Кальций сигналы играют ключевую роль во многих клеточных процессах, включая экспрессию генов, выживание и дифференцирование. Здесь показано, как выполнить кальция визуализации с использованием Фура-2 AM. Кальций изображений является ценным инструментом для изучения регуляции внутриклеточного кальция в режиме реального времени и его регуляции сигнальных каскадов.
Abstract
Кальций визуализации распространенный прием, который используется для измерения кальция сигналов в культуре клеток. Кальций методы визуализации воспользоваться кальция индикатор красители, которые BAPTA основе органических молекул, которые изменяют их спектральные свойства в ответ на связывание ионов Са2 +. Красителей кальция индикатор делятся на две категории, отношение-метрики красители, как Фура-2 и индо-1 и одной длины волны красители, как Fluo-4. Отношение-метрики красителей изменить либо их возбуждения или их спектров излучения в ответ на кальций, позволяя концентрации внутриклеточного кальция, чтобы быть определена из соотношения флуоресценции выбросов или возбуждения при различных длинах волн. Главным преимуществом использования соотношение метрике красителей по одной длине волны зондов является то, что отношение сигнал не зависит от концентрации красителя, интенсивности освещения, а длина оптического пути позволяющий концентрации внутриклеточного кальция, которые будут определены независимо от этих артефактов. Одним из наиболее общих показателей кальция Fura-2, который имеет выбросов пик при 505 нм и изменения ее возбуждения пик от 340 нм до 380 нм в ответ на кальций обязательными. Здесь мы опишем использование Фура-2 для измерения внутриклеточного кальция высот в нейронах и других возбудимых клеток.
Protocol
Культуре клеток Клетки могут быть выращены с использованием установленных методов, но должны быть покрыты на # 1 стакан покровные покрыта сотовой клея (как полилизином, polyornithine или ламинин), чтобы предотвратить клетки от отключения или перемещения во время съемки экспери?…
Discussion
В этой презентации мы прошли через все шаги для выполнения кальция визуализации с использованием Фура-2 AM. Мы использовали нейроны коры, как модель, но кальция визуализации может быть использован для измерения внутриклеточного кальция в реальном времени в различных клетках. При выполнении этой п?…