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Biology

फास्ट और संवेदनशील कोलाइडयन polyacrylamide जैल में Coomassie जी 250-प्रोटीन के लिए धुंधला

doi: 10.3791/1431 Published: August 3, 2009

Summary

इस वीडियो कांग के लिए अनुसार एक कोलाइडयन Coomassie जी 250 धुंधला प्रोटोकॉल लोकप्रिय जाएगा

Abstract

Coomassie खूब ब्लू (CBB) सामान्यतः एसडीएस PAGE द्वारा अलग प्रोटीन के दृश्य के लिए प्रयोग किया जाता है, एक साधारण धुंधला प्रक्रिया और उच्च quantitation की पेशकश डाई है. इसके अलावा, यह पूरी तरह से बड़े पैमाने पर spectrometric प्रोटीन की पहचान के साथ संगत है. लेकिन इन फायदों के बावजूद, CBB चांदी या प्रतिदीप्ति stainings की तुलना में कम संवेदनशील है और इसलिए शायद ही कभी विश्लेषणात्मक जेल आधारित प्रोटिओमिक दृष्टिकोण में प्रोटीन का पता लगाने के लिए इस्तेमाल किया हो माना जाता है.

CBB की संवेदनशीलता को बढ़ाने के मूल Coomassie प्रोटोकॉल 1 के कई सुधार किया गया है. दो प्रमुख संशोधनों के लिए कोलाइडयन कण में डाई अणु कनवर्ट करके कम प्रचुर मात्रा में प्रोटीन का पता लगाने के बढ़ाने शुरू किए गए थे: 1988 में, Neuhoff और उनके सहयोगियों ने CBB जी 250 आधारित धुंधला 2 समाधान में लागू 20% मेथनॉल और अमोनियम सल्फेट के उच्च सांद्रता, और 2004 Candiano एट अल में. ब्लू रजत फॉस्फोरिक एसिड के साथ अमोनियम सल्फेट और मेथनॉल 3 की उपस्थिति में CBB जी 250 का उपयोग कर स्थापित किया गया था. फिर भी, इन सभी संशोधनों बस लगभग 10 एनजी प्रोटीन का पता लगाने की अनुमति है. कोलाइडयन Coomassie धुंधला के लिए एक व्यापक रूप से fameless प्रोटोकॉल कांग एट अल द्वारा 2002 में प्रकाशित किया गया था जहां वे complexing पदार्थों के बारे में Neuhoff कोलाइडयन CBB धुंधला प्रोटोकॉल संशोधित. अमोनियम सल्फेट के बजाय वे एल्यूमीनियम सल्फेट और मेथनॉल कम विषाक्त इथेनॉल 4 द्वारा प्रतिस्थापित किया गया था इस्तेमाल किया. कांग अध्ययन में उपन्यास एल्यूमीनियम आधारित धुंधला हो जाना बेहतर संवेदनशीलता के रूप में 1 एनजी / थोड़ा संवेदनशीलता भिन्नता प्रोटीन के आधार पर के साथ बैंड (phosphorylase ख) के रूप में कम का पता लगाता है दिखाया.

यहाँ, हम विश्लेषणात्मक प्रयोजनों में प्रोटीन की तेज और संवेदनशील कोलाइडयन Coomassie धुंधला के लिए कांग प्रोटोकॉल के आवेदन प्रदर्शित करता है. हम जल्दी और आसानी से दो आयामी जैल नियमित रूप से हमारे समूह में काम कर प्रदर्शन का उपयोग प्रोटोकॉल उदाहरण देकर स्पष्ट करना होगा.

