Микроманипуляция дрожжевых клеток необходимо для мейоза генетического анализа или для выбора диплоидные зиготы. Эти micromanipulations осуществляются с помощью микроиглы о вскрытии микроскопом. Микроиглы используется для перемещения клетки и находится под контролем микроманипулятора, которые доступны с различной степенью автоматизации.
Abstract
Дрожжи очень послушный модель системы, которая используется для изучения различных клеточных процессов. Общая нагрузка лаборатории<em> Saccharomyces CEREVISIAE</em> Существует в любом гаплоидных или диплоидных государства. Способность сочетать аллелей от двух гаплоидов и способности вносить изменения в геноме требует производства и вскрытия сумки. Сумки продукции из гаплоидных клеток начинается с спаривания двух гаплоидных дрожжевых штаммов с совместимых типов спаривания, чтобы произвести диплоидные напряжения. Это может быть достигнуто в несколько способов как на твердой среде или в жидкости. Это выгодно, чтобы выбрать для диплоиды в среду, избирательно способствует их росту по сравнению с любым из гаплоидных штаммов. Диплоиды затем разрешили sporulate на бедных питательными веществами средой для формирования сумки, пакет из четырех гаплоидных дочерних клеток в результате мейоза воспроизводства диплоидные. Смесь растительных клеток и сумки затем обрабатывают ферментом zymolyase переварить от мембранного мешка окружающих аскоспор из сумки. Использование микроманипуляция с микроиглы под микроскопом рассечение можно подобрать индивидуальный сумки и отдельно и перемещать четыре ascopores. Расчлененный сумки выращивается в течение нескольких дней и испытаны для маркеров или аллелей интерес при посеве реплики на соответствующих селективных средах.
Protocol
Строительство диплоидных штаммов Протокол для производства диплоиды в результате скрещивания Начальная штаммы должны быть исключены на YPD или селективной среде, в случае необходимости, для получения отдельных колоний. Два гаплоидных штаммов должны быть противоположного ти…
Discussion
Дрожжи вскрытия является полезным инструментом для выбора новых штаммов с нужными маркерами. При определении теоретической модели роста из четырех аскоспор важно, чтобы смотреть на генотип вегетативные клетки. Если плазмиды присутствует, надо знать, если она не замужем, низкая или вы?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Работа в лаборатории автора финансируется Канадским институтом исследований в области здравоохранения, Канада Фонд инноваций, естественным наукам и инженерным исследованиям Совета и Университет Конкордия.