Summary
Denne protokol beskriver etableringen af en tredimensionel (3D) ex vivo-model af kræftcelle-omentum-interaktion. Modellen giver en platform til belysning af protumormekanismer inden for fedtnichen og til afprøvning af nye terapier.
Abstract
Kræft i æggestokkene er den dødeligste gynækologiske malignitet. Omentum spiller en central rolle i at tilvejebringe et støttende mikromiljø til metastatiske ovariecancerceller samt immunmodulerende signaler, der tillader tumortolerance. Vi har dog begrænsede modeller, der nøje efterligner interaktionen mellem kræftceller i æggestokkene og fedtrigt væv. For yderligere at forstå de cellulære og molekylære mekanismer, hvormed omentum giver et protumoralt mikromiljø, udviklede vi en unik 3D ex vivo-model af kræftcelle-omentum-interaktion. Ved hjælp af humant omentum er vi i stand til at dyrke ovariecancerceller inden for dette fedtrige mikromiljø og overvåge de faktorer, der er ansvarlige for tumorvækst og immunregulering. Ud over at give en platform til undersøgelse af dette fedtrige tumormikromiljø giver modellen en fremragende platform til udvikling og evaluering af nye terapeutiske tilgange til at målrette metastatiske kræftceller i denne niche. Den foreslåede model er let at generere, billig og anvendelig til translationelle undersøgelser.
Introduction
Kræft i æggestokkene er den dødeligste gynækologiske malignitet på verdensplan1. Livstidsrisikoen for at udvikle denne kræft er ca. 1 ud af 70, med medianalderen for diagnosen ved 63 år2. Primære ovariemaligniteter klassificeres histologisk som enten epitel eller ikke-epitel. Epitelial ovariecancer (EOC) repræsenterer over 90% af tumorer, og den mest almindelige subtype er højkvalitets serøst karcinom (HGSC), som tegner sig for ca. 70% -80% af EOC'erne. I øjeblikket er der ingen effektive screeningsmetoder til at opdage sygdom tidligt. Så de fleste patienter diagnosticeres på et avanceret stadium (dvs. Fédération Internationale de Gynécologie et d'Obstétrique [FIGO] fase III eller IV), efter at kræften har spredt sig gennem bughulen2.
Standard frontlinjebehandling er cytoreduktiv kirurgi for at fjerne al synlig makroskopisk sygdom, efterfulgt af adjuverende platinbaseret kemoterapi for at ødelægge enhver resterende mikroskopisk sygdom. Mens der har været mange fremskridt inden for behandling af kræft i æggestokkene i løbet af de sidste to årtier, vil ca. 70% af patienterne med avanceret sygdom komme tilbage inden for 3 års behandling3. I betragtning af den generelle dårlige prognose for disse patienter sigter igangværende og fremtidige translationelle forskningsbestræbelser i EOC mod at identificere biomarkører til tidlig påvisning, forhindre metastaser, forbedre nuværende terapier for at undgå resistens og udvikle nye personlige kræftbehandlinger.
Generaliseret metastase i bughulen og dens tilhørende kemoresistens er to af de største begrænsninger for forbedring af behandlingen af patienter med kræft i æggestokkene 4,5. Omentum, en fedtforklædelignende struktur, der hænger ned fra maven over tarmene, er et hovedsted for ovariecancermetastase 6,7. Ud over dets funktion som en fysisk barriere har omentum vist sig at have regenerative og angiogene kapaciteter og besidder immunaktiviteter, som sammen fremmer vaskularisering, fremskynder sårheling og begrænser infektion8. Den indeholder en høj koncentration af stamceller, der kan differentiere sig til forskellige celletyper og kan hjælpe med at reparere beskadiget væv. Omentum kan blive betændt som reaktion på skade eller infektion, hvilket udløser migration af immunceller til skadestedet9. Disse immunceller frigiver vækstfaktorer og andre molekyler, der hjælper med at fremme reparation og regenerering af beskadiget væv. Immunceller, såsom makrofager, lymfocytter og plasmaceller, lokaliseret i omentum er strukturer kendt som "mælkeagtige pletter", som er ansvarlige for at detektere og angribe patogener og regulere peritoneal immunitet. Omentum har også vist sig at spille en rolle i at inducere immuntolerance10, hvilket er immunsystemets evne til at tolerere selvantigener og ikke angribe sundt væv. Imidlertid er de samme immunrelaterede aktiviteter også involveret i patologiske reaktioner, såsom vækst af omentale tumorer, metastaser og flugt af immunovervågning 9,11. Tidligere undersøgelser fra vores laboratorium og andre har vist en unik og aktiv rolle af fedtmikromiljøet i hæmning af antitumorale immunresponser og i erhvervelsen af kemoresistens12,13,14. Desværre har vi begrænset information om de cellulære og molekylære mekanismer, hvormed omentum giver et protumoralt mikromiljø.