Protocol

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भाग 1: दो - आयामी (2 डी) जेल वैद्युतकणसंचलन का उपयोग कप लोडिंग

  1. IPG पट्टी पुनर्जलीकरण और isoelectric ध्यान केंद्रित (IEF)
    • 125 μl पुनर्जलीकरण समाधान में Immobiline DryStrip जैल, 6-11 पीएच (7 सेमी) rehydrate [7 एम यूरिया, 2 एम Thiourea, 4% chaps, 50 मिमी hydroxyethyldisulfide और 2% IPG बफर पीएच 6-11] के लिए Immobiline DryStrip Reswelling ट्रे का उपयोग कम से कम 10 घंटे.
    • IEF नमूना बफर में उपजी प्रोटीन नमूना भंग [7 एम यूरिया, 2 एम Thiourea, 2% chaps, 2% ASB-14, 50 मिमी hydroxyethyldisulfide और 2% बफर 6-11 पीएच IPG] 6-10 100 μl प्रति μg प्रोटीन के लिए संगत .
    • Solubilization (कमरे के तापमान पर कम से कम 30 मिनट) के बाद, कप लोडिंग anodic नमूना कप का उपयोग कर के माध्यम से प्रोटीन नमूना लागू होते हैं. कप की मात्रा 100 μl है (कई गुना कप 150 μl अनुमति).
      नोट: आप बड़ा नमूना मात्रा लोड अगर आप ध्यान केंद्रित प्रोटोकॉल और फिर से भरना कप की शुरुआत में एक कम वोल्टेज कदम सम्मिलित है जबकि वहाँ अभी भी कप में एक तरल फिल्म कर सकते हैं!
    • Multiphor द्वितीय वैद्युतकणसंचलन यूनिट में ढाल मोड में 11.1 KVH के लिए ध्यान केंद्रित isoelectric प्रदर्शन.
  2. संतुलन और एसडीएस पृष्ठ
    • IEF के बाद, IPG स्ट्रिप्स में कमी और alkylation अधीन थे, हर बार एक प्रकार के बरतन को 15 मिनट, 1% और 2.5% dithiothreitol iodoacetamide संतुलन समाधान में क्रमशः का उपयोग [50 मिमी 8.8 Tris-HCl/pH, 6 एम यूरिया, 30% ग्लिसरॉल और 2% एसडीएस].
    • एच 2 हे के साथ equilibrated स्ट्रिप्स कुल्ला और उन्हें वाटमान कागज पर दाग के लिए अतिरिक्त संतुलन बफर हटाने . बाद में एसडीएस से चल रहे बफर (1X) में स्ट्रिप्स डुबकी.
    • दूसरा आयाम एसडीएस पृष्ठ द्वारा 12% की कुल acrylamide एकाग्रता के साथ एक ऊर्ध्वाधर वैद्युतकणसंचलन सिस्टम पर किया जाता है. equilibrated IPG स्ट्रिप्स अलग जैल के शीर्ष पर रखा गया था और गर्म agarose समाधान [bromophenol नीले युक्त बफर चलाने में 0.5% agarose] के साथ तय की है.
    • प्रोटीन 2.5 घंटे के लिए अलग हो गए थे, 120 वी द्वारा पीछा किया जब तक डाई सामने जेल कैसेट के नीचे तक पहुँचता है 15 मिनट के लिए 80 वी पर शुरू.

भाग 2: जी 250-CBB के साथ कोलाइडयन Coomassie धुंधला

1. धुंधला समाधान
नोट: धुंधला समाधान की तैयारी के लिए विश्लेषणात्मक (देहात) ग्रेड और उच्च शुद्धता के पानी के रूप में उच्च गुणवत्ता के साथ के रूप में रसायनों का उपयोग आप Millipore सिस्टम (मिल्ली क्यू पानी) से मिलता है.

