Um dispositivo perifusion microfluídicos ilhota foi desenvolvido para a avaliação dinâmica da secreção de insulina de ilhotas múltiplo e imagens de fluorescência simultânea de influxo de cálcio e mitocondrial possíveis mudanças.
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Artigo de método
A Multi-Parametric Sistema Perifusion Islet dentro de um dispositivo Perifusion microfluídicos
Neste artigo
Resumo
Resumo
Um dispositivo perifusion microfluídicos ilhota foi desenvolvido para a avaliação dinâmica da secreção de insulina de ilhotas múltiplo e imagens de fluorescência simultânea de influxo de cálcio e mitocondrial possíveis mudanças. O dispositivo consiste de três camadas: a primeira camada contém uma matriz de microescala poços (500 mm e diâmetro de 150 profundidade mm) que ajudam a imobilizar o ilhotas enquanto expostos a fluxo e maximizar a área de superfície exposta das ilhotas, a segunda camada contém uma circular perifusion câmara (3 mm de profundidade, 7 mm de diâmetro), ea terceira camada contém um canal de entrada de mistura que os fãs antes de injeção na câmara perifusion (2 mm de largura, 19 mm de comprimento e 500 mm de altura) para otimizar a eficiência de mistura antes de entrar na câmara de perifusion. A criação de gradientes de glucose diversos, incluindo uma linear forma de sino, e formas quadradas também podem ser criados na rede perifusion microfluídicos e é demonstrada.
Protocolo
A. Microfabricação de 3 camadas dispositivo perifusion microfluídicos
Bem fundo Mestre Protocol (150 mM poços profundos)
- Limpe o wafer usando uma lâmina de barbear, se necessário. Limpe com acetona, metanol, e IPA. Realizar o tratamento de plasma de 50 Watts por 30 s.
- Spin-SU8-100 @ 2000 rpm. [Passo 1: 500 rpm, 10 s, 100 Passo rpm / s, 2: 2000 rpm, 30 s, a 300 rpm / s].
[NOTA: Não segure o wafer com uma pinça, após girar SU8] - Bake mole do wafer a 65 ° C por 20 min e aos 95 ° C por 50 min.
- O wafer é exposto à luz UV através de uma máscara desejada. Dose para 150 M de altura é de 650 mJ / cm 2....
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Discussão
Sistemas tradicionais de ilhotas perifusion (macroescala e microescala) tem algumas limitações, incluindo complexo de configuração e design, alta requisitos técnicos, e dificuldade para criar gradientes usuário prescritos química no sistema. O sistema perifusion microfluídicos descritas aqui supera estas limitações com geometria simples de projeto e fabricação. Mais importante, este sistema pode ser integrado com abordagem imagens de fluorescência que fornecem como uma ferramenta única para estudar a fisiologia das ilho.......
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Agradecimentos
Este trabalho foi financiado pela AAUW companheirismo internacional para Adeola Adewola, NIH / NCRR (U42RR023245) para Jose Oberholzer, e O Projeto Diabetes Chicago.
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Materiais
| Nome | Empresa | Número de catálogo | Comentários |
|---|---|---|---|
| Seringas de 60 ml | BD Biosciences | ||
| Corante fluorescente Fura-2 | Molecular Probes, Life Technologies | ||
| Corante fluorescente Rodamina123 | Molecular Probes, Life Technologies | ||
| Glicose | Sigma-Aldrich | ||
| Albumina Sérica Bovina | Sigma-Aldrich | ||
| Tubos de silicone de 30" | Cole-Parmer | 1/16 x 1/8 pol. | |
| Tubos Eppendorf de 1,5 ml | Fisher Scientific | ||
| Conectores em Y | Cole-Parmer | 1/16” & 4 mm | |
| Conectores para seringas | Cole-Parmer | tampão luer fêmea 1/16” | |
| Conectores retos | Cole-Parmer | 1/16” | |
| Conector cotovelo | Cole-Parmer | 1/16” | |
| Bomba de seringa Havard | Harvard Apparatus | ||
| Dispositivo de perifusão | |||
| Placa aquecedora | PMC | ||
| Termômetro | Omega Engineering, Inc. | ||
| Colecionador de frações | Gibson | ||
| Pipetador | Fisher Scientific | ||
| Microscópio invertido de epifluorescência | Olympus Corporation | IX71 | |
| Dispositivo acoplado à carga | QImaging | Retiga-SRV, Fast 1394 |
Referências
- Mohammed, J. S., Wang, Y., Harvat, T. A., Oberholzer, J., Eddington, D. T. Microfluidic device for multimodal characterization of pancreatic islets. Lab Chip. 9, 97-106 (2009).
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Reimpressões e permissões
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