For bedre at forstå interaktionerne mellem kræftceller og omentum blev der udviklet et 3D-kultursystem bestående af humane ovariecancerceller og patientafledte omentum-eksplanter. Den her beskrevne protokol repræsenterer en ny ex vivo-model for peritoneal carcinomatose. Denne model efterligner den naturlige progression af ovariecancer tumorigenese i dette fedtrige væv. Den foreslåede model er let at generere, billig og potentielt anvendelig til translationelle undersøgelser inden for ovariecancerforskning.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Følgende forskningsprotokol blev gennemgået og godkendt af Wayne State University Institutional Review Board (IRB). Der blev indhentet informeret samtykke fra alle patienter før operationen. Figur 1 illustrerer de tre generelle trin i denne protokol.
1. Fremstilling af humant omentumvæv
- Forbered omentumkulturmedier (DMEM/F12 + 10% føtalt bovint serum + 1% penicillin-streptomycin) og opbevar ved 4 °C. Alikvote 30-40 ml af dette medie i et sterilt 50 ml konisk rør eller kirurgisk prøvebeholder.
- Få kirurgiske prøver fra omental biopsi eller omentektomi kirurgi. Den sterile prøve nedsænkes i omentumkulturmedier umiddelbart efter fjernelse i operationsstuen. Hvis arbejdsgangen ikke tillader dette, skal du placere prøven i omentumkulturmedier så hurtigt som muligt. Prøven overføres ved at lægge den på is og opbevares ved 4 °C indtil forarbejdning.
BEMÆRK: Størrelsen af den fjernede omentumprøve bestemmer mængden af brugbart væv. - Behandl omentumprøven inden for 1-2 timer efter opsamling ved hjælp af en laminær strømningshætte. Sørg for, at alle materialer og værktøjer er sterile eller steriliserede.
- Fjern omentum fra opsamlingsbeholderen og overfør det til en 100 mm kulturskål. Nedsænk prøven i 1x fosfatbufret saltvand (1x PBS) og vask forsigtigt prøven for at fjerne eventuelle blodpropper eller snavs.
- Skær vævet i stykker (0,5 cm x 0,5 cm eller 100-200 mg; Figur 2A) Brug enten en lille kirurgisk saks eller en 10-15 mm skalpel. Brug små kirurgiske tang til at hjælpe med at manipulere vævet og undgå at knuse omentum. Hvis en energianordning blev brugt til kirurgisk fjernelse af omentumprøven, skal du undgå at bruge det forvrængede væv ved den forseglede kant.
- Hvert stykke skåret omentum anbringes i individuelle brønde på en kulturplade med 24 brønde, og brøndene fyldes med 500 μL omentumkulturmedier eller med et volumen, der er tilstrækkeligt til at dække omentummet uden at lade omentumstykket flyde over brøndbunden (figur 2B).
- Omentumstykker opbevares i friske kulturmedier ved 4 °C, indtil de er klar til injektion.
2. Forberedelse af ovariecancerceller
- Kultur humane ovariecancerceller i en 75 cm 2 dyrkningskolbe ved 37 °C og 5% CO2 til mindst 75% sammenløb på dagen for opsamling af omentum.
