Summary
يصف هذا البروتوكول طرق تدخل Tuina في نموذج الفئران الناجم عن حقن أحادي يودوأسيتات الصوديوم لالتهاب المفاصل في الركبة (KOA) ، والذي يوفر مرجعا لتطبيق Tuina في النماذج الحيوانية KOA. يدرس هذا البروتوكول أيضا الآلية الفعالة ل Tuina ل KOA، وستساعد النتائج في تعزيز تطبيقها.
Abstract
يتميز الفصال العظمي في الركبة (KOA) ، وهو اضطراب تنكسي شائع في المفاصل ، بالألم المزمن والإعاقة ، والتي يمكن أن تتطور إلى تلف هيكلي لا يمكن إصلاحه في المفصل. تعتبر التحقيقات في العلاقة بين الغضروف المفصلي والعضلات والغشاء الزليلي والأنسجة الأخرى المحيطة بمفصل الركبة في KOA ذات أهمية كبيرة. حاليا ، تشمل إدارة KOA تعديلات نمط الحياة ، والتمارين الرياضية ، والأدوية ، والتدخلات الجراحية. ومع ذلك ، لا يزال هناك نقص في توضيح الآليات المعقدة الكامنة وراء الألم المرتبط ب KOA. وبالتالي ، لا يزال ألم KOA يمثل تحديا سريريا رئيسيا وأولوية علاجية. تم العثور على Tuina أن لها تأثيرا تنظيميا على الأنظمة الحركية والمناعية والغدد الصماء ، مما دفع إلى استكشاف ما إذا كان Tuina يمكن أن يخفف من أعراض KOA ، الناجمة عن زيادة تنظيم العوامل الالتهابية ، وأكثر من ذلك ، إذا كانت العوامل الالتهابية في العضلات الهيكلية يمكن أن تزيد من تطور KOA.
قمنا باختيار 32 ذكرا من ذكور فأر Sprague Dawley (SD) بشكل عشوائي (180-220 جم) في أربع مجموعات من ثمانية لكل منها: antiPD-L1 + Tuina (المجموعة A) ، النموذج (المجموعة B) ، Tuina (المجموعة C) ، والجراحة الوهمية (المجموعة D). بالنسبة للمجموعات A و B و C ، قمنا بحقن 25 ميكرولتر من محلول أحادي يودوأسيتات الصوديوم (MIA) (4 مجم MIA مخفف في 25 ميكرولتر من محلول ملحي معقم) في تجويف مفصل الركبة الأيمن ، وبالنسبة للمجموعة D ، تم حقن نفس الكمية من المحلول الملحي الفسيولوجي المعقم. تم تقييم جميع المجموعات باستخدام الاختبارات الأقل إلى الأكثر إرهاقا (عتبة الانسحاب الميكانيكية للمخلب ، الكمون الحراري لسحب المخلب ، تورم مفصل الركبة الأيمن ، درجة Lequesne MG ، درجة حرارة الجلد) قبل الحقن و 2 و 9 و 16 يوما بعد الحقن.
Introduction
هشاشة العظام في الركبة (KOA) هو هشاشة العظام التنكسية الشائعة ، والتي تتميز بالألم المزمن والإعاقة ، وسيؤدي KOA الشديد نسبيا إلى تلف هيكلي لا رجعة فيه للمفصل1. أصبح الانتشار العالمي المرتفع ل KOA تحديا عالميا رئيسيا للصحة العامة 2,3 ، مما يضعف بشكل خطير نوعية حياة المرضى 4,5. أظهرت الدراسات أن KOA يؤثر على أكثر من 260 مليون شخص في جميع أنحاء العالم6. مع شيخوخة السكان ، يصل معدل الانتشار الإجمالي ل KOA في الصين إلى 17.0٪ فوق سن 40 ، مما يضع عبئا ثقيلا على أسر المتضررين 7,8.
وفقا للطب الصيني ، ينتمي KOA إلى فئة "الشلل"9 ، ويربط كلاسيكي الإمبراطور الأصفر للطب الباطني الأوتار والعظام واللحم بالشلل. وبالتالي ، نحن بحاجة إلى الانتباه إلى العلاقة بين الغضروف والعضلات والغشاء الزليلي ، وكذلك الأنسجة الأخرى حول مفصل الركبة في KOA. في الطب الحديث ، يؤدي كل من التهاب العضلات والعظام ، وهما مكونان رئيسيان للتوازن المناعي لالتهاب المفاصل ، إلى تطور ألم KOA. ومع ذلك ، تركز معظم الدراسات على التهاب الغضروف والتهاب الغشاء الزليلي في مفاصل العظام ، وهناك ندرة في المقالات التي تدرس الظواهر الالتهابية في عضلات الهيكل العظمي. لذلك ، هناك حاجة إلى مزيد من البحث حول دور العضلات الهيكلية في الالتهاب لاكتساب فهم أكثر شمولا ل KOA وتقديم أفكار لطرق علاج أكثر فعالية. في مراجعة للأدبيات ، وجدنا أن تثبيط العامل المرتبط بالمناعة ليجند الموت المبرمج 1 (PD-L1) أدى إلى تفاقم تطور KOA 10,11 وأنه كان هناك تعبير تفاضلي ل IL-15 و FOXO1 في العضلات الهيكلية للمرضى الذين يعانون من KOA12 ، بالإضافة إلى التهاب كبير في العضلات الهيكلية في المرضى الذين يعانون من KOA. والذي ارتبط أيضا بالتغيرات في المشي. لقد ثبت أن العضلات الهيكلية يمكن أن تفرز أيضا عوامل مرتبطة ارتباطا وثيقا بالمناعة الالتهابية مثل IL-6 ، وأن TNF-α يرتبط ارتباطا وثيقا أيضا بمسار PD-L1 و KOA13،14،15.
