Summary
HC11 lactogenic分化的特点可以简称为微球体的半球形结构的形成。相衬显微镜的结构可以枚举援助量化lactogenic分化。
Abstract
常用的表型措施，以确定在小鼠乳腺上皮细胞培养的lactogenic分化程度是圆顶形细胞结构的形成，被称为微球体
Protocol
- 6天的RPMI 1640培养基中，10％小牛血清，5μg/ml胰岛素，10毫米的HEPES，在10ng/ml表皮生长因子（EGF），建立能力，HC11细胞生长汇合。
- 细胞用PBS洗涤，并保持24小时，在没有表皮生长因子生长介质。
- 为了诱导lactogenic分化的细胞培养分化的媒体，即地塞米松（10 -6 M）的RPMI，胰岛素（5微克/毫升）和催乳素（5微克/毫升），简称为DIP 。
- 在规定的时间后DIP此外，微球体进行了拍照，并列举使用数码相机奥林巴斯IX71显微镜相衬显微镜。
代表性的成果：
正常乳腺上皮细胞单层和多个微球体的低功率放大，以及作为一个单一的微球体的高功率放大如图1所示，分别为。 
图1。 （一） 微球体。正常乳腺上皮细胞单层应显示为一个平层的融合细胞。 （二），经过3-5天的DIP刺激出现多个微球体。拍照后5天的DIP此外。 （三）高倍率后的DIP另外5天微球体含有一个单一的领域。
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Discussion
为了使这项技术获得成功，最好的质量，必须保持上皮细胞在合流之前被lactogenic激素诱导。有可能有无数的微球体，这使得难以量化的情况下。因此，定量的目的，最好在一个时间点拍摄时的微球体，能算的微球体。
虽然有各种分子标记，用于确定乳腺上皮细胞的lactogenic分化程度，有几个用于2D文化细胞生长的形态标记。上皮细胞单层的能力，形成微型穹顶结构，牛奶蛋白质，可以积累提供了一个可以监视形态的变化，在这个发展过程中出现的模式。
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Acknowledgments
从国会导演医学研究基金资助（DAMD17 - 01 - 0264）ML卡特勒和美国军事癌症研究所ML卡特勒的资金支持工作。
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| RPMI | Invitrogen | 21870076 | |
| Fetal Bovine Serum | Atlanta Biologicals | S11550 | |
| L-Glutamine | GIBCO, by Life Technologies | 25030 | |
| PenStrep | GIBCO, by Life Technologies | 15140 | |
| Hepes | Quality Biological, Inc. | 118089060 | |
| EGF | Sigma-Aldrich | E9644 | |
| Insulin | GIBCO, by Life Technologies | 12585-014 | |
| Dexamethasone | Sigma-Aldrich | D1756 | |
| Microscope | Olympus Corporation | IX71 | |
| Digital Camera | QImaging | Retiga 2000RV Fast 1394 |
References
- Blatchford, D. R., Hendry, K. A., Turner, M. D., Burgoyne, R. D., Wilde, C. J. Vectorial secretion by constitutive and regulated secretory pathways in mammary epithelial cells. Epithelial Cell Biol. 4, 8-16 (1995).
- Wang, W. Glucocorticoid induced expression of connective tissue growth factor contributes to lactogenic differentiation of mouse mammary epithelial cells. J Cell Physiol. 214, 38-46 (2008).
