Bu protokol, karbon fiber elektrotlar oluşturmak anlatılmaktadır. Bu elektrotlar daha sonra, karbon fiber amperometri ile veziküller katekolamin sürüm algılamak için kullanılır.
Abstract
Karbon fiber elektrotlar amperometri ölçümler için tek hücre veziküller katekolamin salınımının tespiti için çok önemlidir. Burada, düşük gürültü (<0,5 pA) elektrotlar üretmek için gerekli teknikler açıklanmaktadır. Teknikleri önceki araştırmacıların (1,2) tarafından yayınlanan açıklamaları modifiye edilmiştir. Elektrotlar karbon elyaf hazırlama ve lif aspire bir filtre ile vakum kullanarak her kapiller tüpe ayrı ayrı iş parçacığı tarafından yapılır. Sonra, fiber ile kılcal tüpü ince sivri ucu ile iki yarısı, her bir elektrot çektirmenin tarafından çekilir. Elektrotlar sıcak, sıvı epoksi, epoksi-cam bir mühür oluşturmak için sertleştirici ile karışık batırılmış. Son olarak, epoksi kür için bir fırın elektrotlar yerleştirilir. Elektrotlar dikkatli kullanımı, tutarlı bir şekilde ve zarar vermeden yapılır sağlamak için kritik öneme sahiptir. Bu protokol tek hücre kayıt için amperometrik elektrotlar imal ve nasıl kesileceğini gösterir.
Protocol
Bölüm 1: Karbon Elyaf Hazırlama Kapiller pipet ~ 1.25 X uzunluğu bir uzunlukta bir paket karbon elyaf (7μm çapı) kesin. Kaynama boyutlandırma kaldırın ~ 100 mL ve bir kap içinde aseton, 30 dakika veya daha uzun bir süre için kaynar aseton lifler. Sıcak aseton lifler çıkarın ve temiz bir behere 50-100 ml taze aseton transfer. Kuru, açık bir 150 mm Petri kabında paket yerleştirerek ve airdry geceleme fiberler. Bölüm 2: Yangın…
Discussion
Bu protokol amperometrik elektrotlar oluşturmak ve nasıl kesileceği açıklanmıştır. Amperometrik kayıtları sırasında, karbon fiber bir elektrot bir salgı hücre yüzeyine karşı yerleştirilir. Exocytotic faaliyet katekolamin oksidasyonu sonra elektron transferi ile oluşan elektrokimyasal akım gösterir amperometrik ani olarak görülmektedir. Pratik yapma ve kesme amperometrik elektrotlar sayesinde, piyasada bulunan elektrotlar pek çok üzerinde gürültü seviyeleri büyük ölçüde geliştirilmiş ol…
Acknowledgements
Bu protokol başlangıçta tasarlanmış olan laboratuar, Chicago Üniversitesi'nde Dr. Aaron P. Fox teşekkür eder, ve daha da geliştirilmesi için protokol William Roden (Saint Louis Üniversitesi).
Biz Whitehall Vakfı, Ulusal Bilim Vakfı ve destek için teşekkür ederiz.
Materials
Material Name
Type
Company
Catalogue Number
Comment
Epoxy Hardener 1,3-phenylene-diamene flakes
Reagent
Sigma Aldrich
P23954-100G04 716AJ
Aliquots are stored in a dessicator and should not be exposed to light.