حاليا ، تشمل العلاجات المتاحة ل KOA التحكم في الوزن ، والتمارين الرياضية ، والأدوية ، والجراحة ، والتي تشمل عادة الحقن داخل المفصل ، والأدوية المسكنة ، والجراحة بالمنظار ، وقطع العظم حول الركبة16. في الوقت الحالي ، لا يمكن إيقاف تطور مرض KOA أو عكسه تماما ، وبدون فهم واضح للآليات المعقدة الكامنة وراء ألم KOA ، فإن مرضى KOA معرضون لخطر الإفراط في استخدام الأدوية المسكنة وارتفاع معدل الآثار الجانبية8. معظم استراتيجيات العلاج فعالة فقط لفترات قصيرة وتركز فقط على التخفيف المؤقت للأعراض بدلا من التسبب في المرض. لذلك ، يظل ألم KOA أولوية وتحديا للعلاج ، مما يشكل تحديا سريريا خطيرا. ومع ذلك ، يمكن أن تحفز Tuina مباشرة عضلات الهيكل العظمي حول المفصل المصاب في علاج KOA ويمكن أن توفر بعض الفوائد. إلى جانب الوصف السابق ، فهو العلاج المثالي لدراسة دور الأنسجة العضلية الهيكلية في KOA، وتوضيح دور الأنسجة العضلية الهيكلية في الالتهاب يمكن أن يوفر أيضا دعما نظريا أفضل ل Tuina of KOA.
أظهرت الدراسات أن العلاج بالتدليك والعلاج بتقويم العظام والتلاعب بالعمود الفقري يمكن أن يساعد في تخفيف الألم واستعادة وظائف الجسم17,18. يمكن أن تعمل هذه التلاعبات على الالتهاب الموضعي وتخفيف التشنجات وتسكين الألم من خلال العمل الميكانيكي الخارجي. يمكنهم تخفيف الألم بعد رأب مفاصل الركبة الكلي ، وتقليل استخدام الأدوية المسكنة ، وتعزيز الانتعاش بعد العملية الجراحية ، وتحسين التوازن الميكانيكي الحيوي19. التدليك السويدي ممكن في علاج هشاشة العظام ويمكن أن يقلل من التوتر ويحسن نوعية الحياة20. وقد سبق التأثير العلاجي لتوينا على KOA بعض الدراسات.
في هذه التجربة ، سوف يستكشف فريقنا ما إذا كان التعبير عن PD-L1 والعوامل الالتهابية ذات الصلة في العضلات الهيكلية يمكن أن يحفز KOA ويعزز تطوره بناء على نموذج KOA الناجم عن MIA في الفئران. كما سيتم تنفيذ Tuina لمعرفة ما إذا كان يمكن أن يخفف من أعراض KOA الناجمة عن زيادة التعبير عن العوامل الالتهابية. سيتم دمج Tuina مع تثبيط PD-L1 لإثبات الارتباط بين مسار PD-1 بوساطة Tuina في التهاب العضلات الهيكلية الذي يؤثر على تطور KOA والألم ، مما يضع الأساس لمزيد من الدراسات متعددة المستويات حول الآليات العلاجية لتدخل Tuina في KOA.
باختصار ، تصف هذه الورقة التحقيق والتفصيل لآليات التهاب العضلات والهيكل العظمي في تطور KOA وآلامه ، وكذلك الآثار العلاجية ل Tuina على KOA، من منظور تعبير عامل الالتهاب المناعي ، جنبا إلى جنب مع المؤشرات السلوكية ذات الصلة ، لتقديم أدلة بحثية حديثة لنظرية "اختلال الأوتار والعظام" في الطب الصيني التقليدي.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
تمت الموافقة على جميع التجارب والإشراف عليها من قبل لجنة رعاية واستخدام بجامعة شنغهاي للطب الصيني التقليدي (رقم الموافقة: SYXK2018-0040) ، والتي تتوافق مع الشروط الواردة في إعلان هلسنكي للجمعية الطبية العالمية.
1. إعداد
- منزل 32 Sprague Dawley (SD) ذكور الفئران الذين تتراوح أعمارهم بين 8 أسابيع ويزن 180-220 جم في جهاز مبيت محدد خال من مسببات الأمراض تحت 12 ساعة من الضوء / 12 ساعة من الدورات المظلمة عند 24 ± 2 درجة مئوية ورطوبة 60٪ مع نظام غذائي قياسي لحبيبات القوارض. تتوافق جميع العمليات التجريبية على مع أخلاقيات رعاية التجارب ولوائح سلامة.
- التوزيع العشوائي للفئران ووضعها في قفص في أربع مجموعات من ثمانية بعد أسبوع واحد من التغذية التكيفية: antiPD-L1 + Tuina (المجموعة A) ، النموذج (المجموعة B) ، Tuina (المجموعة C) ، والجراحة الوهمية (المجموعة D).
2. الحقن داخل المفصل من يودوا أسيتات أحادية الصوديوم (MIA) في الركبة
ملاحظة: باستثناء المجموعة D ، سيتم إعداد نموذج الفئران KOA عن طريق حقن تجويف مفصل الركبة من MIA في جميع المجموعات. بالنسبة للمجموعة D ، قم بحقن 25 ميكرولتر من المحلول الملحي الفسيولوجي المعقم في تجويف مفصل الركبة الأيمن.
- تخدير الفئران عن طريق وضعها في قفص مخدر ثم إدخال 2.5٪ إيزوفلوران حتى يتم تخديره بالكامل. تأكد من تخدير بالكامل من خلال انتظار النقطة التي يكون فيها الجرذ الصغير مستلقيا على ظهره ، وتتوقف أطرافه عن الحركة ، ولا توجد استجابة في قرصة إصبع القدم (منعكس الدواسة) ، ومنعكس الجفن ، واسترخاء العضلات.
