Summary
在这里，我们描述一个心脏外科手术植入房室沟成年Lewis大鼠的工程组织。
Abstract
鼠类手术往往是在评估工程组织的效用的重要组成部分。一个可以进行多种外科手术中常见的实验室大鼠或小鼠，这些屡有作为台式实验和大量的动物试验或人体试验之间的一个中间步骤。由于啮齿类动物提供了建立，成本效益，和生理相关的模型系统测试新型脚手架材料和细胞组合，他们是特别适合心血管组织工程研究。目前，我们描述了一个开放的心脏外科手术植入工程组织含有生肌祖细胞在房室（AV）的老鼠心脏的凹槽。这些植入物的目的是建立完整的心脏传导阻滞[1]的儿科患者提供一种替代传统的心脏起搏器植入术治疗的最终目标与右心房和右心室之间的电气管道。工程的组织是通过开胸手术的方式植入在AV槽。对于我们而言，Lewis大鼠麻醉，侵入性通风，保持气道正压在无菌手术过程。向心的方法是通过安特罗外侧切口，由右侧开胸在5
Protocol
第1部分：全身麻醉诱导
- 一个200-250克Lewis大鼠50毫克/公斤氯胺酮和4毫克/公斤甲苯噻嗪注射到腹腔内，用30 G针麻醉。上腹部和右胸部裁剪，去除头发和70％的乙醇，然后一个外用碘伏消毒液彻底清洗切口部位。
- 动物插管endotracheally使用16 g静脉导管连接到小动物呼吸机（哈佛器械）。呼吸器是连接到一个蒸发器，提供0.5〜1.0％异氟醚（百特）100％的氧气混合，以维持全身麻醉。调整呼吸速率和潮气量是根据对大鼠的体重。动物被放置在一个加热垫（遮光罩热PAD）在手术过程中保持体温。
- 整个手术过程pulsoximeter设备（的Nellcor）中监测心率和血氧饱和度，是裁剪到背部四肢之一。
第2部分：开胸和工程组织植入
- 手术部位的准备无菌手术的立体裁剪，用毛巾夹的地方举行。
- 从安特罗外侧切口右胸侧壁，正上方的第 5肋间。胸部的内部访问通过的第 5肋间的定位是一个小拉钩（Roboz）最大化的观点。
- 心包切开略高于从基地走向心尖，右心房和右心室的附录。随后，AV槽和外膜层相邻的三角形主动脉房室除了轻轻地戏弄。
- 7-0普理灵缝合（爱惜康）是放在通过右心室的基础肩。一个2 × 2 × 2毫米件是从工程的组织构造解剖和定位内的AV槽并与普理灵缝合轻轻绑。
- 检查手术野出血，两个4-0薇乔缝线（爱惜康）之间的上部和下部的肋间放置封闭的肋骨笼。
- 任何明显的气胸是挖掘扩大肺部的呼吸方式。
- 胸壁，然后封闭层。
第3部分：恢复
- 而动物从手术中恢复，切口部位渗透用5毫升0.25％ 布比卡因[2] 。
- 动物是从呼吸器拔管以下断奶，是用新鲜的床上用品返回一个笼子里，一旦完全清醒和胸骨。老鼠随后3天，0.01毫克/公斤丁丙诺啡镇痛皮下注射，每12小时。
第4部分：代表结果
如果正确执行，AV槽的心（图1）结果大于90％的动物恢复手术植入的工程组织。
图1。暴露的工程组织植入网站的核心照片。
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Discussion
对于手术过程的一个有利的结果，关键是正确插管及侵入性的动物通风。如果老鼠是简单的镇静剂和允许自发呼吸，肺部都将不可避免地崩溃，而胸腔打开由于在啮齿类动物的共同胸膜。胸部闭幕前，必须完全消除任何气胸和肺部完全展开，以减少肺不张。否则，断奶呼吸器和恢复将是不成功的和动物将成为高碳酸血症和/或缺氧[3]。去除外膜组织内的AV槽是潜在的危险，并可能导致大量的静脉出血，右心房，由于大鼠心房壁的微妙性质。虽然放置在步骤2.4中的普理灵缝合，这是必须做到心中有数，避免冠状动脉分支。标题垫在经济复苏期间或它的体温会突然下降，动物应保持温暖。
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Disclosures
机构动物护理和使用委员会在波士顿儿童医院规定的准则和法规的规定进行了动物实验。
Acknowledgments
这项工作是从美国国立卫生研究院的研究补助金（HL068915 HL088206）和在波士顿儿童医院的心脏传导基金捐款支持。
Materials
| Name | Type | Company | Catalog Number | Comments |
| 7x4 Thermo Pad 4/box | Equipment | Hood Thermo-Pad, Summerland, BC Canada | MODEL 704R | |
| Inspira ASV Ventilator | Equipment | Harvard Apparatus | ||
| Handheld Pulse Oximeter | Equipment | Nellcor | N20PA | |
| Retractor | Equipment | Roboz Surgical Instruments Co. | RS-6514 | |
| Isoflurane (Forane) | Reagent | Baxter Internationl Inc. | 1001936040 | |
| Ketamine HCl | Reagent | Hospira Inc. | RL-0065 | |
| Xylazine (AnaSed) | Reagent | Lloyd, Inc. | LB15705A | |
| Buprenorphine HCL Inject | Reagent | Bedford Laboratories | Div-BUP-P00 | |
| Bupivacaine 0.25% | Reagent | Hospira Inc. |
References
- Choi, Y. H. Cardiac conduction through engineered tissue. Am J Pathol. 169, 72-85 (2006).
- Shin, J. W. Low-dose systemic bupivacaine prevents the development of allodynia after thoracotomy in rats. Anesth Analg. 107, 1587-1591 (2008).
- Horstick, G. Surgical procedure affects physiological parameters in rat myocardial ischemia: need for mechanical ventilation. Am J Physiol. 276, H472-H479 (1999).
