의 해부 Saccharomyces Cerevisiae Asci
Summary
효모 세포의 미세 조작은 diploid의 zygotes을 선택 meiotic 유전 분석 또는 필요합니다. 이러한 micromanipulations은 해부 현미경의 microneedle를 사용하여 수행됩니다. microneedle는 세포를 재배치하는 데 사용됩니다 및 자동화의 다양한 학위와 함께 사용할 수 있습니다 micromanipulator에 의해 제어됩니다.
Abstract
효모는 다양한 세포 과정을 연구하는 데 사용되는 매우 다루기 쉬운 모델 시스템입니다. 일반적인 실험실 변형<em> Saccharomyces cerevisiae</em> haploid 또는 diploid 상태 중 하나에 존재합니다. 이 haploids에서 대립 유전자를 조합하는 능력과 게놈에 수정을 소개하는 능력은 asci의 생산과 절개를 필요로합니다. haploid 세포에서 Asci 생산 diploid의 변형을 만들어 호환 짝짓기 형식의 두 개의 효모 haploid의 종자의 짝짓기와 함께 시작됩니다. 이것은 고체 매체에 또는 액체 중 여러 가지 방법으로 수행할 수 있습니다. 그것은 선택적으로 haploid 변종 중 하나에 비해 자신의 성장을 촉진 매체 diploids을 선택에 유리합니다. diploids 그러면 asci, diploid의 meiotic 복제로 인한 사 haploid 딸 세포의 번들 형태로 영양분이 가난한 매체에 sporulate 수 있습니다. 식물 세포와 asci의 혼합물은 다음 asci의 ascospores를 둘러싼 막 색 멀리 소화 효소 zymolyase로 처리됩니다. 한 개인 asci를 선택하고 네 개의 ascopores 분리 및 재배치 수있는 해부 현미경 아래 microneedle과 미세 조작을 사용합니다. 해부 asci은 며칠 동안 성장하고 적절한 선택 매체에 복제 도금에 의해 관심의 표시 또는 대립 유전자에 대한 검사를하고 있습니다.
Protocol
Discussion
효모 해부 원하는 마커 새로운 변종을 선택하는 유용한 도구입니다. 네 ascospores의 이론적인 성장 패턴을 결정할 때 그것은 식물 세포의 유전자형 보는 것이 중요합니다. 플라스미드가 있으면이 ascospore (들)은 플라스미드를 받고 조작되는 변종에 대한 예측과 결론에 영향을 미칠 수있는 영향을 줄 수로가 하나의 낮은 또는 높은 복사하는 경우, 하나는 알고 있어야합니다.
일?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
저자의 실험실에서 작품은 건강 연구의 캐나다 연구소, 혁신, 자연 과학 및 공학 연구위원회와 콩코디아 대학에 대한 캐나다 재단 후원됩니다.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Singer MSM System 200 | Microscope | Singer Instruments | NA | |
| D-sorbitol | Reagent | BioShop | SOR508 | |
| Tris | Reagent | BioShop | TRS001 | |
| Zymolyase 100T | Reagent | Seikagaku Corporation | 120493 | |
| Yeast extract | Reagent | BioShop | YEX401 | |
| Peptone | Reagent | BioShop | PEP 403 | |
| D-glucose | Reagent | BioShop | GLU501 | |
| Yeast nitrogen base | Reagent | BioShop | YNB406 | |
| Bio-tryptone | Reagent | BioShop | TRP402 | |
| Sodium chloride | Reagent | BioShop | SOD002 | |
| Potassium acetate | Reagent | BioShop | POA 301 | |
| Agar | Reagent | BioShop | AGR003 | |
| Adenine sulfate | Reagent | BioShop | ADS201 | |
| L-uracil | Reagent | BioShop | URA 241 | |
| L-tryptophan | Reagent | BioShop | TRP 100 | |
| L-histidine | Reagent | BioShop | HIS 200 | |
| L-arginine | Reagent | Amresco | 0877-100G | |
| L-methionine | Reagent | BioShop | MET 222 | |
| L-tyrosine | Reagent | BioShop | TYR 333 | |
| L-isoleucine | Reagent | BioShop | ISO 910 | |
| L-valine | Reagent | BioShop | VAL 201 | |
| L-lysine | Reagent | BioShop | LYS 101 | |
| L-phenylalanine | Reagent | BioShop | PHA 302 | |
| L-glutamic acid | Reagent | BioShop | GLU 202 | |
| L-threonine | Reagent | BioShop | THR002 | |
| L-leucine | Reagent | BioShop | LEU 222 |
References
- Sherman, F., Hicks, J., Guthrie, C., Fink, G. R. Micromanipulation and Dissection of Asci. Guide to Yeast Genetics and Molecular Biology. , 21-37 (1991).
