Ta avstånd celler från specifika vävnadstyper kräver särskild parametrar för vävnad aggitation att få en stor mängd livskraftiga, odlingsbara celler. Den Miltenyi gentleMACS Dissociator optimerar denna uppgift med en enkel, praktisk protokoll. I denna publikation användning av denna apparat på nerual vävnad förklaras.
Inom nervsystemet, har hundratals neuronala och glia celltyper har beskrivits. Varje specifik celltyp i hjärnan eller ryggmärgen har en repertoar av molekyler cellens yta eller molekylära faktorer, genom vilket det kan identifieras och karakteriseras. För närvarande robust cell identifiering och teknik separation kräver encelliga preparat som skall genereras samtidigt begränsa celldöd och förstörelse av karakteristiska ytan protein. Den gentleMACS Dissociator, när det används i kombination med trypsin eller papain-baserade dissociation kit, kan effektivt och skonsamt ta avstånd hjärnvävnad samtidigt antigen epitoper och begränsa cell förlust. Standardiserade beredning av encelliga upphängningar uppnås med C Rör och optimerad, förinställda gentleMACS program. När genereras, encelliga suspensioner kan behandlas med monoklonala konjugat som anti-Prominin-1 mikrokulor, som identifierar neurala stamceller, eller renas ytterligare med Myelin Borttagning pärlor.
Den gentleMACS Dissociator underlättar standardiserade beredningen av encelliga suspensioner från neurala vävnader i ett slutet system. Neural vävnadsdissociering Kits är optimerade för att bevara antigen epitoper som behövs för ytterligare applikationer som immunostainings och immunomagnetic cellseparation 1-5. I detta protokoll visar vi den milda enzymatiska dissociation av musen hjärnan använder gentleMACS Dissociator och neurala vävnadsdissociering Kit (P), vilket ger i 97% livskraftiga celler. 100 mg nervvävnad ger mellan 5×10 6 och 1×10 7 celler, beroende på ålder värdvävnaden. De riktade Prominin-1 + celler var isoleras med hjälp av anti-Prominin-1 mikrokulor och därefter tas i kulturen. Protokollet visar sig vara ännu mer effektiv med ytterligare användning av myelin Removal pärlor när du arbetar med nervvävnad från möss> P7.
The authors have nothing to disclose.