Summary
Bu protokol, Tuina'nın KOA hayvan modellerinde uygulanması için bir referans sağlayan, diz osteoartritinin (KOA) sodyum monoiyodoasetat enjeksiyonuna bağlı sıçan modelinde Tuina müdahale yöntemlerini açıklar. Bu protokol aynı zamanda Tuina'nın KOA için etkili mekanizmasını da incelemektedir ve sonuçlar uygulamasının desteklenmesine yardımcı olacaktır.
Abstract
Yaygın bir dejeneratif eklem hastalığı olan diz osteoartriti (KOA), eklemin onarılamaz yapısal hasarına kadar ilerleyebilen kronik ağrı ve sakatlık ile karakterizedir. KOA'da eklem kıkırdağı, kaslar, sinovyum ve diz eklemini çevreleyen diğer dokular arasındaki bağlantının araştırılması büyük önem taşımaktadır. Şu anda, KOA'yı yönetmek yaşam tarzı değişikliklerini, egzersizi, ilaçları ve cerrahi müdahaleleri içerir; bununla birlikte, KOA ile ilişkili ağrının altında yatan karmaşık mekanizmaların aydınlatılması hala eksiktir. Sonuç olarak, KOA ağrısı önemli bir klinik zorluk ve terapötik bir öncelik olmaya devam etmektedir. Tuina'nın motor, bağışıklık ve endokrin sistemler üzerinde düzenleyici bir etkiye sahip olduğu bulunmuştur, bu da Tuina'nın enflamatuar faktörlerin yukarı regülasyonundan kaynaklanan KOA semptomlarını hafifletip hafifletemeyeceğini ve ayrıca iskelet kasındaki enflamatuar faktörlerin KOA'nın ilerlemesini artırıp artıramayacağını araştırmaktadır.
32 erkek Sprague Dawley (SD) sıçanı (180-220 g) her biri sekiz hayvandan oluşan dört gruba randomize ettik: antiPD-L1 + Tuina (grup A), model (grup B), Tuina (grup C) ve sahte cerrahi (grup D). Grup A, B ve C için sağ diz eklem boşluğuna 25 μL sodyum monoiyodoasetat (MIA) solüsyonu (25 μL steril salin solüsyonunda seyreltilmiş 4 mg MIA), grup D için aynı miktarda steril serum fizyolojik enjekte edildi. Tüm gruplar enjeksiyondan önce ve enjeksiyondan 2, 9 ve 16 gün sonra en az stresli testler (pençe mekanik çekilme eşiği, pati çekilmesi termal latansı, sağ diz ekleminin şişmesi, Lequesne MG skoru, cilt sıcaklığı) kullanılarak değerlendirildi.
Introduction
Diz osteoartriti (KOA), kronik ağrı ve sakatlık ile karakterize yaygın bir dejeneratif osteoartrittir ve nispeten şiddetli KOA, eklemde geri dönüşü olmayan yapısal hasara yol açacaktır1. KOA'nın yüksek küresel prevalansı, hastaların yaşam kalitesini ciddi şekilde bozan önemli bir küresel halk sağlığı sorunuhaline gelmiştir 2,3 4,5. Araştırmalar, KOA'nın dünya çapında 260 milyondan fazla insanı etkilediğini göstermiştir6. Nüfusun yaşlanmasıyla birlikte, Çin'de KOA'nın toplam yaygınlık oranı 17.0 yaşın üzerinde% 40'a kadar çıkmaktadır ve bu da etkilenenlerin ailelerine ağır bir yük getirmektedir 7,8.
Çin tıbbına göre, KOA "felç" kategorisine aittir9 ve Sarı İmparator'un İç Hastalıkları Klasiği tendonları, kemikleri ve eti felçle ilişkilendirir. Bu nedenle KOA'da diz eklemi çevresindeki kıkırdak, kas, sinovyum ve diğer dokular arasındaki bağlantıya dikkat etmemiz gerekir. Modern tıpta, artritin immün homeostazının ana bileşenleri olan hem kas hem de kemik iltihabı, KOA ağrısının ilerlemesini sağlar. Bununla birlikte, çoğu çalışma kemik eklemlerinde kıkırdak iltihabı ve sinovyal inflamasyona odaklanmaktadır ve iskelet kaslarındaki inflamatuar fenomenleri inceleyen makalelerin azlığı vardır. Bu nedenle, KOA'yı daha kapsamlı bir şekilde anlamak ve daha etkili tedavi yöntemleri için fikir sağlamak için iskelet kasının inflamasyondaki rolü hakkında daha fazla araştırmaya ihtiyaç vardır. Literatürün gözden geçirilmesinde, immün ilişkili faktör programlanmış ölüm ligandı 1'in (PD-L1) inhibisyonunun KOA 10,11'in ilerlemesini şiddetlendirdiğini ve KOA12'li hastaların iskelet kasındaIL-15 ve FOXO1'in farklı ekspresyonunun yanı sıra son dönem KOA'lı hastalarda önemli iskelet kası iltihabı olduğunu bulduk, bu da yürüyüşteki değişikliklerle ilişkilendirildi. İskelet kasının IL-6 gibi inflamatuar bağışıklık ile yakından ilişkili faktörleri de salgılayabildiği ve TNF-α'nin de PD-L1 yolağı ve KOA13,14,15 ile yakından ilişkili olduğu gösterilmiştir.