- أضف مرهم عين الأليفة وقطرات العين إلى الفئران الصغيرة المخدرة لمنع جفاف العين.
- حلق الطرف الخلفي الأيمن من الفئران وتطهير مفصل الركبة بثلاث جولات متناوبة من اليودوفور و 75 ٪ من الإيثانول.
- للحفاظ على حالة تجريبية موحدة ، قم بتثبيت ثني الركبة بعناية بزاوية دقيقة تبلغ 90 درجة ، مع التأكد من توجيه الرباط الرضفي لأعلى. بعد ذلك ، قم بحقن 25 ميكرولتر من محلول MIA ، الذي يتكون من 4 ملغ من MIA المخفف في 25 ميكرولتر من محلول ملحي معقم في تجويف مفصل الركبة الأيمن للفئران.
ملاحظة: تم إجراء هذا الحقن باستخدام حاقن دقيق متخصص ، مما يضمن الدقة والاتساق في الإجراء21،22،23. ضع الفئران مرة أخرى في الأقفاص حتى تستيقظ. لا يتم إرجاع الذي خضع لعملية جراحية إلى شركة الأخرى حتى يتعافى تماما. - في نهاية الدراسة ، القتل الرحيم للفئران عن طريق حقن 1٪ من صوديوم بنتوباربيتال كجرعة 100 مجم / كجم.
3. تنفيذ توينا
ملاحظة: سيتم توجيه تنفيذ Tuina من خلال النظرية القائلة بأنه "بالنسبة للمرضى الذين يعانون من اختلال الأوتار والعظام ، يجب علاج الأوتار أولا". بدأت كلتا المجموعتين A و B التدخل في اليوم الأول بعد التقييم الناجح للنموذج ، وتم تشغيل كلتا المجموعتين مرة واحدة يوميا لمدة 14 يوما. تمت ملاحظة المجموعتين المتبقيتين لمدة 14 يوما فقط دون أي تدخل. يجب تدريب مشغلي التلاعب بشكل صارم قبل التجربة لضمان اتساق القوة والتردد والإيقاع.
- حدد بدقة نقطة الوخز بالإبر للفئران ، بما في ذلك EX-LE4 و ST35 و SP10 و ST34 و SP9 و GB34 (الشكل 1 والجدول 1) ، حيث سيتم تنفيذ طرق عجن الأصابع باستخدام الوخز بالإبر التجريبي24.
- إصلاح الفئران في موقف عرضة على معدات تثبيت الفئران.
- بعد أن يكون هادئا وتسترخي الأطراف السفلية ، اعجن EX-LE4 و ST35 للطرف المصاب بالإبهام والسبابة في وقت واحد لمدة 4 دقائق بمعدل 120-140 مرة / دقيقة.
- اعجن العضلات الأمامية والإنسية الجانبية للطرف المصاب بالإبهام والسبابة لمدة 3 دقائق بمعدل 120-140 مرة / دقيقة ، مع التركيز على SP10 و ST34 والعضلات القريبة من مفصل الركبة. التأكيد على التلاعب بتلك العضلات المتيبسة بكثافة حتى لا يكافح الفئران.
- اعجن عضلات الساق الخلفية للطرف المصاب من أعلى إلى أسفل لمدة 3 دقائق بمعدل 120-140 مرة / دقيقة باستخدام الإبهام والسبابة والإصبع الأوسط. لكشف منطقة العلاج بالكامل ، استخدم إصبع البنصر والإصبع الصغير لتثبيت مفصل الكاحل للطرف المصاب وشد الطرف المصاب برفق. ركز على SP9 و GB34 والعضلات القريبة من مفصل الركبة مع التركيز على العضلات الصلبة وشدتها حتى لا يكافح الفئران.
4. قياس المؤشر السلوكي
- قياس عتبة الألم الميكانيكية الأخمصية
ملاحظة: قياس عتبات الألم الميكانيكية الأخمصية قبل يوم واحد من حقن MIA وكذلك 2 و 9 و 16 يوما بعد الحقن.- أحضر الفئران إلى غرفة اختبار أخمصية ذات قاع شبكي من الفولاذ المقاوم للصدأ وجسم قفص بلاستيكي في بيئة هادئة في درجة حرارة الغرفة (22 ± 2) درجة مئوية لمدة 30 دقيقة من التكيف.
- استخدم جهاز اختبار الألم الميكانيكي الإلكتروني بإبرة اختبار بلاستيكية قطرها 0.8 مم لتحفيز المنطقة المركزية من مؤخرة القدم اليمنى للفئران عموديا. زيادة كثافة التحفيز بالتساوي وتدريجيا حتى تظهر الفئران تراجع مخلب وردود فعل تجنب.
- سجل قراءة الشاشة الإلكترونية كعتبة الألم الميكانيكية للقدم الأخمصية اليمنى للفأر.
- قياس كل الفئران 5x على فترات 5 دقائق.
- قم بإزالة القيم القصوى والدنيا من القيم الخمس. خذ متوسط قيمة القيم الثلاث الوسطى من خلال طريقة المتوسط المقتطع كنتيجة (الجدول 2).
- قياس عتبة الانسحاب الميكانيكية مخلب
ملاحظة: قم بقياس عتبة الانسحاب الميكانيكية للمخلب قبل يوم واحد من حقن MIA ، 2 و 9 و 16 يوما بعد الحقن.- أحضر الفئران إلى غرفة اختبار أخمصية ساخنة ذات قاع زجاجي 30 درجة مئوية وجسم قفص بلاستيكي في بيئة هادئة في درجة حرارة الغرفة (22 ± 2) درجة مئوية لمدة 30 دقيقة من التكيف.
