إزالة الحشرات Puparium: طريقة للتحقيق Pupal

Overview

تصف هذه المقالة تقنية لإزالة جروة الحشرة مع الحفاظ على الخوادر الداخلية سليمة وبالتالي صالحة لمزيد من التحقيق. يظهر البروتوكول المثال الإجراء مع Drosophila غوتيفيرا; ومع ذلك ، فإن هذه التقنية تنطبق على أنواع Drosophila الأخرى.

Protocol

هذا البروتوكول هو مقتطف من فوكوتومي وآخرون ، وأساليب لتنظيم فترات Pupal وقياس تصبغ الجناح من Drosophila guttifera ، J. Vis. Exp. (2018).

1. إزالة الجراء

ملاحظة: وتغطي بوبا من دروسوفيلا من قبل هيكل يسمى puparium. حشرة من موسكومورفا (الذباب) لا يلقي لطيف اليرقات في pupation. بدلا من ذلك ، فإنه يصلب الشرج بعد انحلال ، ويستخدم كغطاء وقائي للجروة ، والجرو. الخوادر المقيمين داخل puparium لديه لطيف جروة حقيقية ، وهي ناعمة جدا وهشة. قبل أن يحدث انحلال حول P4 (ii) ، يتم إرفاق الظهارة والجرواريوم معا ، وبالتالي إزالة الجرواريوم دون ضرر أمر صعب للغاية. بعد P5 ، وإزالة puparium شاقة ، ولكنها مفيدة للمراقبة المورفولوجية وتعريف مراحل pupal. وتنفذ هذه العملية على النحو التالي.

1. لصق قطعة من الشريط على الوجهين على قطعة من منشفة ورقية.
2. وضع جروة على الجانب البطني الشريط على الوجهين لأعلى (الشكل 1A).
3. تحديد موقع المسافة بين الجانب الأمامي من puparium والجرو الداخلية. فهم وإزالة puparium حول هذه الفجوة باستخدام ملقط، وفضح الجانب الأمامي من رأس الجرو.
4. أدخل طرف ملقط بتحريكه بالتوازي مع المحور الأمامي الخلفي. رفع غيض من ملقط لكسر محليا puparium. كرر هذا الإجراء حتى يصل الكسر إلى الجزء الخلفي من الجرو. تأكد من أن الفجوة تتشكل أيضا بين الجراء والساقين الجراء ، وكسر الجانب البطني من puparium وتقليل الضرر الذي لحق بالجرو الداخلي(الشكل 1B).
5. بعد كسر puparium قدر الإمكان ، أخرج الجراء باستخدام فرشاة طلاء ناعمة (#5/0) (الشكل 1C).
6. ضع الخوخ على قطعة من ورق الأنسجة التي تم ترطيبها مع ddH₂O ووضعها في طبق بيتري بلاستيكي (قطرها 60 مم × الارتفاع 15 ملم). التقاط الصور في أقرب وقت ممكن لأن الجرو المكشوفة عرضة للخطر ويصبح بسهولة الجافة.
    

Representative Results

الشكل 1 - الأرقام 1- الأرقام التي يمكن أن توضيح لإزالة الجراء. (أ) وضع الجانب البطني الخوخ حتى على قطعة من الشريط على الوجهين. إزالة الجزء الأمامي من الجرو. (ب) كسر puparium مع ملقط من الجانب البطني. (ج) بعد كسر الجراء، أخرج الخوادر باستخدام فرشاة الطلاء.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Drosophila guttifera	The Drosophila Species Stock Center at the U.C. San Diego	15130-1971.10	Drosophila guttifera,  a fruit fly species used in this article
NICETACK double sided tape	Nichiban	NW-15SF	Double sided tape,   for removing puparium
Dumont #5 forceps	Fine Science Tools	11252-20	Forceps,  for removing puparium
Van Gogh VISUAL Paint brush	Talens Japan	GWVR-#5/0	Paint brush,  for removing puparium
Stereomicroscope	Olympus	SZX16	Stereomicroscope,  for morphological observation
Digital camera	Olympus	DSE-330-A	Digital camera,  for imaging
Falcon standard tissue culture dish	Corning	353002	Plastic Petri dish (diameter 60 mm x height 15 mm)