Şu anda, KOA için mevcut tedaviler arasında kilo kontrolü, egzersiz, ilaç tedavisi ve genellikle eklem içi enjeksiyonlar, analjezik ilaçlar, artroskopik cerrahi ve diz periprostetik osteotomisiiçeren cerrahi bulunmaktadır 16. Şu anda, KOA hastalığının ilerlemesi tamamen durdurulamaz veya tersine çevrilemez ve KOA ağrısının altında yatan karmaşık mekanizmalar net bir şekilde anlaşılmadan, KOA hastaları analjezik ilaçların aşırı kullanımı ve yüksek yan etki insidansı riski altındadır8. Çoğu tedavi stratejisi sadece kısa süreler için etkilidir ve hastalığın patogenezinden ziyade sadece semptomların geçici olarak hafifletilmesine odaklanır. Bu nedenle, KOA ağrısı tedavi için bir öncelik ve zorluk olmaya devam etmekte ve ciddi bir klinik zorluk oluşturmaktadır. Bununla birlikte, Tuina, KOA tedavisinde etkilenen eklem çevresindeki iskelet kaslarını doğrudan uyarabilir ve bazı faydalar sağlayabilir. Önceki tanımla birleştirildiğinde, iskelet kası dokusunun KOA'daki rolünü incelemek ideal bir terapidir ve iskelet kası dokusunun inflamasyondaki rolünü açıklığa kavuşturmak, KOA'nın Tuina'sı için daha iyi teorik destek sağlayabilir.
Çalışmalar, masaj terapisinin, osteopatik manipülatif tedavinin ve spinal manipülasyonun ağrıyı hafifletmeye ve vücut fonksiyonunu geri kazanmaya yardımcı olabileceğini göstermiştir17,18. Bu manipülasyonlar lokal inflamasyona etki edebilir ve dış mekanik etki yoluyla spazmları ve analjeziyi hafifletebilir. Total diz artroplastisi sonrası ağrıyı hafifletebilir, analjezik ilaçların kullanımını azaltabilir, postoperatif iyileşmeyi teşvik edebilir ve biyomekanik dengeyi iyileştirebilirler19. İsveç masajı osteoartrit tedavisinde uygulanabilir ve stresi azaltabilir ve yaşam kalitesini artırabilir20. Tuina'nın KOA üzerindeki terapötik etkisinden önce bazı çalışmalar yapılmıştır.
Bu deneyde ekibimiz, iskelet kasındaki PD-L1 ve ilgili enflamatuar faktörlerin ekspresyonunun KOA'yı indükleyip indükleyemeyeceğini ve sıçanlarda MIA kaynaklı KOA modeline dayalı gelişimini destekleyip destekleyemeyeceğini araştıracaktır. Tuina, artan inflamatuar faktör ekspresyonunun neden olduğu KOA semptomlarını hafifletip hafifletemeyeceğini görmek için de uygulanacaktır. Tuina, KOA gelişimini etkileyen iskelet kası iltihabında Tuina aracılı PD-1 yolu ile ağrı arasındaki ilişkiyi göstermek için PD-L1 inhibisyonu ile birleştirilecek ve KOA'da Tuina müdahalesinin terapötik mekanizmaları üzerine daha fazla çok seviyeli çalışmanın temelini atacaktır.
Özetle, bu makale, geleneksel Çin tıbbında "tendon ve kemik dengesizliği" teorisi için modern araştırma kanıtları sağlamak için, davranışsal göstergelerle birlikte, bağışıklık-inflamatuar faktör ekspresyonu perspektifinden KOA ve ağrısının gelişiminde iskelet kası iltihabı mekanizmalarının araştırılmasını ve detaylandırılmasını ve ayrıca Tuina'nın KOA üzerindeki terapötik etkilerini açıklamaktadır.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Tüm deneyler, Dünya Tabipler Birliği Helsinki Bildirgesi'ndeki şartlara uyan Şanghay Geleneksel Çin Tıbbı Üniversitesi Hayvan Bakım ve Kullanım Komitesi (onay numarası: SYXK2018-0040) tarafından onaylanmış ve denetlenmiştir.
1. Hayvan hazırlama
- 8 haftalık ve 180-220 g ağırlığındaki 32 Sprague Dawley (SD) erkek sıçan, 24 ± 2 ° C'de ve% 60 nemde 12 saat ışık/12 saat karanlık döngüler altında belirli bir patojen içermeyen muhafaza aparatında standart bir kemirgen pelet diyeti ile. Hayvanlar üzerinde yapılan tüm deneysel işlemler, deney hayvanlarının refah etiğine ve hayvan deney güvenliği yönetmeliklerine uygundur.
- Randomize edin ve 1 haftalık adaptif beslenmeden sonra sıçanları her biri sekiz hayvandan oluşan dört gruba ayırın: antiPD-L1 + Tuina (grup A), model (grup B), Tuina (grup C) ve sahte cerrahi (grup D).
2. Dizde eklem içi monosodyum iyodoasetat (MIA) enjeksiyonu
NOT: Grup D hariç, tüm gruplarda MİA'nın diz eklem boşluğu enjeksiyonu ile KOA sıçan modeli hazırlanacaktır. D grubu için, sağ diz eklemi boşluğuna 25 μL steril fizyolojik salin enjekte edin.
- Sıçanı anestezik bir kafese yerleştirerek ve ardından tamamen uyuşturulana kadar% 2.5 izofluran vererek uyuşturun. Genç sıçanın sırt üstü yattığı, uzuvlarının hareket etmeyi bıraktığı ve ayak parmağı sıkışması (pedal refleksi), palpebral refleks ve kas gevşemesinde yanıt olmadığı noktayı bekleyerek hayvanın tamamen uyuşturulduğunu onaylayın.
- Göz kuruluğunu önlemek için anestezi uygulanmış genç sıçanlara evcil hayvan göz merhemi ve göz damlası ekleyin.