BEMÆRK: Denne protokol anvender mCherry-positive OCSC1-F2 humane ovariecancerceller, der tidligere er beskrevet15,16,17,18. Det kan ændres til enhver kræftcellelinje mærket med et fluorescenssignal. - Forbered celler inde i en laminær strømningshætte umiddelbart efter opsamling af omentumprøven. Sørg for, at alle materialer og værktøjer er sterile eller steriliserede.
- Der tilsættes 10 ml steril 1x PBS til dyrkningskolben, og cellerne vaskes ved forsigtigt at vippe kolben. Fjern 1x PBS og derefter tilføje 3 ml 0,05% Trypsin-EDTA.
- Kolben vugges forsigtigt for at dække alle celler, og kolben anbringes derefter i en inkubator (37 °C og 5% CO2) i højst 5 min. Bank på kulturkolben for at løsne cellerne helt, og neutralisere derefter trypsin ved at tilsætte 3 ml omentumkulturmedier.
- Cellesuspensionen blandes ved pipettering, og suspensionen overføres derefter til et 15 ml konisk rør. Centrifuger suspensionen i 5 minutter ved 1.200 x g ved 24 °C. Supernatanten fjernes og cellepelletsen resuspenderes i 6 ml frisk omentumkulturmedium.
- Tæl cellerne ved hjælp af et hæmacytometer. Fortynd cellesuspensionen til mindst 100.000 celler pr. 100-200 μL suspension. Dette er mængden af injektion i hvert skåret stykke omentum.
- Overfør et passende antal celler til en ny dyrkningskolbe for at fortsætte cellepassagen.
3. Injektion af ovariecancerceller
- Brug en 1 ml sprøjte til at trække cellesuspensionen op, og sæt derefter en 26-G kanyle på. Træk ikke cellesuspensionen op med nålen, da dette kan fragmentere cellerne.
- Brug små kirurgiske tang til at hente et stykke skåret omentum. Overfør omentum til en separat steril arbejdsskål for at lette injektionen. Gennembor forsigtigt omentum med nålespidsen og injicer en lille mængde cellesuspension i vævet (figur 2C).
- Gentag injektionen over flere områder af omentum til et samlet volumen på mindst 100 μL eller 100.000 celler. Bemærk, at meget af cellesuspensionen kan synes at samle sig omkring prøven. Hvis der er bekymring med hensyn til injektionens kvalitet, skal du gentage injektionen eller injicere et større volumen cellesuspension i prøven.
- De injicerede omentumprøver returneres i hvert hul i en kulturplade med 24 brønde. Vær opmærksom på, at mængden af omentumkulturmedier er til et niveau, der dækker omentum uden at lade det flyde. Pladen håndteres forsigtigt og anbringes i en inkubator (37 °C og 5 % CO2).
- VALGFRIT: Brug Matrigel (kældermembranmatrix) til at suspendere omentumvæv i en fast matrix for at muliggøre lettere injektion og mere koncentreret cellesuspensionslevering.
- Kældermembranmatrixen optøes ved 4 °C og blandes i forholdet 1:1 med omentumkulturmedier umiddelbart før brug. Opbevar kældermembranmatrixblandingen på is eller ved 4 °C indtil injektion. Fyld tomme brønde med nok kældermembranmatrixblanding til at nedsænke et skåret stykke omentum.
- Anbring prøver i kældermembranmatrixblandingen, og anbring derefter 24 brøndkulturpladen i en inkubator (37 °C og 5% CO2) i 20 minutter. Når blandingen er størknet, fortsættes injektionen som beskrevet ovenfor.
- Bekræft vellykket injektion ved hjælp af fluorescerende billeddannelse. Sørg for, at en stribe fluorescerende signal visualiseres på injektionsstederne (figur 2D). Bemærk, at det faktiske antal celler, der er knyttet til omentum efter injektion, er uforudsigeligt.
4. Samkultur af humane omentum og ovariecancerceller
- Skift medie hver 48-72 timer ved at tilføje 500-2000 μL friske omentumkulturmedier. Du må ikke pipettere medier direkte oven på omentumvæv, da dette kan fortrænge kræftceller. Bemærk, at hvis mediefarven bliver gul, skal du ændre mediet.
