Summary

تشريح السكيراء الجعوية زقاق

Published: May 19, 2009
doi:

Summary

وهناك حاجة المجهرية من خلايا الخميرة عن التحليل الوراثي لتحديد الانتصافي أو بيضات ملقحة مضاعفا. وتنفذ هذه micromanipulations خارج باستخدام المجهر microneedle من تشريح. يستخدم لنقل microneedle الخلايا ، ويتم التحكم بها micromanipulator التي تتوفر مع درجات مختلفة من التشغيل الآلي.

Abstract

الخميرة هي نظام نموذجي الانقياد إلى حد كبير أن تستخدم لدراسة العديد من العمليات الخلوية المختلفة. سلالة المختبرية المشتركة<em> السكيراء الجعوية</em> موجود في فرداني إما الدولة أو مضاعفا. القدرة على الجمع بين اثنين من الأليلات haploids والقدرة على إدخال تعديلات على الجينوم يتطلب إنتاج وتشريح زقاق. زقاق الإنتاج من خلايا فرداني يبدأ التزاوج مع اثنين من سلالات الخميرة فرداني مع أنواع التزاوج متوافقة لإنتاج سلالة مضاعفا. ويمكن تحقيق ذلك في عدد من الطرق إما صلبة أو متوسطة في السائل. فإنه من المفيد تحديد لdiploids في المتوسط ​​التي تعزز بشكل انتقائي نموها مقارنة مع أي من سلالات فرداني. ويسمح بعد ذلك لdiploids sporulate على المواد الغذائية للفقراء المتوسطة لتشكيل زقاق ، مجموعة من أربع خلايا ابنة فرداني الناتجة عن الاستنساخ الانتصافي من مضاعفا. ثم يتم التعامل مع خليط من الخلايا الخضرية وزقاق مع zymolyase انزيم لهضم بعيدا الكيس الغشاء الذي يحيط ascospores من زقاق. باستخدام المجهرية مع microneedle تحت المجهر تشريح يمكن للمرء أن يلتقط زقاق فردية ومنفصلة ونقل وascopores الأربعة. تزرع زقاق تشريح لعدة أيام واختبارها للعلامات أو الأليلات الاهتمام من جانب الطلاء طبق على وسائط انتقائية مناسبة.

Protocol

بناء سلالات ضعفاني بروتوكول للانتاج عن طريق التزاوج diploids ينبغي ضرب سلالات المبدئي على YPD المتوسطة ، أو انتقائية إذا لزم الأمر ، لإنتاج مستعمرات واحد. ينبغي أن يكون فرداني سلالتين من نوع التزاوج المعاكس (أي. MATA وMATα)…

Discussion

تشريح الخميرة هي أداة مفيدة لتحديد سلالات جديدة مع العلامات المطلوبة. عند تحديد نمط النمو النظرية أربعة ascospores من المهم أن ننظر إلى التركيب الوراثي للخلية النباتية. إذا البلازميد هو الحاضر ، يجب على المرء أن يعرف إذا كانت نسخة واحدة ، وانخفاض أو ارتفاع لأن هذا سيؤثر ا?…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

ويتم تمويل عمل في مختبر البلاغ من قبل المعاهد الكندية لأبحاث الصحة ، والمؤسسة الكندية للإبداع ، والعلوم الطبيعية والهندسة مجلس البحوث وجامعة كونكورديا.

Materials

Material Name Type Company Catalogue Number Comment
Singer MSM System 200 Microscope Singer Instruments NA  
D-sorbitol Reagent BioShop SOR508  
Tris Reagent BioShop TRS001  
Zymolyase 100T Reagent Seikagaku Corporation 120493  
Yeast extract Reagent BioShop YEX401  
Peptone Reagent BioShop PEP 403  
D-glucose Reagent BioShop GLU501  
Yeast nitrogen base Reagent BioShop YNB406  
Bio-tryptone Reagent BioShop TRP402  
Sodium chloride Reagent BioShop SOD002  
Potassium acetate Reagent BioShop POA 301  
Agar Reagent BioShop AGR003  
Adenine sulfate Reagent BioShop ADS201  
L-uracil Reagent BioShop URA 241  
L-tryptophan Reagent BioShop TRP 100  
L-histidine Reagent BioShop HIS 200  
L-arginine Reagent Amresco 0877-100G  
L-methionine Reagent BioShop MET 222  
L-tyrosine Reagent BioShop TYR 333  
L-isoleucine Reagent BioShop ISO 910  
L-valine Reagent BioShop VAL 201  
L-lysine Reagent BioShop LYS 101  
L-phenylalanine Reagent BioShop PHA 302  
L-glutamic acid Reagent BioShop GLU 202  
L-threonine Reagent BioShop THR002  
L-leucine Reagent BioShop LEU 222  

References

  1. Sherman, F., Hicks, J., Guthrie, C., Fink, G. R. Micromanipulation and Dissection of Asci. Guide to Yeast Genetics and Molecular Biology. , 21-37 (1991).

Play Video

Cite This Article
Morin, A., Moores, A. W., Sacher, M. Dissection of Saccharomyces Cerevisiae Asci. J. Vis. Exp. (27), e1146, doi:10.3791/1146 (2009).

View Video