إشارات الكالسيوم يلعب دورا رئيسيا في العديد من العمليات الخلوية بما في ذلك بقاء الجينات والتعبير والتمايز. نحن هنا لشرح كيفية القيام به Fura التصوير الكالسيوم ، 02:00. التصوير الكالسيوم هو أداة قيمة لدراسة تنظيم الكالسيوم داخل الخلايا في الوقت الحقيقي ولائحته التعاقب الإشارة.
Abstract
التصوير الكالسيوم هو تقنية مشتركة يمكن أن يكون مفيدا لقياس اشارات الكالسيوم في الخلايا المستزرعة. تقنيات التصوير الكالسيوم الاستفادة من الأصباغ مؤشر الكالسيوم ، والتي مقرها BAPTA الجزيئات العضوية التي تغير خصائصها الطيفية ردا على ربط أيونات + CA2. الأصباغ مؤشر الكالسيوم في فئتين ، ونسبة – متري الأصباغ مثل Fura – 2 – 1 والهندية وحيدة الطول الموجي مثل الأصباغ Fluo – 4. نسبة الأصباغ ، إما تغيير متري من الإثارة أو أطياف من الانبعاثات ردا على الكالسيوم ، مما يسمح تحديد تركيز الكالسيوم داخل الخلايا من نسبة انبعاث مضان أو الإثارة في موجات مختلفة. والميزة الرئيسية لاستخدام نسبة – متري الأصباغ خلال تحقيقات الطول الموجي واحد هو أن نسبة إشارة مستقلة للتركيز الأصباغ ، وشدة الإضاءة ، والبصرية طول مسار السماح تحديد تركيز الكالسيوم داخل الخلايا بشكل مستقل من هذه التحف. أحد المؤشرات الأكثر شيوعا هو الكالسيوم Fura – 2 ، التي لديها ذروة الانبعاثات في 505 نانومتر ، والتغييرات الإثارة ذروتها من 340 نانومتر إلى 380 نانومتر ردا على الكالسيوم ملزمة. نحن هنا وصف استخدام Fura – 2 لقياس الارتفاعات الكالسيوم في الخلايا العصبية والخلايا الأخرى منفعل.
Protocol
خلية ثقافة يمكن زراعة الخلايا باستخدام تقنيات راسخة ولكن يجب أن يكون مطلي على # 1 coverslips الزجاج المطلي مع مادة لاصقة الخلوية (مثل polyornithine ، أو متعدد الليزين laminin) لمنع الخلايا من فصل أو نقل خلال تجارب التصوير. <p class="jove_title" style=";text-align:r…
Discussion
في هذا العرض لقد مررنا كافة الخطوات لتنفيذ التصوير باستخدام الكالسيوم Fura – 2 AM. استخدمنا العصبونات القشرية كنموذج ولكن يمكن استخدامها لقياس التصوير الكالسيوم الكالسيوم داخل الخلايا في الوقت الحقيقي في مجموعة متنوعة من الخلايا. عندما تفعل هذا الإجراء المهم لاستخدام الزجاج بدلا …