המיקרומניפולציה בתאי שמרים דרוש ניתוח גנטי meiotic או לבחור zygotes דיפלואידי. Micromanipulations אלה מתבצעות באמצעות microneedle של מיקרוסקופ לנתיחה. Microneedle משמש להעביר תאים נשלטת על ידי micromanipulator אשר זמינים עם דרגות שונות של אוטומציה.
Abstract
שמרים היא מערכת מודל ממושמע מאוד המשמש מחקר רבים בתהליכים תאיים שונים. המתח מעבדה משותפת<em> Saccharomyces cerevisiae</em> קיים הפלואידים או מצב דיפלואידי. היכולת לשלב שני אללים haploids ואת היכולת להנהיג שינויים בגנום מחייבת ייצור של asci לנתיחה. ייצור Asci מתאי הפלואידים מתחיל החיזור של שני זני שמרים הפלואידים עם סוגים ההזדווגות תואם לייצר זן דיפלואידי. ניתן להשיג זאת במספר דרכים או על מדיום מוצק או נוזלי. זהו יתרון לבחור עבור diploids במדיום זה סלקטיבי מקדם צמיחה שלהם לעומת כל אחד הזנים הפלואידים. Diploids מותר אז sporulate על מדיום תזונתי דל להקים asci, חבילה של ארבעה תאים הפלואידים בת הנובע רבייה meiotic של דיפלואידי. תערובת של התאים הצמחיים, asci מטופל אז עם zymolyase את האנזים לעכל משם את שק קרום המקיף את ascospores של asci. שימוש המיקרומניפולציה עם microneedle תחת מיקרוסקופ לנתיחה אחד יכול להרים asci הפרט נפרד להעביר את ארבעת ascopores. Asci גזור גדלים במשך כמה ימים נבדקו סמנים או אללים של עניין על ידי ציפוי העתק על גבי מדיה סלקטיבית המתאימה.
Protocol
בנייה של זנים דיפלואידי פרוטוקול לייצור diploids ידי הזדווגות זנים הראשוני צריך להיות הכה על YPD בינוני, או סלקטיבי במידת הצורך, כדי לייצר מושבות אחת. שני זנים הפלואידים צריך להיות סוג של הזדווגות ההפוך (כלומר, מאטה ו MAT?…
Discussion
דיסקציה שמרים הוא כלי שימושי כדי לבחור זנים חדשים עם סמנים הרצוי. בעת קביעת דפוס הצמיחה התיאורטי של ארבעה ascospores חשוב להסתכל גנוטיפ של התא הווגטטיבי. אם הפלסמיד הוא ההווה, צריך לדעת אם הוא עותק יחיד, נמוך או גבוה כמו זה ישפיע אשר ascospore (ים) לקבל את הפלסמיד ואת ישפיע התחזי…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
העבודה במעבדה של המחבר ממומנת על ידי מכוני המחקר הקנדי הבריאות, קרן קנדה עבור חדשנות, למדעי הטבע וההנדסה מועצת המחקר ואת אוניברסיטת קונקורדיה.