Coomassie समाधान: विज्ञापन 2000 मिलीलीटर एच 2 हे
0.02% (w / v) CBB G-250 0,4 छ
5% (w / v) एल्यूमीनियम सल्फेट (14-18) - हाइड्रेट 100 ग्राम
10% (v / v) इथेनॉल (96%) 200 मिलीग्राम
2% (v / वी) orthophosphoric एसिड (85%) 47 मिलीलीटर

नोट: धुंधला समाधान की तैयारी के लिए, निम्नलिखित क्रम में घटकों के अलावा अनुक्रमिक को बनाए रखा जा है:

  1. पहले मिल्ली क्यू पानी में एल्यूमीनियम सल्फेट भंग
  2. उसके बाद जोड़ इथेनॉल, homogenize, और समाधान के लिए CBB जी 250 मिश्रण
  3. के रूप में हाल ही के रूप में समाधान पूरी तरह भंग है, फॉस्फोरिक एसिड (शराबी मीडिया के लिए एसिड की समावेश Coomassie अणुओं उनके कोलाइडयन राज्य में देता है कुल) जोड़ने
  4. अंत में मिल्ली - क्यू पानी के साथ भरने

नोट: अंतिम धुंधला हो जाना एक अंधेरे हरे नीले उपस्थिति समाधान है और आसपास तैराकी कणों से भरा है:

  • छानना इस समस्या का समाधान नहीं करो!
  • यदि आप की तैयारी के क्रम बदल गया है, तो आप एक बैंगनी नीले समाधान है कि कम संवेदनशील है मिलेगा.
समाधान Destaining: विज्ञापन 2000 मिलीलीटर एच 2 हे
10% (v / v) इथेनॉल (96%) 200 मिलीग्राम
2% (v / वी) orthophosphoric एसिड (85%) 47 मिलीलीटर

2. प्रक्रिया धुंधला

  • दूसरा आयाम जुदाई के बाद, ध्यान से गिलास प्लेट से जैल हटाने और उन्हें एक धुंधला मिल्ली - क्यू पानी के साथ भरा पकवान में स्थानांतरण.
  • जैल एक क्षैतिज प्रकार के बरतन (अपर्याप्त धोने गरीब संवेदनशीलता का कारण बनता है क्योंकि जैल पर शेष एसडीएस डाई प्रोटीन के लिए bounding परेशान है) पर 10 मिनट के लिए तीन बार धो मिल्ली - क्यू पानी के साथ.
  • Coomassie समाधान हिलाएँ पहले कोलाइडयन कण समान रूप से फैलाने का उपयोग करें.
  • अच्छी तरह से एक प्रकार के बरतन पर आंदोलन के द्वारा Coomassie समाधान के साथ 2-12 घंटे के लिए कवर जैल सेते हैं. यह धुंधला हो जाना सीमांत पृष्ठभूमि उत्पन्न ताकि आप बीच में धुंधला प्रगति का पालन कर सकते हैं.
    नोट: 10 मिनट के बाद आप पहली प्रोटीन स्पॉट ऊष्मायन के 2 घंटे के भीतर प्रदर्शित होने, यह करने के लिए धुंधला हो जाना के बारे में 80% देख सकते हैंएस अधिकतम स्तर पूरा हो गया है. लगभग 100% धुंधला के लिए, रातोंरात ऊष्मायन की सिफारिश की है. कुछ मामलों में, जब प्रोटीन की मात्रा दाग हो बड़ा है और एक चमकदार नीली समाधान में बदल जाता है है, धुंधला समाधान की एक ताज़ा आवश्यक है.
  • धुंधला हो जाना प्रक्रिया के बाद Coomassie समाधान निकालने और जैल मिल्ली - क्यू पानी के साथ दो बार कुल्ला.
    नोट: आप धुंधला समाधान के रूप में लंबे समय से पुन: उपयोग कणों के रूप में अभी भी शेष हैं कर सकते हैं, अन्यथा यह त्यागें (ध्यान में रखें कि आपके प्रयोगशाला हो सकता है अपशिष्ट निपटान के लिए विशेष नियमों).
  • एक प्रकार का वृक्ष मुक्त कागज तौलिया के साथ धुंधला हो जाना पकवान डाई कणों से चिपके निकालें और destain 10 के लिए 60 मिनट.
    नोट: तुम भी बस मिल्ली क्यू पानी के साथ जैल धो सकते हैं लेकिन यह हम केवल प्रारंभिक जैल के लिए अनुशंसा करते हैं क्योंकि वहाँ जैल कि स्कैनिंग प्रक्रिया के दौरान उत्पन्न होगा पर एक अनियमित, कमजोर Coomassie फिल्म पिछले जाएगा.
  • अंत में दो बार जैल मिल्ली - क्यू पानी से कुल्ला: जैल उनके मूल मोटाई तक पहुँच (शराब एसिड मीडिया जैल सिकुड़ बनाता) और पानी में बेअसर अतिरिक्त Coomassie रंग तीव्रता को बढ़ाती है.