BEMÆRK: Hyppigheden af medieskift afhænger af mængden af anvendte medier og kræftcellevækstens bane. Når kræftcellerne har podet omentum, er det ikke længere vigtigt, om omentumstykket flyder eller ej. - VALGFRIT: Hvis der blev anvendt en kældermembranmatrix, ville matrixen typisk være opløst på tidspunktet for den første medieændring.
- Overvåg væksten af tumorer i æggestokkene ved hjælp af fluorescerende billeddannelse. Hyppigheden af billeddannelse er efter efterforskerens skøn. Forvent tegn på små tumorer med ca. 14 dage (figur 3A-C). Resultaterne kan variere afhængigt af injektionens kvalitet.
- Afslut eksperimentet baseret på eksperimentets slutpunkt.
BEMÆRK: Tumorvækst og integritet af omentumvæv er blevet observeret de sidste 50 dage.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Vellykket etablering af ovariecancerceller i omentumprøver var tydelig omkring dag 14 (figur 3A-C). Mindst 24 replikater blev forberedt og injiceret pr. indsamlet prøve for at muliggøre yderligere eksperimenter. Tumorvækst blev overvåget ved at tage fluorescerende billeder (figur 3D, E). Billeder skulle fortolkes omhyggeligt, da et monolag af kræftceller også voksede i bunden af hver brønd, der ikke var fastgjort til omentum. Vi foretrak at tage billeder af omentum, da den blev suspenderet i medier for at undgå overlappende fluorescerende signaler med kræftcellens monolag.
Fraværet af et fluorescerende signal ved dag 14 kan betragtes som mislykkede injektioner. Det blev observeret, at kræftcellerne oprindeligt spredte sig ud over overfladen af omentum i løbet af de første 7 dage, men over tid samledes de for at danne tumorer (figur 3A-D). Et surrogatmål for tumorbyrden mellem prøverne var den hastighed, hvormed omentumkulturmedier skiftede farve fra rød til gul (figur 3F). Vi brugte fluorescerende billeddannelse, histologisk gennemgang og grov inspektion for at bekræfte tumorvækst og omental vævslevedygtighed efter 50 dages samkultur (figur 4).
Figur 1: Illustration af generelle trin i protokollen. (A) Trin 1: Forberedelse af omentum; B) Trin 2: injektion af kræftceller (C) Trin 3: etablering af kræftcelle-omentum mikromiljø. (Figur udarbejdet i BioRender.com). Klik her for at se en større version af denne figur.
Figur 2: Forberedelse og injektion af kræftceller i omentum . (A) Omentum skæres i stykker på 1x1 cm. (B) Hvert stykke anbringes i en brønd med en plade med 24 brønde og dækkes med 500 μL medier. (C) Injektion af kræftceller i omentumstykket. (D) En stribe fluorescerende kræftceller observeres efter injektion. Klik her for at se en større version af denne figur.
Figur 3: Repræsentative billeder efter 14 og 25 dages samkultur. (A-C) Repræsentative billeder efter 14 dages samkultur: (A) fase, (B) mCherry-kanal, (C) fusioneret. (D-E) Repræsentative billeder efter 25 dages samkultur. (F) Ændring i mediefarve fra lyserød til gul er en indikation af vellykket kræftcelleinjektion og etablering af samkultur. Klik her for at se en større version af denne figur.