- Sıçanların sağ arka bacaklarını tıraş edin ve diz eklemini üç alternatif iyodofor ve% 75 etanol ile dezenfekte edin.
- Standart bir deneysel durumu korumak için, diz fleksiyonunu 90°'lik hassas bir açıyla dikkatlice sabitleyin ve patellar ligamanın yukarı doğru yönlendirildiğinden emin olun. Daha sonra, sıçanların sağ diz eklem boşluğuna 25 μL steril salin çözeltisi içinde seyreltilmiş 4 mg MIA'dan oluşan 25 μL MIA çözeltisi enjekte edin.
NOT: Bu enjeksiyon, prosedürde doğruluk ve tutarlılık sağlayan özel bir mikroenjektör ile gerçekleştirilmiştir21,22,23. Fareleri uyanana kadar kafeslere geri koyun. Ameliyat geçiren hayvan, tamamen iyileşene kadar diğer hayvanların şirketine iade edilmez. - Çalışmanın sonunda, 100 mg / kg'lık bir doz olarak% 1 pentobarbital sodyum enjekte ederek sıçanlara ötenazi yapın.
3. Tuina'nın Uygulanması
NOT: Tuina'nın uygulanması, "tendon ve kemik dengesizliği olan hastalar için önce tendonların tedavi edilmesi gerektiği" teorisi tarafından yönlendirilecektir. Modelin başarılı bir şekilde değerlendirilmesinin ardından hem A hem de B grupları ilk gün müdahaleye başladı ve her iki grup da 14 gün boyunca günde birer kez ameliyat edildi. Kalan iki grup herhangi bir müdahale olmaksızın sadece 14 gün boyunca gözlemlendi. Manipülasyon operatörleri, kuvvet, frekans ve ritmin tutarlılığını sağlamak için deneyden önce sıkı bir şekilde eğitilmelidir.
- Deneysel Akupunktur24 kullanılarak parmak yoğurma yöntemlerinin gerçekleştirileceği EX-LE4, ST35, SP10, ST34, SP9 ve GB34 (Şekil 1 ve Tablo 1) dahil olmak üzere sıçan akupunktur noktasını doğru bir şekilde bulun.
- Fareyi, fare sabitleme ekipmanına yüzüstü pozisyonda sabitleyin.
- Sakinleştikten ve alt ekstremiteler gevşedikten sonra, etkilenen uzvun EX-LE4 ve ST35'ini başparmak ve işaret parmağı ile aynı anda 4 dakika boyunca 120-140 kez/dk'da yoğurun.
- Etkilenen uzvun ön ve medial-lateral kaslarını başparmak ve işaret parmağı ile SP10, ST34 ve diz eklemine yakın kaslara odaklanarak 120-140 kez/dk'da 3 dakika yoğurun. Sıçanın mücadele etmemesi için bu sert kasların yoğun bir şekilde manipüle edilmesini vurgulayın.
- Etkilenen uzvun arka baldır kaslarını başparmak, işaret parmağı ve orta parmağı kullanarak 3 dakika boyunca 120-140 kez/dk ile yukarıdan aşağıya yoğurun. Tedavi alanını tam olarak ortaya çıkarmak için, etkilenen uzvun ayak bileği eklemini tutmak için yüzük parmağını ve küçük parmağı kullanın ve etkilenen uzvu hafifçe çekin. SP9, GB34 ve diz ekleminin yakınındaki kaslara, sert kaslara ve yoğunluğa vurgu yaparak odaklanın, böylece sıçan mücadele etmez.
4. Davranış indeksinin ölçülmesi
- Plantar mekanik ağrı eşiğinin ölçülmesi
NOT: MIA enjeksiyonundan 1 gün önce ve enjeksiyondan 2, 9 ve 16 gün sonra plantar mekanik ağrı eşiklerini ölçün.- Sıçanları, 30 dakikalık adaptasyon için oda sıcaklığında (22 ± 2) ° C'de sessiz bir ortamda paslanmaz çelik ızgara tabanlı ve plastik kafes gövdeli bir plantar test odasına getirin.
- Sıçanların sağ arka ayağının orta bölgesini dikey olarak uyarmak için 0,8 mm çapında plastik bir test iğnesine sahip bir elektronik mekanik ağrı test cihazı kullanın. Sıçanlar pençe geri çekme ve kaçınma reaksiyonları gösterene kadar stimülasyon yoğunluğunu eşit ve kademeli olarak artırın.
- Elektronik ekranın okunmasını, sıçanın sağ plantar ayağının mekanik ağrı eşiği olarak kaydedin.
- Her sıçanı 5 dakikalık aralıklarla 5x ölçün.
- Beş değerden maksimum ve minimum değerleri kaldırın. Sonuç olarak kırpılmış ortalama yöntemiyle ortadaki üç değerin ortalama değerini alın (Tablo 2).
- Pençe mekanik çekilme eşiğinin ölçülmesi
NOT: MIA enjeksiyonundan 1 gün önce, enjeksiyondan 2, 9 ve 16 gün sonra pençe mekanik çekilme eşiğini ölçün.- Sıçanları, 30 dakikalık adaptasyon için oda sıcaklığında (22 ± 2) °C'de sessiz bir ortamda 30 °C cam tabanlı ve plastik kafes gövdeli ısıtılmış bir plantar test odasına getirin.
- Sıçan bir pençe geri çekme ve kaçınma tepkisi gösterene kadar 65 ° C'lik bir stimülasyon sıcaklığında bir ışık kaynağı ısıtma cihazı ile sağ arka plantar merkez alanını uyarın.
- Elektronik ekranın zaman okumasını sıçanın sağ plantar termal ağrı eşiği olarak kaydedin.