- قم بتحفيز منطقة المركز الأخمصي الخلفي الأيمن بجهاز تسخين مصدر الضوء عند درجة حرارة تحفيز تبلغ 65 درجة مئوية حتى يظهر الجرذ تراجعا في المخلب واستجابة للتجنب.
- سجل قراءة الوقت للشاشة الإلكترونية باعتبارها عتبة الألم الحراري الأخمصي اليمنى للفئران.
- قم بقياس كل فأر 5 مرات بشكل مستمر على فترات 5 دقائق.
- قم بإزالة القيم القصوى والدنيا من القيم الخمس. خذ متوسط قيمة القيم الثلاث الوسطى من خلال طريقة المتوسط المقتطع كنتيجة (الجدول 3).
5. قياس تورم مفصل الركبة الأيمن
ملاحظة: قياس تورم مفصل الركبة الأيمن للفئران قبل يوم واحد من حقن MIA ، 2 و 9 و 16 يوما بعد الحقن.
- تخدير الفئران عن طريق وضعها في قفص مخدر وتعريضها ل 2.5 ٪ إيزوفلوران حتى يتم تخديره بالكامل.
- ضع الجرذ في وضع مسطح على طاولة العمليات.
- قم بقياس عرض مفصل الركبة الأيمن باستخدام ملاقط الورنية (الشكل 2 والجدول 4).
6. قياس درجة Lequesne MG
ملاحظة: قم بقياس درجة Lequesne MG في الفئران في 2 و 9 و 16 يوما بعد حقن MIA. طور Lequesne et al مؤشرا لشدة هشاشة العظام للورك (ISH) ، والذي يمكن استخدامه لتقييم فعالية التدخلات العلاجية. نحن نعتبر أربعة معايير: تحفيز الألم ، وتغيير المشي ، وحركة المفاصل ، وتورم المفاصل.
- إحضار الفئران إلى منصة التلاعب في بيئة هادئة في درجة حرارة الغرفة (22 ± 2) درجة مئوية.
- اطلب من عاملين ، أعمى كل منهما الآخر ، قياس استجابة تحفيز الألم المحلية ، وتغيير المشي ، وحركة المفاصل ، وتورم المفاصل.
- حفز الجانب الجانبي من مفصل الركبة الأيمن بإبرة اختبار بلاستيكية وسجل على مقياس من 0-3 وفقا للاستجابة. 0 لا يوجد رد ؛ 3 استجابة جيدة. 1 تقلص الطرف المصاب. 2 تقلص وتشنج الطرف المصاب ، مصحوبا بردود فعل معممة خفيفة ، مثل الارتعاش واللعق والمص.
- ضع الجرذ على طاولة العمليات ولاحظ مشية أطرافه الخلفية اليمنى. سجل على مقياس من 0-3 وفقا للاستجابة. 0 لا اضطراب في حركة الطرف المصاب ، والجري الطبيعي ، والقدم القوية ؛ 3 لا يستطيع الطرف المصاب المشاركة في المشي أو لمس الأرض أو الدوس على الأرض ؛ 1 رحلات خفيفة أثناء الجري مع دوس قوي ؛ 2 يشارك الطرف المصاب في المشي ، لكن الاضطراب في حركة الفئران (الرحلات) واضح.
- ثني وتمديد مفصل الركبة الأيمن للفأر باليد ومراقبة حركة المفصل. سجل على مقياس من 0-3 وفقا للاستجابة. 0 زاوية تنقل مشتركة تزيد عن 90 درجة ؛ 3 زاوية تنقل مشتركة أقل من 15 درجة ؛ 1 زاوية تنقل مشتركة أو 45 درجة -90 درجة ؛ 2 زاوية التنقل المشتركة من 15 درجة -45 درجة.
- المس مفصل الركبة الأيمن للفأر وقارن الاستجابة باستجابة الفئران العادية. سجل على مقياس من 0-2 وفقا للاستجابة. 0 لا تورم واضح وعلامات عظمية مرئية. 2 تورم ملحوظ ولا توجد علامات عظمية ؛ 1 تورم خفيف وعلامات عظمية سطحية.
- أضف هذه الدرجات لإنتاج درجة Lequesne MG لكل فأر واحسب متوسط القيمة من خلال الطريقة المشذبة (الجدول 5).
7. قياس درجة حرارة الجلد
ملاحظة: قياس درجة حرارة الجلد 1 يوم قبل حقن MIA و 9 و 16 يوما بعد الحقن.
- تخدير الفئران عن طريق وضعها في قفص مخدر ثم إدخال الأيزوفلوران حتى يتم تخديره بالكامل.
- ضع الجرذ في وضع جانبي على طاولة العمليات ، في درجة حرارة الغرفة (22 ± 2) درجة مئوية.
- قم بتصويب مفصل الركبة الأيمن عن طريق إمساك القدم باليد برفق. صورة لتحديد درجة حرارة الجلد باستخدام كاميرا الأشعة تحت الحمراء Filr.
- اقرأ درجة حرارة جلد مفصل الركبة وحول مفصل الركبة للفأر باستخدام برنامج التحرير الداعم. اضبط نقاط التحكم في مفصل الكاحل ومفصل الركبة حيث تنخفض درجة الحرارة تدريجيا.
8. التحليل الإحصائي
- استخدام البرامج الإحصائية للتعبير عن البيانات التجريبية في الأرباع.
- استخدم طريقة تقليم المتوسط للتعامل مع القيم المتطرفة. تمت الإشارة إلى نتائج الاختبارات السلوكية على أنها متوسط الخطأ المعياري ± المتوسط.
- إجراء عينات مستقلة اختبار t للمقارنة بين المجموعات. قم بتحليل البيانات السلوكية باستخدام تحليل القياس المتكرر ثنائي الاتجاه للتباين (ANOVA) ، متبوعا باختبارات المقارنة المتعددة لبونفيروني. عندما لا تظهر البيانات الحالة الطبيعية أو التماثل ، قم بإجراء اختبار غير معلمي (عينات Kruskal-Wallis k).
