Esta película y el protocolo se pretende ayudar al aprendizaje de la transferencia nuclear.
Abstract
La transferencia nuclear en un ovocito no fertilizado puede restablecer el potencial de desarrollo de una célula diferenciada. Esto demuestra que los procesos que subyacen al desarrollo, la diferenciación y el envejecimiento son epigenéticos en lugar de los procesos genéticos. La reversibilidad de estos procesos se abre perspectivas interesantes en la investigación básica, y en el futuro más lejano, en la medicina regenerativa. En el ratón, las células madre embrionarias se pueden derivar de la clonación de embriones de preimplantación etapa. Estas células madre embrionarias tienen la capacidad de dar lugar a todos los tipos celulares del organismo adulto. Es importante destacar que estas células son genéticamente idénticos al donante. Si es aplicable a humanos, esto permitirá la obtención de células madre de un paciente. Estas células podrían entonces ser diferenciado en el tipo de células afectadas del paciente y estudio in vitro, o se utiliza para reemplazar las células dañadas o faltantes. El estudio de la transferencia nuclear en el ratón sigue siendo importante ya que nos puede informar acerca de los principios de la reprogramación nuclear. Esta película y el protocolo de acompañamiento están destinadas a ayudar al aprendizaje de la transferencia nuclear en el ratón, un método desarrollado inicialmente en el grupo del Prof. Yanagimachi (Wakayama et al. 1998).
Protocol
Preparaciones: Una descripción detallada de superovulación y cultivo de embriones microgota se puede encontrar en otro lugar 2. Prepare una placa de Petri con microgotas de medio de cultivo de embriones (por ejemplo, KSOM, Chemicon). Cubrir con aceite mineral (lotes de aceite mineral deben ser probados para la compatibilidad con el cultivo de embriones). Equilibre a 37 ° C en el aire, más el 5% de CO 2. (En Thermo Electron-agua incubadora…
Discussion
¡Buena suerte!
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
DE gustaría agradecer al Dr. Ocultar Akutsu para compartir sus trucos NT y el Dr. Stephen Sullivan y Garrett Birkhoff para la lectura crítica del protocolo.
Materials
Material Name
Type
Company
Catalogue Number
Comment
Cytochalastin B
Sigma
100x stock = 500 ug/mL Cytochalasin B in DMSO. Store at -20˚ C.
Strontium Chloride
10x stock = 100 mM SrCl2 in H2O. Store at room temperature.
MCZB Stock Salts
Filter sterilize 500 mL master salts (good for 3-4 months; store at 4˚ C)
HCZB Stock Salts
Start with 500 mL master salts. Add 50 mg PVA. Stir for 30-60 min and sterile filter (good for 3 months; store at 4˚ C).
PVA
Sigma
P-8136
cold-soluble
HCZB with 11% w/v PVP
Start with 20 ml HCZB medium in a 50 mL conical tube. Place 22g PVP on top of liquid. Close tube and store undisturbed at 4˚ C for 72 – 96 hrs, at which time the PVP will have entered solution. Filter sterilize through an 8 mm filter and store at 4˚ C.
PVP
ICN Biochemicals
MW 360000
Please check for additional buffers compositions in the Protocol part.