- Her sıçanı 5 dakikalık aralıklarla sürekli olarak 5x ölçün.
- Beş değerden maksimum ve minimum değerleri kaldırın. Sonuç olarak, kırpılmış ortalama yöntemiyle ortadaki üç değerin ortalama değerini alın (Tablo 3).
5. Sağ diz ekleminin şişliğinin ölçülmesi
NOT: MIA enjeksiyonundan 1 gün önce, enjeksiyondan 2, 9 ve 16 gün sonra sıçanların sağ diz ekleminin şişmesini ölçün.
- Sıçanı anestezik bir kafese yerleştirerek ve tamamen uyuşturulana kadar% 2.5 izoflurana maruz bırakarak uyuşturun.
- Fareyi ameliyat masasına düz bir pozisyonda yerleştirin.
- Sağ diz ekleminin genişliğini sürmeli kaliperlerle ölçün (Şekil 2 ve Tablo 4).
6. Lequesne MG skorunun ölçülmesi
NOT: MIA enjeksiyonundan 2, 9 ve 16 gün sonra sıçanlarda Lequesne MG skorunu ölçün. Lequesne ve arkadaşları, terapötik müdahalelerin etkinliğini değerlendirmek için kullanılabilecek kalça osteoartriti (ISH) için bir şiddet indeksi geliştirdiler. Dört parametreyi göz önünde bulunduruyoruz: ağrı stimülasyonu, yürüyüş değişikliği, eklem hareketliliği ve eklem şişmesi.
- Sıçanları oda sıcaklığında (22 ± 2) ° C'de sessiz bir ortamda bir manipülasyon platformuna getirin.
- Birbirine kör olan iki operatöre sahip olun, lokal ağrı stimülasyon yanıtını, yürüyüş değişikliğini, eklem hareketini ve eklem şişmesini ölçün.
- Sağ diz ekleminin lateral tarafını plastik bir test iğnesi ile uyarın ve cevaba göre 0-3 arasında bir ölçekte puanlayın. 0 yanıt yok; 3 iyi bir yanıt; 1 etkilenen uzuv kasılması; 2 etkilenen uzuvda kasılma ve spazm, titreme, yalama ve emme gibi hafif genelleştirilmiş reaksiyonların eşliğinde.
- Fareyi ameliyat masasına yerleştirin ve sağ arka bacaklarının yürüyüşünü gözlemleyin. Yanıta göre 0-3 arasında puan verin. 0 etkilenen uzvun hareketinde bozulma yok, normal koşu ve güçlü ayak hareketi; 3 etkilenen uzuv yürümeye katılamaz, yere dokunamaz veya yere basamaz; 1 güçlü vuruşlarla koşu sırasında hafif trekking; 2 Etkilenen uzuv yürümeye katılır, ancak sıçanların hareketindeki bozukluk (trekking) açıktır.
- Sıçanın sağ diz eklemini elle esnetin ve uzatın ve eklem hareketliliğini gözlemleyin. Yanıta göre 0-3 arasında puan verin. 90 ° 'den fazla 0 eklem hareketlilik açısı; 15 ° 'den az 3 eklem hareketlilik açısı; 1 eklem hareketlilik açısı veya 45 ° -90 °; 15 ° -45 ° 2 eklem hareketlilik açısı.
- Sıçanın sağ diz eklemine dokunun ve yanıtı normal bir sıçanınkiyle karşılaştırın. Yanıta göre 0-2 arasında puan verin. 0 belirgin şişlik ve görünür kemik işaretleri yok; 2 belirgin şişlik ve kemik izi yok; 1 hafif şişlik ve yüzeysel kemik lekeleri.
- Her sıçan için Lequesne MG skorunu üretmek için bu skorları ekleyin ve kesilmiş yöntemle ortalama değeri hesaplayın (Tablo 5).
7. Cilt sıcaklığının ölçülmesi
NOT: MIA enjeksiyonundan 1 gün önce ve enjeksiyondan 9 ve 16 gün sonra cilt sıcaklığını ölçün.
- Sıçanı anestezik bir kafese yerleştirerek ve ardından tamamen uyuşturulana kadar izofluran vererek uyuşturun.
- Sıçanı oda sıcaklığında (22 ± 2) ° C'de ameliyat masasına yan pozisyonda yerleştirin.
- Ayağı elinizle hafifçe kavrayarak sağ diz eklemini düzeltin. Filr kızılötesi kamera ile cilt sıcaklığını belirlemek için fotoğraf çekin.
- Destekleyici düzenleme yazılımını kullanarak diz ekleminin ve sıçanın diz ekleminin etrafındaki cilt sıcaklığını okuyun. Sıcaklığın kademeli olarak düştüğü ayak bileği eklemi ve diz ekleminde kontrol noktaları ayarlayın.
8. İstatistiksel analiz
- Deneysel verileri çeyrek olarak ifade etmek için istatistiksel yazılım kullanın.
- Aykırı değerlerle başa çıkmak için trim ortalama yöntemini kullanın. Davranış testlerinin sonuçları, ortalamanın ortalama ± standart hatası olarak not edilir.
- Gruplar arasında karşılaştırma yapmak için bağımsız örneklem t-testi yapın. Davranışsal verileri, iki yönlü tekrarlanan varyans analizi (ANOVA) ve ardından Bonferroni'nin çoklu karşılaştırma testlerini kullanarak analiz edin. Verilerin normallik veya homoskedastisite göstermediği durumlarda, parametrik olmayan bir test yapın (Kruskal-Wallis k örnekleri).