ملاحظة: يشير P < 0.05 إلى أن الفروق ذات دلالة إحصائية. جميع البيانات تلبي افتراضات الاختبارات الإحصائية التي يتم تطبيقها.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
تم تنفيذ البروتوكول الموصوف في بيئة سريرية في مستشفى Yueyang للطب الصيني التقليدي والغربي المتكامل. يوضح الشكل 1 الموقع الدقيق لنقاط الوخز التي تم دفعها في الفئران ، ويوضح الجدول 1 الفوائد الشائعة لتحفيز هذه النقاط. يقدم الجدول 2 والجدول 3 أدلة دامغة على تخفيف الآلام الملحوظ الذي تم تحقيقه من خلال علاج Tuina ، حتى في حالة عدم تثبيط مسار PD-1. توضح النتائج الواردة في الجدول 4 والجدول 5 والشكل 2 بالإضافة إلى ذلك العلاقة بين تطبيق Tuina وتطور هشاشة العظام في الركبة (KOA) ، مما يعني أن العلاج اليدوي يمكن أن يكون بمثابة نهج مساعد لتعزيز إدارة أعراض KOA في الفئران. قمنا بحقن كل فأر في مجموعة العلاج اليدوي Anti-PD-L1 (MTA) بجرعة 200 ميكروغرام من مضاد PD-L1 لسد المسار بعد 3 أيام من تحريض هشاشة العظام في MIA. بعد ذلك ، خضعت الفئران للعلاج اليدوي في نقاط الوخز بالإبر للفئران ، بما في ذلك EX-LE4 و ST35 و SP10 و ST34 و SP9 و GB34 ، كل يومين لمدة أسبوعين ، باستخدام طرق عجن الأصابع بعد 3 أيام بعد تحريض هشاشة العظام.
الشكل 1: مخطط النقاط في الفئران. الرجاء الضغط هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الشكل.
الشكل 2: درجات مختلفة من تورم الركبتين في الفئران. يمكن السيطرة على التورم من خلال تنفيذ Tuina. قبل حظر مسار PD-L1 ، تم قياس أقطار مفصل الركبة الأيمن (الركبة التي تم حقنها ب MIA) (في 19يناير) وقياسها مرة أخرى بعد أسبوع واحد. تصبح آثار Tuina على التحكم في تورم الركبة ضئيلة بعد حصار PD-L1. تمثل P < 0.0001 ، ** تمثل P < 0.01 ، * تمثل P < 0.05). يرجى النقر هنا لعرض نسخة أكبر من هذا الرقم.
| نقاط الوخز بالإبر | وظائف |
| EX-LE4 | تخفيف تورم الركبة والألم |
| إس تي 35 | تخفيف خلل المنعكسات المشتركة |
| SP10 | تخفيف آلام الفخذ الإنسي |
| إس تي 34 | تدخل شلل المفاصل |
| SP9 | تخفيف آلام الركبة |
| جي بي 34 | تخفيف شلل الأطراف السفلية |
الجدول 1: تأثير تحفيز هذه النقاط.
| الاساس | 1 أسبوع | 2 أسابيع | |
| المجموعة أ | 58.01 | 29.61 | 27.9 |
| (أنتيPD-L1 + توينا) | |||
| المجموعة ب | 31.76 | 25 | 23.52 |
| (نموذج) | |||
| المجموعة الثالثة | 34.15 | 32.45 | 37.53 |
| (توينا) | |||
| المجموعة الرابعة | 40.26 | 43.93 | 51.3 |
| (جراحة الشام) |
الجدول 2: مقارنة عتبات الألم الميكانيكية بين المجموعات عند خط الأساس (يوم حصار PD-L1) ، أسبوع واحد ، وأسبوعين بعد الحث الناجح. البيانات الواردة في الجدول هي القيم المتوسطة لكل مجموعة تم قياسها في ذلك اليوم. قيمة P بين أي مجموعتين هي <0.05 باستثناء قيمة P بين المجموعتين A و B.
| الاساس | 1 أسبوع | 2 أسابيع | |
| المجموعة أ | 9.67 | 6.72 | 7.82 |
| (أنتيPD-L1 + توينا) | |||
| المجموعة ب | 7.5 | 7.25 | 6.39 |
| (نموذج) | |||
| المجموعة الثالثة | 11.67 | 8.63 | 9.26 |
| (توينا) | |||
| المجموعة الرابعة | 12.8 | 10.8 | 10.14 |
| (جراحة الشام) |
الجدول 3: مقارنة عتبات الألم الحراري بين المجموعات عند خط الأساس ، 1 أسبوع ، و 2 أسابيع بعد الحث الناجح. البيانات الواردة في الجدول هي القيم المتوسطة لكل مجموعة تم قياسها في ذلك اليوم. قيمة P بين أي مجموعتين هي <0.05 باستثناء قيمة P بين المجموعتين A و B.