भाग 3: प्रतिनिधि के परिणाम

यदि आप ऊपर वर्णित प्रोटोकॉल का पालन करें आप अपने 2 डी जेल विशिष्ट हल और अच्छी तरह से सना हुआ गहरे नीले प्रोटीन स्पॉट पर मिल जाएगा. यहां तक कि एक 2 - डी Shevchenko एट अल. 5, एक अच्छा है और मास स्पेक्ट्रोमेट्री के साथ संवेदनशीलता संगतता दावा प्रोटोकॉल के अनुसार चांदी के साथ दाग जेल की तुलना में, हम बराबर धुंधला परिणाम प्राप्त.

चित्रा 1
चित्रा 1: ऊपर वर्णित प्रयोग के अंतिम परिणाम. कांग Coomassie प्रोटोकॉल (A) Shevchenko एट अल के अनुसार चांदी धुंधला तरह दृढ़ता से 2 - डी जेल वैद्युतकणसंचलन के बाद प्रोटीन का पता लगाने में (बी). प्रदर्शन.

भाग 4: युक्तियाँ और चालें

  • अपने खुद के नमूने प्रसंस्करण से पहले कुछ परीक्षण stainings प्रदर्शन. Unexplainable कारणों के लिए हम कभी कभी रिपोर्ट है कि ब्याज की एक प्रोटीन सफलतापूर्वक पता नहीं जब भी मिलीग्राम लागू किया गया हो सकता है. इस मामले में हम कुछ कमजोर पड़ने श्रृंखला तैयार करने के लिए संवेदनशीलता परीक्षण की सलाह देते हैं.
  • यदि आप कम प्रोटीन की जेल में सामान्य, एसडीएस पृष्ठ के दौरान अलग जेल के लिए stacking से असफल हस्तांतरण में (ओं) का पता लगाने है संभवतः कारण हो जाएगा. आप ऐसे चिपचिपा प्रोटीन के लिए stacking के क्षेत्र सहित पूरा जेल धुंधला द्वारा जाँच कर सकते हैं.
  • अपने isoelectric ध्यान केंद्रित परिणाम की एक तेजी से सत्यापन के लिए, आप किसी भी आगे दूसरे आयाम जुदाई के बिना सीधे IPG स्ट्रिप्स दाग कर सकते हैं.
  • कभी - कभी धुंधला प्रक्रिया के दौरान जैल बारी ताकि वे समान रूप से दोनों पक्षों से दाग रहे हैं (यदि आप जैल स्थिर रखने के लिए, डाई सिर्फ जेल के एक तरफ करने के लिए बांधता है).
  • हम अनुभवी एक अंधेरे बोतल में धुंधला समाधान के भंडारण के अपने जीवनकाल बढ़ जाती है (4 महीने के लिए पारदर्शी ऊपर बोतलों में).
  • धुंधला हो जाना और आप कई वर्षों के लिए फ्रिज में जैल रख सकते हैं (यदि आप अम्लीय समाधान जोड़ने के लिए आप कवक द्वारा contaminations से बचने) का दस्तावेजीकरण करने के बाद.
  • एक tryptic पचाने में के लिए जेल प्लग के Destaining एक ब्लॉक हीटर में वार्मिंग के द्वारा त्वरित किया जा सकता है.

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Discussion

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अभिनव या सिर्फ एक और Coomassie प्रोटोकॉल?

