Brain bank och systematisk provtagning av biologiskt material utgör grunden för objektiva stereology och maximerar de potentiella uppgifter som erhålls från varje prov.
Abstract
Objektiva stereology är en metod för korrekt och effektivt beräkna det totala neuron nummer (eller annan celltyp) i ett visst område av intresse<sup> 1</sup>. För att uppnå detta mål 6-10 systematiska sektioner bör sonderade täcker hela strukturen. Vanligtvis innebär behandling 1 / 5 sektioner som lämnar en stor mängd material obearbetade. För att maximera materialet, föreslår vi en billig metod för att bevara fast vävnad som en del i en långsiktig lagring forskningsplan. Eftersom vävnad är skivad och bearbetas för önskad fläcken eller antikropp, alternativa sektioner systematiskt bör placeras i antigen bevara vid -20 ° C för framtida bearbetning. Använda 24-brunnars plattor, kan sektionerna placeras i ordning för framtida hämtning. Med denna metod kan vävnad lagras och behandlas för immunohistokemi under loppet av år.
Protocol
Del 1: Förbehandling av vävnad Vävnad skall vara väl perfusion med paraformaldehyd, glutaraldehyd eller formalin. Detta kan uppnås genom vanliga transcardial perfusion vanligtvis används för att skörda andra organ. I den aktuella studien i ämnet var djupt sederad med ketamin hydroklorid (10 mg / kg im), avlivas med en överdos av natrium pentobarbital (25 mg / kg, iv) och perfusion transcardially med 0,1 M PBS tills det är helt exsanguinated. Detta följs av en 4% paraformaldehyd lösning i PBS i 5 …
Discussion
Systematisk provtagning är en billig metod som syftar till att maximera forskningsmaterial. Denna provtagning strategi är utformad för att uppfylla reglerna för objektiva stereology som kräver systematisk provtagning i hela regionen. Det är avgörande att ordningen på avsnitten för varje serie bibehålls. I vårt laboratorium har vi framgångsrikt använt denna metod för bank både hamster och icke-mänskliga primater delar hjärnan. Hittills har vi samlat nära till 20.000 grön markatta (Chlorocebus aethi…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Författarna vill tacka Ikiel Ptito för hans fortsatta teknisk support.
Burke, M. W., Zangenehpour, S., Ptito, M. Brain Banking: Making the Most of your Research Specimens. J. Vis. Exp. (29), e1260, doi:10.3791/1260 (2009).