тонкой заостренной верхушкой. Электроды, смоченным в горячей, жидкой эпоксидной смешивается с отвердителем для создания стеклотекстолита печатью. Наконец, электроды помещаются в печь, чтобы вылечить эпоксидной смолы. Тщательная обработка электродов имеет решающее значение для обеспечения того, чтобы они сделаны последовательно и без повреждений. Этот протокол показывает, как изготовить и сократить амперометрического электроды для записи от отдельных клеток.
Protocol
Часть 1: Подготовка Carbon Fiber Вырезать пучка углеродных волокон (мы используем 7 мкм в диаметре) в длину, которая составляет ~ 1,25 х длина капиллярной пипетки. Удалить размеров путем кипячения ~ 100 мл ацетона в контейнер и добавление волокна к горячему, кипящего ацетона в течение 30 ?…
Discussion
Этот протокол описывает, как создавать и сократить амперометрического электродов. Во время амперометрического записей, электрод из углеродного волокна помещают на поверхность секреторных клеток. Exocytotic активность наблюдается как амперометрического шипы, который показывает текущее ?…
Acknowledgements
Мы благодарим д-р Аарон П. Фокс в Чикагском университете, в лаборатории которого этот протокол был первоначально разработан, и Уильям Роден (Saint Louis University) для дальнейшего развития протокола.
Мы благодарим Фонд Уайтхолл и Национальный научный фонд для поддержки.
Materials
Material Name
Type
Company
Catalogue Number
Comment
Epoxy Hardener 1,3-phenylene-diamene flakes
Reagent
Sigma Aldrich
P23954-100G04 716AJ
Aliquots are stored in a dessicator and should not be exposed to light.