फिलहाल Coomassie खूब ब्लू के साथ प्रक्रियाओं को धुंधला करने के लिए एकाधिक प्रोटोकॉल मौजूद हैं. उनमें से ज्यादातर Neuhoff और दो ​​सहयोगियों द्वारा सबसे अधिक इस्तेमाल किया प्रोटोकॉल के छोटे या बड़े संशोधनों से परिणाम. इसके अलावा कांग प्रोटोकॉल Neuhoff सूत्र पर आधारित है. लेकिन यह वास्तव में प्रोटिओमिक अनुसंधान के लिए एक वैकल्पिक Coomassie धुंधला विधि है? हम दो मुख्य मुद्दों का पता लगाने सीमा और प्रयोज्य चित्र, सबूत है कि यह निश्चित रूप से अन्य Coomassie प्रोटोकॉल और भी चांदी और फ्लोरोसेंट stainings की तुलना में एक लाभदायक धुंधला प्रोटोकॉल.

मैं फोकस: सीमा का पता लगाने

कांग प्रकाशन में, वे कई मार्कर प्रोटीन का पता चला 1 एनजी / बैंड (2 आंकड़ा). लेकिन हमारी राय में 4-8 एनजी / बैंड की एक सीमा का पता लगाने और अधिक होने की संभावना अभ्यास (तालिका 1) से संबंधित है. वे आगे दोनों एक कोलाइडयन Coomassie प्रोटोकॉल के संबंध में बेहतर संवेदनशीलता के स्तर के साथ चर्चा की CBB फॉस्फोरिक एसिड, अमोनियम सल्फेट और मेथनॉल, और Amersham Pharmacia जैव प्रौद्योगिकी से एक अम्लीय चांदी धुंधला (दाग रजत प्लस किट) में G-250 .

चित्रा 2
चित्रा 2: एसडीएस जेल प्रतिनिधि कांग एट अल द्वारा प्रकाशित. कि संशोधित प्रोटोकॉल CBB-G250 की शक्ति को दर्शाता है. 250 / एनजी बैंड प्रोटीन सबसे बाएँ और 2 गुना दाईं तरफ लगातार पतला भरी हुई थी.

तालिका 1: मानक की तुलना में प्रोटीन का पता लगाने के लिए एक और अधिक यथार्थवादी सीमा कांग प्रकाशन से लिया प्रोटीन के लिए सीमा धुंधला .

प्रोटीन मेगावाट [केडीए] प्रोटीन राशि [एनजी] (बनाम गंभीर आभासी)
मायोसिन 220 1 / 4
बी - galactosidase 116 1 / 4
phosphorylase ख 97 1 / 4
गोजातीय सीरम albumin 66 4 / 2
ovalbumin 45 8 / 4

इन का पता लगाने सीमा की पुष्टि करने के लिए और करने के लिए आगे है कांग धुंधला विधि मान्य हम आम Laemmli आणविक वजन व्यावसायिक रूप से उपलब्ध Sypro (BioRad) रूबी और दीप (जीई हेल्थकेयर) बैंगनी (आंकड़ा जैसे फ्लोरोसेंट धुंधला समाधान द्वारा पाया मार्करों के साथ एसडीएस - जैल पर हमारे स्वयं के परीक्षण श्रृंखला प्रदर्शन ) 3. दिलचस्प है, कांग धुंधला स्कोर अच्छी तरह से या भी बेहतर प्रदर्शन (डीप पर्पल के मामले में) और इसलिए निश्चित रूप से श्रम इनपुट और प्रदर्शन के मामले में बेहतर है!