| الاساس | 1 أسبوع | 2 أسابيع | |
| المجموعة أ | 10.96 | 11.68 | 10.56 |
| (أنتيPD-L1 + توينا) | |||
| المجموعة ب | 11.3 | 12.18 | 11.79 |
| (نموذج) | |||
| المجموعة الثالثة | 11.75 | 10.88 | 10.35 |
| (توينا) | |||
| المجموعة الرابعة | 10.8 | 11.23 | 10.49 |
| (جراحة الشام) |
الجدول 4: مقارنة تورم هشاشة العظام في الركبة بين المجموعات في خط الأساس ، 1 أسبوع ، و 2 أسابيع بعد الحث الناجح. البيانات الواردة في الجدول هي القيم المتوسطة لكل مجموعة تم قياسها في ذلك اليوم. قيمة P بين أي مجموعتين هي <0.05 باستثناء قيمة P بين المجموعتين A و B)
| الاساس | 1 أسبوع | 2 أسابيع | |
| المجموعة أ | 3.13 | 4.25 | 3.88 |
| (أنتيPD-L1 + توينا) | |||
| المجموعة ب | 2.63 | 4.5 | 4.75 |
| (نموذج) | |||
| المجموعة الثالثة | 2.75 | 1.88 | 2.25 |
| (توينا) | |||
| المجموعة الرابعة | 0 | 0 | 0 |
| (جراحة الشام) |
الجدول 5: مقارنة مؤشر Lequesne MG بين المجموعات عند خط الأساس ، 1 أسبوع ، و 2 أسابيع بعد الحث الناجح. البيانات الواردة في الجدول هي القيم المتوسطة لكل مجموعة تم قياسها في ذلك اليوم. قيمة P بين أي مجموعتين هي <0.05 باستثناء قيمة P بين المجموعتين A و B.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
تهدف هذه الدراسة إلى تقييم تحسن KOA بعد تدخل Tuina باستخدام مؤشرات سلوكية موحدة والتحقيق في آليات Tuina ل KOA والعلاقة بين العضلات الهيكلية و KOA. على عكس العلاجات الدوائية والجراحية ، فإن Tuina له تأثير تنظيمي إيجابي على الأنظمة الحركية والمناعية والغدد الصماء. يمكن أن يخفف Tuina الالتهاب والألم الناتج عن المرض من خلال العمل على أهداف مختلفة. على سبيل المثال ، من خلال تنظيم مسار TLR4 و miRNA ، يمكن أن يمنع تنشيط الخلايا الدبقية ، ويعدل وظائف المخ المتغيرة ، وينظم السيتوكينات الالتهابية في اتجاه مجرى النهر ، ويقمع الالتهاب المحيطي25،26،27. في الوقت نفسه ، يمكن أن تتدخل Tuina أيضا في الجهاز العصبي اللاإرادي والمحور تحت المهاد والغدة النخامية والغدة الكظرية التي تعاني من خلل وظيفي في اضطرابات الألم المزمن ، مما يساعد على استعادة توازن الجهاز العصبي اللاإرادي وتحفيز استجابة الغدد الصماء المناعية ، والتي يمكن أن تخفف الألم عن طريق تنظيم عمليات الغدد الصماء والفسيولوجية28،29،30. بالإضافة إلى ذلك ، عندما يحفز Tuina العضلات خارجيا ، فإن الإثارة السمبتاوي 31 ، والضغط خارج الأوعية الدموية في المختبر يسبب تقلص العضلات الهيكلية وتوسع الأوعية ، مما يساهم في الاستجابة الاحتقانية ويعزز عملية التمثيل الغذائي32,33. لذلك ، كعلاج غير دوائي وغير جراحي ، يعد Tuina علاجا واعدا للتخفيف من KOA.
استعرضنا أيضا الأدبيات المتعلقة بالآثار العلاجية للتمارين الهوائية والطب الصيني التقليدي (TCM) والوخز بالإبر الكهربائية على نموذج KOA الناجم عن يودوا أسيتات أحادية الصوديوم (MIA). يمكن أن تمنع التمارين الهوائية موت الخلايا الغضروفية المبرمج من خلال تنظيم التعبير عن TRPV5 ، وقد يكون الجمع بين التمارين الهوائية وكبسولات هيدروكلوريد الجلوكوزامين أكثر فعالية34,35. المركبات المنقاة من الأعشاب الصينية ، مثل Casticin وحمض الفانيليك ، يمكن أن تقلل من التهاب المفاصل في الركبة والسلوك / الوسيط المرتبط بالألم في الجسم الحي. يمكن للمركبات المنقاة من الأعشاب الصينية ، مثل Casticin وحمض الفانيليك36 ، أن تقلل من الالتهاب الزليلي KOA والسلوك / الوسيط المرتبط بالألم في هشاشة العظام في الركبة في الجسم الحي. بالإضافة إلى ذلك ، يمكن لحمض الفانيليك حماية مفاصل الركبة عن طريق تثبيط التنشيط الالتهابي NLRP337. علاوة على ذلك ، فقد ثبت أن الوخز بالإبر الكهربائي يثبط التهاب NLRP3 ويقلل من داء البيروبتوسيس ، مما يؤدي إلى الحفاظ على أنسجة الغضاريف وعلاج KOA38.
على عكس الطب الصيني التقليدي ، يتطلب Tuina أشكالا مختلفة من الحركة للعلاج السريري ، حيث يجمع بين تقنيات متعددة وحركة سلبية للمريض ، والتي غالبا ما تكون مشكلة للممارسين الجدد في اختيار التقنية المناسبة وموقع العمل وقوة العمل. بالإضافة إلى ذلك ، يمثل تقييم فعالية ما بعد العلاج تحديا كبيرا في العلاج المتلاعب ، حيث اقتصر في الغالب على الأوصاف الذاتية للمرضى ، مع عدم وجود بيانات موضوعية لتقييم الأساليب والممارسات. لذلك ، كنا نهدف إلى التحقيق في آليات التهاب العضلات والهيكل العظمي في تطور KOA والألم وفحص الآثار العلاجية ل Tuina على KOA بناء على نموذج الفئران من KOA، المستحث مع MIA ، جنبا إلى جنب مع المؤشرات السلوكية والعوامل الالتهابية ذات الصلة. في الوقت نفسه ، نظرا لأن Tuina تسترشد بالنظرية القائلة بأنه "بالنسبة للمرضى الذين يعانون من اختلال الأوتار والعظام ، يجب علاج الأوتار أولا" ، سيتم استخدام قائمة نقاط الوخز بالإبر للفئران في الوخز بالإبر التجريبية لتحديد موقع EX-LE4 و ST35 و SP10 و ST34 و SP9 و GB34 بدقة لتنفيذ طرق فرك الأصابع. لذلك ، يجب تدريب المشغلين الذين يقومون بالتلاعب بشكل صارم قبل تطبيق التدخل لضمان اتساق القوة والتردد والإيقاع.