NOT: P < 0.05 , farklılıkların istatistiksel olarak anlamlı olduğunu gösterir. Tüm veriler, uygulanan istatistiksel testlerin varsayımlarını karşılamaktadır.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Açıklanan protokol, Yueyang Entegre Geleneksel Çin ve Batı Tıbbı Hastanesi'nde klinik bir ortamda uygulandı. Şekil 1, sıçanlarda itilen akupunktur noktalarının tam yerini göstermektedir ve Tablo 1 , bu noktaları uyarmanın ortak faydalarını göstermektedir. Tablo 2 ve Tablo 3 , PD-1 yolağı inhibisyonu olmasa bile, Tuina tedavisi ile elde edilen kayda değer ağrı rahatlamasına dair ikna edici kanıtlar sunmaktadır. Tablo 4, Tablo 5 ve Şekil 2'de sunulan bulgular ayrıca Tuina uygulaması ile diz osteoartritinin (KOA) ilerlemesi arasındaki ilişkiyi göstermektedir, bu da manuel tedavinin sıçanlarda KOA semptom yönetimini geliştirmek için yardımcı bir yaklaşım olarak hizmet edebileceğini ima etmektedir. MIA'nın osteoartrit indüksiyonundan 3 gün sonra yolu bloke etmek için Manuel terapi Anti-PD-L1 (MTA) grubundaki her sıçana 200 μg anti-PD-L1 dozu enjekte ettik. Daha sonra sıçanlar, osteoartrit indüksiyonundan 3 gün sonra parmak yoğurma yöntemleri kullanılarak 2 hafta boyunca her 2 günde bir EX-LE4, ST35, SP10, ST34, SP9 ve GB34 dahil olmak üzere sıçan akupunktur noktalarında manuel tedaviye tabi tutuldu.
Şekil 1: Sıçanlardaki noktaların diyagramı. Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
Şekil 2: Sıçanlarda dizlerin çeşitli derecelerde şişmesi. Şişlik, Tuina uygulaması ile kontrol edilebilir. PD-L1 yolu bloke edilmeden önce, sağ diz eklem çapları (MIA enjekte edilen diz) ölçüldü (19Ocak'ta) ve 1 hafta sonra tekrar ölçüldü. Tuina'nın diz şişmesini kontrol etmedeki etkileri PD-L1 blokajından sonra önemsiz hale gelir. P < 0,0001'i temsil eder, ** P < 0,01'i temsil eder, * P < 0,05'i temsil eder). Bu rakamın daha büyük bir sürümünü görüntülemek için lütfen buraya tıklayın.
| Akupunktur Noktaları | Işlev |
| EX-LE4 Serisi | Diz şişmesini ve ağrısını hafifletmek |
| ST35 Serisi | Eklem disfleksisini hafifletmek |
| SP10 Serisi | Medial femur ağrısını hafifletmek |
| ST34 Serisi | Eklem felci müdahalesi |
| SP9 (İngilizce) | Diz ağrısını hafifletmek |
| GB34 Serisi | Alt ekstremite felcini hafifletmek |
Tablo 1: Bu noktaların uyarılmasının etkisi.
| Taban çizgisi | 1 hafta | 2 hafta | |
| A Grubu | 58.01 | 29.61 | 27.9 |
| (antiPD-L1 + Tuina) | |||
| B Grubu | 31.76 | 25 | 23.52 |
| (modeli) | |||
| C Grubu | 34.15 | 32.45 | 37.53 |
| (Tuina) | |||
| D Grubu | 40.26 | 43.93 | 51.3 |
| (Sahte ameliyat) |
Tablo 2: Başlangıçta (PD-L1 blokajının olduğu gün), 1 hafta ve başarılı indüksiyondan 2 hafta sonra gruplar arasında mekanik ağrı eşiklerinin karşılaştırılması. Tablodaki veriler, her grubun o gün ölçülen ortalama değerleridir. A ve B grupları arasındaki P değeri hariç, herhangi iki grup arasındaki P değeri <0.05'tir.
| Taban çizgisi | 1 hafta | 2 hafta | |
| A Grubu | 9.67 | 6.72 | 7.82 |
| (antiPD-L1 + Tuina) | |||
| B Grubu | 7.5 | 7.25 | 6.39 |
| (modeli) | |||
| C Grubu | 11.67 | 8.63 | 9.26 |
| (Tuina) | |||
| D Grubu | 12.8 | 10.8 | 10.14 |
| (Sahte ameliyat) |
Tablo 3: Başarılı indüksiyondan başlangıçta, 1 hafta ve 2 hafta sonra gruplar arasındaki termal ağrı eşiklerinin karşılaştırılması. Tablodaki veriler, her grubun o gün ölçülen ortalama değerleridir. A ve B grupları arasındaki P değeri hariç, herhangi iki grup arasındaki P değeri <0.05'tir.