चित्रा 3
चित्रा 3: कांग Sypro रूबी (बी) और डीप पर्पल (जीई हेल्थकेयर) (आंकड़ा 3) के साथ धुंधला CBB-G250 - आधारित (ए) की तुलना. (सी) एसडीएस पृष्ठ में प्रोटीन बैंड के धुंधला हो जाना. एक आणविक भार मार्कर युक्त phosphorylase ख (97.4 केडीए), BSA (66.2 केडीए), ovalbumin (45 केडीए), कार्बोनिक anhydrase (31 केडीए), सोयाबीन trypsin अवरोध करनेवाला (21.5 केडीए) और lysozyme (14.4 केडीए), प्रोटीन की मात्रा के साथ विश्लेषण किया गया 1 / जी बैंड और जेल के बाईं ओर पर लगातार सही करने के लिए 2 गुना पतला है.

फिर भी, इन का पता लगाने सीमा मानक वजन आणविक मार्करों के लिए प्रयोग किया जाता है और सावधानी के साथ विचार किया जाना चाहिए है प्रोटीन के साथ निर्धारित किया गया है. इस कारण से, हम अतिरिक्त विभिन्न प्रोटीन है कि आंशिक रूप से CBB (fetuin जैसे, mycin) के लिए कमजोर बंधन आत्मीयता के साथ कांग धुंधला विधि का परीक्षण किया. कांग प्रोटोकॉल आंकड़ा 4 में प्रदर्शन किया, पारंपरिक CBB धुंधला के लिए बेहतर है और भी Sypro रूबी की तुलना में बेहतर प्रदर्शन है, लेकिन इस मामले में चांदी धुंधला के लिए आता है नहीं. हालांकि, हमें विश्वास है कि कांग संशोधित धुंधला विधि संवेदनशील और तेजी से जेल आधारित प्रोटिओमिक्स में प्रोटीन detections के लिए एक उत्कृष्ट विकल्प है.

चित्रा 4
4 चित्रा: fetuin की (ए) है कांग कोलाइडयन Coomassie की तुलना प्रोटोकॉल (destaining बिना) के साथ प्रोटीन धुंधला (बी) एक पारंपरिक CBB जी 250 (40% मेथनॉल और 10% एसिटिक एसिड) धुंधला, (सी) Sypro Ryby और ( डी ) चांदी Shevchenko एट अल के अनुसार धुंधला हो जाना. 2 2 एनजी तक पतला ग्राम प्रोटीन की मात्रा में एसडीएस पृष्ठ के लिए भरी हुई थी.

फोकस द्वितीय: प्रयोज्य
सुधार का पता लगाने सीमा के अलावा कांग Coomassie प्रोटोकॉल कई विशेषताएं है कि यह Neuhoff या Candiano के stainings और भी प्रतिदीप्ति प्रोटोकॉल की दिशा में तरजीही बनाता की पेशकश करता है:

  • फिक्सिंग और धुंधला हो जाना एक कदम में किया जाता है
  • सभी में अधिक से अधिक 4 नहीं कदम
  • पहली धुंधला हो जाना तेजी से परिणाम दिखाई दे रहे हैं (कम से कम 20 मिनट के भीतर ज्यादातर मामलों में)
  • प्रक्रिया धुंधला के 80% पूरा करने के लिए केवल 2 घंटे की आवश्यकता है
  • केवलकम से कम पृष्ठभूमि धुंधला
  • धुंधला प्रक्रिया बहुत प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य है (यह एक endpoint विधि है)
  • विषाक्त शराब के साथ कोई और अधिक से निपटने (मेथनॉल इथेनॉल द्वारा प्रतिस्थापित किया गया है)
  • समाधान लगभग बिना गंध है (एसिटिक एसिड का कोई उपयोग नहीं)
  • कम सांद्रता में जी 250-CBB का उपयोग करें.

सारांश में, सूत्र काफी सुविधाजनक है, अपेक्षाकृत nonhazardous पर्यावरण के अनुकूल है और सस्ते. इसके अलावा कांग धुंधला हो जाना पूरी तरह से मास स्पेक्ट्रोमेट्री विश्लेषण के साथ संगत है. एक अंत में कह सकते हैं कि कांग Coomassie धुंधला हो जाना एक तेज और विश्लेषणात्मक प्रोटिओमिक्स आधारित दृष्टिकोण के लिए भी जेल में प्रोटीन का पता लगाने के लिए उत्कृष्ट है.