يقدم الجدول 2 والجدول 3 دليلا على أن الألم قد تم تخفيفه بشكل كبير بواسطة Tuina دون حصار مسار PD-1. توضح النتائج الواردة في الجدول 4 والجدول 5 والشكل 2 العلاقة بين تنفيذ Tuina وتطور KOA ، مما يشير إلى أن العلاج اليدوي يمكن أن يكون علاجا تكميليا ل KOA لتحسين أعراض KOA لدى الفئران. لذلك ، قد يكون العلاج مع Tuina تدخلا فعالا لمكافحة تطور KOA. ومع ذلك ، هناك حاجة إلى مزيد من الدراسات المتعمقة لتوضيح آليتها.
علاوة على ذلك ، هناك بعض القيود على هذا البروتوكول التجريبي. أولا ، نظرا لوجود فئران مفرطة النشاط أو هادئة وقد يكون هناك بعض الخطأ في قياس الألم الميكانيكي ، يجب توقيت كل قياس بفواصل زمنية منتظمة بين كل قياس. ثانيا ، تم تصميم هذا التصميم التجريبي لدراسة نموذج الفئران KOA الناجم عن MIA ، وهناك حاجة إلى مزيد من البحث لتوضيح الآثار العلاجية السريرية ل Tuina. ومع ذلك ، ركز فريقنا على تأثير KOA على العضلات الهيكلية ، وتحسين العضلات و KOA بواسطة Tuina ، والعلاقة مع مسار PD-1 ، بهدف التحقيق في آلية تدخل Tuina في KOA. في المستقبل ، سنهدف إلى تعزيز جدوى وسلامة وفعالية علاج التلاعب وإجراء المزيد من الأبحاث حول الفعالية السريرية ل Tuina على العضلات الهيكلية. أثناء دراسة العلاقة بين الأوتار والعظام ، والتسبب في KOA، وآليات تدخل علاج التلاعب ، نأمل أيضا في تطبيق نتائج أبحاثنا وأفكارنا على أمراض أخرى.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
يعلن المؤلفون أنه لا يوجد تضارب في المصالح.
Acknowledgments
وتدعم هذه الدراسة المؤسسة الوطنية للعلوم الطبيعية في الصين (NO.82105042, 82205302)؛ برنامج شنغهاي للتميز بعد الدكتوراه (NO.2020371) ؛ مؤسسة علوم ما بعد الدكتوراه الصينية (NO.2021M692156) ؛ برنامج شنغهاي للإبحار (NO.20YF1450900) ؛ مؤسسة العلوم في مستشفى يوييانغ للطب الصيني التقليدي والغربي المتكامل (NO.2021yygq03). لم يكن للممولين أي دور في تصميم أو تنفيذ أو كتابة الدراسة.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Anti-PD-L1 | Abcam, Cambridge, MA, USA | ab80276 | |
| electric von Frey esthesiometer | IITC/Life Science, Woodland Hills, CA, USA | ALMEMO 2450 | |
| GraphPad Prism 9.0 | GraphPad Software | Software for stastistical analysis | |
| monosodium iodoacetate | Sigma-Aldrich Inc | I9148 | Resolved into normal saline for injection |
| pentasorbital sodium | Sigma-Aldrich Inc | P3761 | |
| Sprague Dawley (SD) male rats | Shanghai Jihui Experimental Animal Breeding Co., Ltd | No. SCXK (Hu) 2017-0012 | |
| thermal analgesia tester | IITC/Life Science | Model 390 |
References
- Katz, J. N., et al. Diagnosis and treatment of hip and knee osteoarthritis: A review. JAMA. 325 (6), 568-578 (2021).
- Culvenor, A. G., et al. Prevalence of knee osteoarthritis features on magnetic resonance imaging in asymptomatic uninjured adults: a systematic review and meta-analysis. Br J Sports Med. 53 (20), 1268-1278 (2019).
- Safiri, S., et al. regional and national burden of osteoarthritis 1990-2017: a systematic analysis of the Global Burden of Disease Study 2017. Ann Rheum Dis. 79 (6), 819-828 (2020).
- Kong, L., et al. Traditional Chinese exercises on pain and disability in middle-aged and elderly patients with neck pain: a systematic review and meta-analysis of randomized controlled trials. Front Aging Neurosci. 14, 912-945 (2022).
- Nevitt, M. C., et al. Symptoms of knee instability as risk factors for recurrent falls. Arthritis Care Res (Hoboken). 68 (8), 1089-1097 (2016).
- Hunter, D. J., March, L., Chew, M. Osteoarthritis in 2020 and beyond: a Lancet Commission). Lancet. 396 (10264), 1711-1712 (2020).
- Fan, Z. J., et al. Interpretation and evaluation of the Chinese Osteoarthritis Treatment Guidelines (2021 Edition). Chinese Journal of Evidence-Based Medicine. 22 (06), 621-627 (2022).
- Chen, W., et al. Design of an epidemiological survey on the prevalence of osteoarthritis of the knee in a middle-aged and elderly population in China. Journal of Hebei Medical University. 36 (04), 487-490 (2015).
- Shao, S. Study on the mechanism of regulating the "balance of tendon and bone force" in the treatment of knee osteoarthritis by Tui Na manipulation. Shanghai University of Traditional Chinese Medicine. , 107-108 (2020).