| Taban çizgisi | 1 hafta | 2 hafta | |
| A Grubu | 10.96 | 11.68 | 10.56 |
| (antiPD-L1 + Tuina) | |||
| B Grubu | 11.3 | 12.18 | 11.79 |
| (modeli) | |||
| C Grubu | 11.75 | 10.88 | 10.35 |
| (Tuina) | |||
| D Grubu | 10.8 | 11.23 | 10.49 |
| (Sahte ameliyat) |
Tablo 4: Başarılı indüksiyondan başlangıçta, 1 hafta ve 2 hafta sonra gruplar arasında diz osteoartriti şişmesinin karşılaştırılması. Tablodaki veriler, her grubun o gün ölçülen ortalama değerleridir. Herhangi iki grup arasındaki P değeri P değeri hariç 0.05'tir)
| Taban çizgisi | 1 hafta | 2 hafta | |
| A Grubu | 3.13 | 4.25 | 3.88 |
| (antiPD-L1 + Tuina) | |||
| B Grubu | 2.63 | 4.5 | 4.75 |
| (modeli) | |||
| C Grubu | 2.75 | 1.88 | 2.25 |
| (Tuina) | |||
| D Grubu | 0 | 0 | 0 |
| (Sahte ameliyat) |
Tablo 5: Başarılı indüksiyondan başlangıçta, 1 hafta ve 2 hafta sonra gruplar arasında Lequesne MG indeksinin karşılaştırılması. Tablodaki veriler, her grubun o gün ölçülen ortalama değerleridir. A ve B grupları arasındaki P değeri hariç, herhangi iki grup arasındaki P değeri <0.05'tir.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Bu çalışmanın amacı, standardize davranış göstergeleri kullanarak Tuina müdahalesi sonrası KOA gelişimini değerlendirmek, Tuina'nın KOA için mekanizmalarını ve iskelet kası ile KOA arasındaki ilişkiyi araştırmak. Farmakolojik ve cerrahi tedavilerin aksine, Tuina motor, bağışıklık ve endokrin sistemler üzerinde olumlu bir düzenleyici etkiye sahiptir. Tuina, farklı hedeflere göre hareket ederek hastalığın neden olduğu iltihabı ve ağrıyı hafifletebilir. Örneğin, TLR4 yolunu ve miRNA'yı düzenleyerek, glial hücrelerin aktivasyonunu inhibe edebilir, değişmiş beyin fonksiyonunu modüle edebilir, aşağı akış inflamatuar sitokinleri düzenleyebilir ve periferik inflamasyonu baskılayabilir25,26,27. Aynı zamanda Tuina, kronik ağrı bozukluklarında işlevsiz olan otonom sinir sistemine ve hipotalamik-hipofiz-adrenal eksene de müdahale edebilir, böylece otonom sinir sistemi homeostazını geri kazanmaya yardımcı olur ve endokrin ve fizyolojik süreçleri düzenleyerek ağrıyı hafifletebilen bir immünoendokrin yanıtı tetikleyebilir28,29,30. Ek olarak, Tuina kasları dışarıdan uyardığında, parasempatik uyarılma 31 ve in vitro ekstravasküler basınç, konjestif yanıta katkıda bulunan ve metabolizmayı destekleyen iskelet kası kasılmasına ve vazodilatasyona neden olur32,33. Bu nedenle, farmakolojik olmayan ve cerrahi olmayan bir tedavi olarak Tuina, KOA'nın rahatlaması için umut verici bir terapidir.
Ayrıca aerobik egzersiz, geleneksel Çin tıbbı (TCM) ve elektroakupunkturun monosodyum iyodoasetat (MIA) tarafından indüklenen KOA modeli üzerindeki terapötik etkileri hakkındaki literatürü de gözden geçirdik. Aerobik egzersiz, TRPV5 ekspresyonunu düzenleyerek kondrosit apoptozunu inhibe edebilir ve aerobik egzersiz ve glukozamin hidroklorür kapsüllerinin kombinasyonu daha da etkili olabilir34,35. Casticin ve vanilik asit gibi Çin bitkilerinden saflaştırılan bileşikler, diz osteoartriti, sinovyal inflamasyonu ve ağrıya bağlı davranışı/arabulucuyu in vivo olarak azaltabilir. Casticin ve vanilik asit36 gibi Çin bitkilerinden saflaştırılan bileşikler, in vivo diz osteoartritinde KOA sinovyal inflamasyonunu ve ağrıya bağlı davranışı/aracıyı azaltabilir. Ek olarak, vanilik asit, NLRP3 inflamatuar aktivasyonunu inhibe ederek diz eklemlerini koruyabilir37. Ayrıca, elektroakupunkturun NLRP3 inflamatuarını inhibe ettiği ve piroptozu azalttığı, kıkırdak dokusunun korunmasına ve KOA38'in tedavisine yol açtığı gösterilmiştir.
TCM'den farklı olarak Tuina, klinik tedavi için farklı hareket biçimleri gerektirir, birden fazla tekniği ve hastanın pasif hareketini birleştirir, bu da genellikle yeni uygulayıcılar için uygun tekniği, etki alanını ve etki gücünü seçmede bir sorundur. Ek olarak, tedavi sonrası etkinliğin değerlendirilmesi, manipülatif tedavide büyük bir zorluktur, çünkü çoğunlukla hastaların öznel tanımlarıyla sınırlıdır ve yöntem ve uygulamaları değerlendirmek için nesnel veriler yoktur. Bu nedenle, iskelet kası inflamasyonunun KOA ve ağrı gelişimindeki mekanizmalarını araştırmayı ve Tuina'nın KOA üzerindeki terapötik etkilerini, davranışsal ve inflamatuar faktörle ilişkili göstergelerle birlikte MIA ile indüklenen bir sıçan KOA modeline dayanarak incelemeyi amaçladık. Aynı zamanda, Tuina'ya "tendon ve kemik dengesizliği olan hastalar için önce tendonların tedavi edilmesi gerektiği" teorisi rehberlik ettiğinden, Deneysel Akupunktur'daki sıçan akupunktur noktası listesi, parmak yoğurma sürtünme yöntemlerini uygulamak için EX-LE4, ST35, SP10, ST34, SP9 ve GB34'ü doğru bir şekilde bulmak için kullanılacaktır. Bu nedenle, manipülasyonu gerçekleştiren operatörler, kuvvet, frekans ve ritmin tutarlılığını sağlamak için müdahale uygulanmadan önce sıkı bir şekilde eğitilmelidir.