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Disclosures

मैं खुलासा नहीं किया है.

Acknowledgments

हम तैयारी और 1-D जैल के धुंधला हो जाना करने के लिए डा. निकॉला Wiethölter धन्यवाद.

इस काम ड्यूश Forschungsgemeinschaft (GRK एनडी और एस.एम. 5 1089/project) से एक अनुदान द्वारा वित्त पोषित किया गया था और Jürgen Manchot से एक शोध फैलोशिप एन डी के लिए Stiftung द्वारा समर्थित है.

Materials

Name Company Catalog Number Comments
Immobiline DryStrip gels GE Healthcare 17-6001-94 Can even be used 2 years after expire date.
Immobiline DryStrip Reswelling Tray GE Healthcare 80-6371-84 Do not clean with organic solvents. Designed for 7-18 cm IPG-strips.
Immobiline DryStrip Kit GE Healthcare 18-1004-30 Includes a tray, electrode holder, anode and cathode electrodes, aligner and sample cup bar and sample cups.
EPS 3501 XL Power Supply GE Healthcare 18-1130-05 Supplies voltage up to 3500 V.
Multiphor II Electrophoresis Unit GE Healthcare 18-1018-06 Movable electrodes enable IEF in IPG strips of all length (7-24 cm IPG strips)
PerfectBlue gel system Twin S Peqlab 45-1010-C SDS-PAGE in 10x10 cm mini-gel format. Gel chamber includes a cooling system.
staining dishes with lids VWR international 216-3412 Fits for mini-gels. Stackable on shaker.
aluminium sulfate-18-hydrate Merck & Co., Inc. 1.01102.5000 We made best experience with Merck. Just available in 5 kg package.
orthophosphoric acid Prolabo 20 624.295 Sold in glass bottles.

DOWNLOAD MATERIALS LIST

References

  1. Fazekas de St Groth, S., Webster, S. R. G., Datyner, A. Two new staining procedures for quantitative estimation of proteins on electrophoretic strips. Biochim. Biophys. Acta. 71, 377-391 (1963).
  2. Neuhoff, V., Arold, N., Taube, D., Ehrhardt, W. Improved staining of proteins in polyacrylamide gels including isoelectric focusing gels with clear background at nanogram sensitivity using Coomassie Brilliant Blue G-250 and R-250. Electrophoresis. 9, 255-262 (1988).
  3. Candiano, G., Bruschi, M., Musante, L., Santucci, L., Ghiggeri, G. M., Carnemolla, B., Orecchia, P., Zardi, L., Rigetti, P. G. Blue Silver: A very sensitive colloidal Coomassie G-250 staining for proteome analysis. Electrophoresis. 25, 1327-1333 (2004).
  4. Kang, D., Gho, S. G., Suh, M., Kang, C. Highly Sensitive and Fast Protein Detection with Coomassie Brilliant Blue in Sodium Dodecyl Sulfate-Polyacrylamide Gel Electrophoresis. Bull. Korean Chem. Soc. 11, 1511-1512 (2002).
  5. Shevchenko, A., Wilm, M., Vorm, O., Mann, M. Mass spectrometric sequencing of proteins silver-stained polyacrylamide gels. Anal. Chem. 68, 850-858 (1996).
फास्ट और संवेदनशील कोलाइडयन polyacrylamide जैल में Coomassie जी 250-प्रोटीन के लिए धुंधला
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Cite this Article

Dyballa, N., Metzger, S. Fast and Sensitive Colloidal Coomassie G-250 Staining for Proteins in Polyacrylamide Gels. J. Vis. Exp. (30), e1431, doi:10.3791/1431 (2009).More

Dyballa, N., Metzger, S. Fast and Sensitive Colloidal Coomassie G-250 Staining for Proteins in Polyacrylamide Gels. J. Vis. Exp. (30), e1431, doi:10.3791/1431 (2009).

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