- Liu, S. Role and mechanism of PD-1/PD-L1 pathway in osteoarthritis in mice. Shandong University. , 130-134 (2020).
- Shoujian, PD-1 promotes the repair and regeneration of contused skeletal muscle by regulating Treg cells and macrophages. Shanghai Institute of Physical Education. , 54-58 (2020).
- Levinger, P., et al. The level of FoxO1 and IL-15 in skeletal muscle, serum and synovial fluid in people with knee osteoarthritis: a case control study. Osteoporos Int. 27 (6), 2137-2143 (2016).
- Niu, Q., Xie, C., Jiang, Z. Advances in Chinese medicine based on PI3K/AKT signaling pathway for the treatment of knee osteoarthritis. Massage and Rehabilitation Medicine. , 1-5 (2022).
- Liu, S., et al. Blocking of checkpoint receptor PD-L1 aggravates osteoarthritis in macrophage-dependent manner in the mice model. Int J Immunopathol Pharmacol. 33, 2058-2073 (2019).
- Molanouri, S. M., et al. Combined effect of aerobic interval training and selenium nanoparticles on expression of IL-15 and IL-10/TNF-alpha ratio in skeletal muscle of 4T1 breast cancer mice with cachexia. Cytokine. 90, 100-108 (2017).
- Mahmoudian, A., et al. Early-stage symptomatic osteoarthritis of the knee - time for action. Nat Rev Rheumatol. 17 (10), 621-632 (2021).
- Nahin, R. L., et al. Evidence-based evaluation of complementary health approaches for pain management in the United States. Mayo Clin Proc. 91 (9), 1292-1306 (2016).
- Bervoets, D. C., et al. Massage therapy has short-term benefits for people with common musculoskeletal disorders compared to no treatment: a systematic review. J Physiother. 61 (3), 106-116 (2015).
- Xu, H., et al. Effectiveness of tui na in treating pain after total knee replacement for knee osteoarthritis. Chinese Tissue Engineering Research. 25 (18), 2840-2845 (2021).
- Ali, A., et al. Massage therapy and quality of life in osteoarthritis of the knee: a qualitative study. Pain Med. 18 (6), 1168-1175 (2017).
- Yoh, S., et al. Intra-articular injection of monoiodoacetate induces diverse hip osteoarthritis in rats, depending on its dose. BMC Musculoskelet Disord. 23 (1), 494-487 (2022).
- Lockwood, S. M., et al. Characterisation of peripheral and central components of the rat monoiodoacetate model of osteoarthritis. Osteoarthritis Cartilage. 27 (4), 712-722 (2019).
- McCoy, A. M. Animal models of osteoarthritis: Comparisons and key considerations. Vet Pathol. 52 (5), 803-818 (2015).
- Guo, X. Exploring the effect of pushing on cartilage in rats with knee osteoarthritis based on ROCK/LIMK1/Cofilin signaling pathway. Chongqing Medical University. , 42-44 (2022).
- Liu, Z. F., et al. Tuina for peripherally-induced neuropathic pain: A review of analgesic mechanism. Front Neurosci. 16, 1096-1104 (2022).
- Gebremariam, L., et al. Subacromial impingement syndrome--effectiveness of physiotherapy and manual therapy. Br J Sports Med. 48 (16), 1202-1208 (2014).
- Yao, C., et al. Transcriptome profiling of microRNAs reveals potential mechanisms of manual therapy alleviating neuropathic pain through microRNA-547-3p-mediated Map4k4/NF-kappab signaling pathway. J Neuroinflammation. 19 (1), 211-221 (2022).
- Valera-Calero, A., et al. Endocrine response after cervical manipulation and mobilization in people with chronic mechanical neck pain: a randomized controlled trial. Eur J Phys Rehabil Med. 55 (6), 792-805 (2019).
- Kovanur, S. K., et al. Measureable changes in the neuro-endocrinal mechanism following spinal manipulation. Med Hypotheses. 85 (6), 819-824 (2015).
- Colombi, A., Testa, M. The effects induced by spinal manipulative therapy on the immune and endocrine systems. Medicina (Kaunas). 55 (8), 312-314 (2019).
- Afify, A., Mark, H. F. Fluorescence in situ hybridization assessment of chromosome 8 copy number in stage I and stage II infiltrating ductal carcinoma of the breast. Cancer Genet Cytogenet. 97 (2), 101-105 (1997).
- Kirby, B. S., et al. Mechanical influences on skeletal muscle vascular tone in humans: insight into contraction-induced rapid vasodilatation. J Physiol. 583, 861-874 (2007).
- Sefton, J. M., et al. Therapeutic massage of the neck and shoulders produces changes in peripheral blood flow when assessed with dynamic infrared thermography. J Altern Complement Med. 16 (7), 723-732 (2010).
- Chen, B., et al. Aerobic exercise combined with glucosamine hydrochloride capsules inhibited the apoptosis of chondrocytes in rabbit knee osteoarthritis by affecting TRPV5 expression. Gene. 830, 146465 (2022).
- Fang, L., et al. The mechanism of aerobic exercise combined with glucosamine therapy and circUNK in improving knee osteoarthritis in rabbits. Life Sci. 275, 119375 (2021).
- Li, X., et al. Casticin suppresses monoiodoacetic acid-induced knee osteoarthritis through inhibiting HIF-1alpha/NLRP3 inflammasome signaling. Int Immunopharmacol. 86, 106745 (2020).
- Ma, Z., et al. Vanillic acid reduces pain-related behavior in knee osteoarthritis rats Through the inhibition of NLRP3 inflammasome-related synovitis. Front Pharmacol. 11, 599022 (2020).
- Zhang, W., et al. Electroacupuncture ameliorates knee osteoarthritis in rats via inhibiting NLRP3 inflammasome and reducing pyroptosis. Mol Pain. 19, 17448069221147792 (2023).