Tablo 2 ve Tablo 3, PD-1 yolunun blokajı olmadan ağrının Tuina tarafından önemli ölçüde hafifletildiğine dair kanıt sunmaktadır. Tablo 4, Tablo 5 ve Şekil 2'deki sonuçlar, Tuina ve KOA ilerlemesinin uygulanması arasındaki ilişkiyi daha da göstermektedir, bu da manuel terapinin sıçanların KOA semptomlarını iyileştirmek için KOA için ek bir tedavi olabileceğini düşündürmektedir. Bu nedenle, Tuina ile tedavi, KOA'nın ilerlemesiyle mücadele etmek için etkili bir müdahale olabilir; Bununla birlikte, mekanizmasını açıklığa kavuşturmak için daha derinlemesine çalışmalara ihtiyaç vardır.
Ayrıca, bu deneysel protokolde bazı sınırlamalar vardır. İlk olarak, aşırı aktif veya sessiz sıçanlar olduğundan ve mekanik ağrı ölçümünde bazı hatalar olabileceğinden, her ölçümün her ölçüm arasında düzenli aralıklarla zamanlanması gerekir. İkincisi, bu deneysel tasarım MIA kaynaklı KOA sıçan modelini incelemek için tasarlanmıştır ve Tuina'nın klinik terapötik etkilerini göstermek için daha fazla araştırmaya ihtiyaç vardır. Bununla birlikte, ekibimiz KOA'ya Tuina müdahalesinin mekanizmasını araştırmayı amaçlayarak, KOA'nın iskelet kası üzerindeki etkisi, Tuina tarafından kas ve KOA'nın iyileştirilmesi ve PD-1 yolağı ile ilişkisi üzerine odaklanmıştır. Gelecekte, manipülasyon tedavisinin fizibilitesini, güvenliğini ve etkinliğini teşvik etmeyi ve Tuina'nın iskelet kası üzerindeki klinik etkinliği hakkında daha fazla araştırma yapmayı hedefleyeceğiz. Tendonlar ve kemikler arasındaki ilişkiyi, KOA'nın patogenezini ve manipülasyon terapisi müdahalesinin mekanizmalarını incelerken, araştırma bulgularımızı ve fikirlerimizi diğer hastalıklara da uygulamayı umuyoruz.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Yazarlar herhangi bir çıkar çatışması olmadığını beyan ederler.
Acknowledgments
Bu çalışma Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (NO.82105042, 82205302) tarafından desteklenmektedir; Şangay Doktora Sonrası Mükemmellik Programı (NO.2020371); Çin Doktora Sonrası Bilim Vakfı (NO.2021M692156); Şangay Yelken Programı (NO.20YF1450900); Yueyang Entegre Geleneksel Çin ve Batı Tıbbı Hastanesi Bilim Vakfı (NO.2021yygq03). Fon sağlayıcıların çalışmanın tasarımında, yürütülmesinde veya yazılmasında hiçbir rolü yoktu.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Anti-PD-L1 | Abcam, Cambridge, MA, USA | ab80276 | |
| electric von Frey esthesiometer | IITC/Life Science, Woodland Hills, CA, USA | ALMEMO 2450 | |
| GraphPad Prism 9.0 | GraphPad Software | Software for stastistical analysis | |
| monosodium iodoacetate | Sigma-Aldrich Inc | I9148 | Resolved into normal saline for injection |
| pentasorbital sodium | Sigma-Aldrich Inc | P3761 | |
| Sprague Dawley (SD) male rats | Shanghai Jihui Experimental Animal Breeding Co., Ltd | No. SCXK (Hu) 2017-0012 | |
| thermal analgesia tester | IITC/Life Science | Model 390 |
References
- Katz, J. N., et al. Diagnosis and treatment of hip and knee osteoarthritis: A review. JAMA. 325 (6), 568-578 (2021).
- Culvenor, A. G., et al. Prevalence of knee osteoarthritis features on magnetic resonance imaging in asymptomatic uninjured adults: a systematic review and meta-analysis. Br J Sports Med. 53 (20), 1268-1278 (2019).
- Safiri, S., et al. regional and national burden of osteoarthritis 1990-2017: a systematic analysis of the Global Burden of Disease Study 2017. Ann Rheum Dis. 79 (6), 819-828 (2020).
- Kong, L., et al. Traditional Chinese exercises on pain and disability in middle-aged and elderly patients with neck pain: a systematic review and meta-analysis of randomized controlled trials. Front Aging Neurosci. 14, 912-945 (2022).
- Nevitt, M. C., et al. Symptoms of knee instability as risk factors for recurrent falls. Arthritis Care Res (Hoboken). 68 (8), 1089-1097 (2016).
- Hunter, D. J., March, L., Chew, M. Osteoarthritis in 2020 and beyond: a Lancet Commission). Lancet. 396 (10264), 1711-1712 (2020).
- Fan, Z. J., et al. Interpretation and evaluation of the Chinese Osteoarthritis Treatment Guidelines (2021 Edition). Chinese Journal of Evidence-Based Medicine. 22 (06), 621-627 (2022).
- Chen, W., et al. Design of an epidemiological survey on the prevalence of osteoarthritis of the knee in a middle-aged and elderly population in China. Journal of Hebei Medical University. 36 (04), 487-490 (2015).
- Shao, S. Study on the mechanism of regulating the "balance of tendon and bone force" in the treatment of knee osteoarthritis by Tui Na manipulation. Shanghai University of Traditional Chinese Medicine. , 107-108 (2020).
- Liu, S. Role and mechanism of PD-1/PD-L1 pathway in osteoarthritis in mice. Shandong University. , 130-134 (2020).
