تشريح السكيراء الجعوية زقاق

Summary

وهناك حاجة المجهرية من خلايا الخميرة عن التحليل الوراثي لتحديد الانتصافي أو بيضات ملقحة مضاعفا. وتنفذ هذه micromanipulations خارج باستخدام المجهر microneedle من تشريح. يستخدم لنقل microneedle الخلايا ، ويتم التحكم بها micromanipulator التي تتوفر مع درجات مختلفة من التشغيل الآلي.

Abstract

الخميرة هي نظام نموذجي الانقياد إلى حد كبير أن تستخدم لدراسة العديد من العمليات الخلوية المختلفة. سلالة المختبرية المشتركة<em> السكيراء الجعوية</em> موجود في فرداني إما الدولة أو مضاعفا. القدرة على الجمع بين اثنين من الأليلات haploids والقدرة على إدخال تعديلات على الجينوم يتطلب إنتاج وتشريح زقاق. زقاق الإنتاج من خلايا فرداني يبدأ التزاوج مع اثنين من سلالات الخميرة فرداني مع أنواع التزاوج متوافقة لإنتاج سلالة مضاعفا. ويمكن تحقيق ذلك في عدد من الطرق إما صلبة أو متوسطة في السائل. فإنه من المفيد تحديد لdiploids في المتوسط ​​التي تعزز بشكل انتقائي نموها مقارنة مع أي من سلالات فرداني. ويسمح بعد ذلك لdiploids sporulate على المواد الغذائية للفقراء المتوسطة لتشكيل زقاق ، مجموعة من أربع خلايا ابنة فرداني الناتجة عن الاستنساخ الانتصافي من مضاعفا. ثم يتم التعامل مع خليط من الخلايا الخضرية وزقاق مع zymolyase انزيم لهضم بعيدا الكيس الغشاء الذي يحيط ascospores من زقاق. باستخدام المجهرية مع microneedle تحت المجهر تشريح يمكن للمرء أن يلتقط زقاق فردية ومنفصلة ونقل وascopores الأربعة. تزرع زقاق تشريح لعدة أيام واختبارها للعلامات أو الأليلات الاهتمام من جانب الطلاء طبق على وسائط انتقائية مناسبة.

Protocol

بناء سلالات ضعفاني بروتوكول للانتاج عن طريق التزاوج diploids ينبغي ضرب سلالات المبدئي على YPD المتوسطة ، أو انتقائية إذا لزم الأمر ، لإنتاج مستعمرات واحد. ينبغي أن يكون فرداني سلالتين من نوع التزاوج المعاكس (أي. MATA وMATα)…

Discussion

تشريح الخميرة هي أداة مفيدة لتحديد سلالات جديدة مع العلامات المطلوبة. عند تحديد نمط النمو النظرية أربعة ascospores من المهم أن ننظر إلى التركيب الوراثي للخلية النباتية. إذا البلازميد هو الحاضر ، يجب على المرء أن يعرف إذا كانت نسخة واحدة ، وانخفاض أو ارتفاع لأن هذا سيؤثر ا?…

Materials

Material Name	Type	Company	Catalogue Number	Comment
Singer MSM System 200	Microscope	Singer Instruments	NA
D-sorbitol	Reagent	BioShop	SOR508
Tris	Reagent	BioShop	TRS001
Zymolyase 100T	Reagent	Seikagaku Corporation	120493
Yeast extract	Reagent	BioShop	YEX401
Peptone	Reagent	BioShop	PEP 403
D-glucose	Reagent	BioShop	GLU501
Yeast nitrogen base	Reagent	BioShop	YNB406
Bio-tryptone	Reagent	BioShop	TRP402
Sodium chloride	Reagent	BioShop	SOD002
Potassium acetate	Reagent	BioShop	POA 301
Agar	Reagent	BioShop	AGR003
Adenine sulfate	Reagent	BioShop	ADS201
L-uracil	Reagent	BioShop	URA 241
L-tryptophan	Reagent	BioShop	TRP 100
L-histidine	Reagent	BioShop	HIS 200
L-arginine	Reagent	Amresco	0877-100G
L-methionine	Reagent	BioShop	MET 222
L-tyrosine	Reagent	BioShop	TYR 333
L-isoleucine	Reagent	BioShop	ISO 910
L-valine	Reagent	BioShop	VAL 201
L-lysine	Reagent	BioShop	LYS 101
L-phenylalanine	Reagent	BioShop	PHA 302
L-glutamic acid	Reagent	BioShop	GLU 202
L-threonine	Reagent	BioShop	THR002
L-leucine	Reagent	BioShop	LEU 222