- Shoujian, PD-1 promotes the repair and regeneration of contused skeletal muscle by regulating Treg cells and macrophages. Shanghai Institute of Physical Education. , 54-58 (2020).
- Levinger, P., et al. The level of FoxO1 and IL-15 in skeletal muscle, serum and synovial fluid in people with knee osteoarthritis: a case control study. Osteoporos Int. 27 (6), 2137-2143 (2016).
- Niu, Q., Xie, C., Jiang, Z. Advances in Chinese medicine based on PI3K/AKT signaling pathway for the treatment of knee osteoarthritis. Massage and Rehabilitation Medicine. , 1-5 (2022).
- Liu, S., et al. Blocking of checkpoint receptor PD-L1 aggravates osteoarthritis in macrophage-dependent manner in the mice model. Int J Immunopathol Pharmacol. 33, 2058-2073 (2019).
- Molanouri, S. M., et al. Combined effect of aerobic interval training and selenium nanoparticles on expression of IL-15 and IL-10/TNF-alpha ratio in skeletal muscle of 4T1 breast cancer mice with cachexia. Cytokine. 90, 100-108 (2017).
- Mahmoudian, A., et al. Early-stage symptomatic osteoarthritis of the knee - time for action. Nat Rev Rheumatol. 17 (10), 621-632 (2021).
- Nahin, R. L., et al. Evidence-based evaluation of complementary health approaches for pain management in the United States. Mayo Clin Proc. 91 (9), 1292-1306 (2016).
- Bervoets, D. C., et al. Massage therapy has short-term benefits for people with common musculoskeletal disorders compared to no treatment: a systematic review. J Physiother. 61 (3), 106-116 (2015).
- Xu, H., et al. Effectiveness of tui na in treating pain after total knee replacement for knee osteoarthritis. Chinese Tissue Engineering Research. 25 (18), 2840-2845 (2021).
- Ali, A., et al. Massage therapy and quality of life in osteoarthritis of the knee: a qualitative study. Pain Med. 18 (6), 1168-1175 (2017).
- Yoh, S., et al. Intra-articular injection of monoiodoacetate induces diverse hip osteoarthritis in rats, depending on its dose. BMC Musculoskelet Disord. 23 (1), 494-487 (2022).
- Lockwood, S. M., et al. Characterisation of peripheral and central components of the rat monoiodoacetate model of osteoarthritis. Osteoarthritis Cartilage. 27 (4), 712-722 (2019).
- McCoy, A. M. Animal models of osteoarthritis: Comparisons and key considerations. Vet Pathol. 52 (5), 803-818 (2015).
- Guo, X. Exploring the effect of pushing on cartilage in rats with knee osteoarthritis based on ROCK/LIMK1/Cofilin signaling pathway. Chongqing Medical University. , 42-44 (2022).
- Liu, Z. F., et al. Tuina for peripherally-induced neuropathic pain: A review of analgesic mechanism. Front Neurosci. 16, 1096-1104 (2022).
- Gebremariam, L., et al. Subacromial impingement syndrome--effectiveness of physiotherapy and manual therapy. Br J Sports Med. 48 (16), 1202-1208 (2014).
- Yao, C., et al. Transcriptome profiling of microRNAs reveals potential mechanisms of manual therapy alleviating neuropathic pain through microRNA-547-3p-mediated Map4k4/NF-kappab signaling pathway. J Neuroinflammation. 19 (1), 211-221 (2022).
- Valera-Calero, A., et al. Endocrine response after cervical manipulation and mobilization in people with chronic mechanical neck pain: a randomized controlled trial. Eur J Phys Rehabil Med. 55 (6), 792-805 (2019).
- Kovanur, S. K., et al. Measureable changes in the neuro-endocrinal mechanism following spinal manipulation. Med Hypotheses. 85 (6), 819-824 (2015).
- Colombi, A., Testa, M. The effects induced by spinal manipulative therapy on the immune and endocrine systems. Medicina (Kaunas). 55 (8), 312-314 (2019).
- Afify, A., Mark, H. F. Fluorescence in situ hybridization assessment of chromosome 8 copy number in stage I and stage II infiltrating ductal carcinoma of the breast. Cancer Genet Cytogenet. 97 (2), 101-105 (1997).
- Kirby, B. S., et al. Mechanical influences on skeletal muscle vascular tone in humans: insight into contraction-induced rapid vasodilatation. J Physiol. 583, 861-874 (2007).
- Sefton, J. M., et al. Therapeutic massage of the neck and shoulders produces changes in peripheral blood flow when assessed with dynamic infrared thermography. J Altern Complement Med. 16 (7), 723-732 (2010).
- Chen, B., et al. Aerobic exercise combined with glucosamine hydrochloride capsules inhibited the apoptosis of chondrocytes in rabbit knee osteoarthritis by affecting TRPV5 expression. Gene. 830, 146465 (2022).
- Fang, L., et al. The mechanism of aerobic exercise combined with glucosamine therapy and circUNK in improving knee osteoarthritis in rabbits. Life Sci. 275, 119375 (2021).
- Li, X., et al. Casticin suppresses monoiodoacetic acid-induced knee osteoarthritis through inhibiting HIF-1alpha/NLRP3 inflammasome signaling. Int Immunopharmacol. 86, 106745 (2020).
- Ma, Z., et al. Vanillic acid reduces pain-related behavior in knee osteoarthritis rats Through the inhibition of NLRP3 inflammasome-related synovitis. Front Pharmacol. 11, 599022 (2020).
- Zhang, W., et al. Electroacupuncture ameliorates knee osteoarthritis in rats via inhibiting NLRP3 inflammasome and reducing pyroptosis. Mol Pain. 19, 17448069221147792 (2023).