Figur 4: Bruttomorfologi og farvning af hæmatoxylin og eosin (H&E). (A,B) Repræsentativ bruttomorfologi for cokulturer på dag 50; pile peger på vækststeder for mCherry+ ovariecancerceller. (C,D) Repræsentativ H&E-farvning af co-kulturer på dag 50. Klik her for at se en større version af denne figur.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Ved hjælp af denne protokol blev en præklinisk model af peritoneal carcinomatose til ovariecancer udviklet ved hjælp af en kombination af grundlæggende in vitro og ex vivo teknikker. En progressiv tumorvækst blev observeret over 50 dages co-kultur efter såning af omentumprøver med mCherry + OCSC1-F2 humane ovariecancerceller. Denne metode blev udviklet og optimeret på tværs af flere eksperimentelle forsøg ved hjælp af forskellige omentumprøver. Vellykket tumorvækst afhang af kvaliteten af omentum, kræftcellernes levedygtighed og effektiviteten af injektionen. I denne rapport brugte vi kun mCherry+ OCSC1-F2-celler og mCherry+ R182 humane ovariecancerlinjer, der tidligere er rapporteret i flere publikationer 12,15,16,17,18,19,20,21,22. Ved anvendelse af disse to cellelinjer med forskellige fordoblingstider (16 timer for OCSC1-F2 og 36 timer for R182) blev der konstateret en forskel i tiden til at opnå logaritmisk vækst i det omentale væv. Ikke desto mindre lykkedes det os at etablere begge cellelinjer i samkultursystemet.
Effektiv kommunikation mellem efterforskere, forskningskoordinatorer og kirurgiske hold var afgørende for indsamling og behandling af omentumprøver. Efterforskeren identificerede protokolkandidater, forskningskoordinatorerne indhentede samtykke fra patienter før operationen, og efterforskeren indsamlede prøverne fra operationsstuen. På grund af denne arbejdsgang måtte investigators tidsplan være fleksibel, da mange patientsidede faktorer, der påvirkede indsamlingen, var uforudsigelige (f.eks. Operation annulleret, operationstid ændret, utilstrækkelig eller ingen omentum fjernet). Direkte visualisering og udvælgelse af væv fra operationsstuen sikrede prøveintegritet, kirurgisk sterilitet og rettidig behandling. Oprindeligt blev prøveindsamling delegeret til forskningskoordinatorer; Efter at nogle få prøver blev indsamlet, bemærkede vi imidlertid, at tiden til behandling var forsinket (dvs. >4 timer), og kvaliteten af Omentum var groft ringere (f.eks. Væv var i stykker). I et eksperimentelt forsøg blev omentalvæv opbevaret ved 4 °C i 48 timer før injektion, fordi kræftceller ikke var klar i tide. Lignende tumorvækst blev stadig observeret, men denne sekvens blev ikke gentaget, da temperaturændringer vides at påvirke tumormikromiljøet (TME).
Før prøveindsamling var det vigtigt at have tilstrækkeligt sammenflydende kræftceller i henhold til operationsplanen. Da antallet af prøver indsamlet hver måned varierede, blev aktive kulturer af ovariecancerceller ikke altid opretholdt. De frosne celler blev optøet mindst 1 uge i forvejen, belagt ved hjælp af en standardprotokol og derefter passeret cellerne mindst én gang for at sikre levedygtighed. De cellelinjer, der blev anvendt i denne protokol, var relativt modstandsdygtige; Vi stødte dog stadig på tilfælde, hvor celler ikke var kommet sig på operationsdagen og ikke kunne injiceres. I denne undersøgelse var der intet forsøg på at injicere kræftceller, der var mindre end 50% sammenflydende. Efterfølgende forsinkelser relateret til celleforberedelse blev afbødet ved at bruge god steril teknik og opdele celler i forhold for at opretholde sammenløb afhængigt af den forventede prøveindsamlingsplan. Vi begrænsede protokollen til kun to fluorescerende mærkede kræftcellelinjer, men det er vigtigt at bemærke, at andre etablerede kræftcellelinjer eller primære kræftceller uden fluorescerende proteiner også kunne udnyttes.
Endelig var tumorvæksthastigheden korreleret med sammenløbet af kræftceller ved siden af og inden for adipocytter umiddelbart efter injektion. Dette blev bestemt ved at tage fluorescerende billeder af alle omentumprøver efter injektion. Sammenlignet med tumorcelleinokulation af faste organer eller subkutant væv var injektion af kræftceller i omentalvæv mere udfordrende. Den løse struktur og fede konsistens af omentum forhindrer vævet i effektivt at holde volumener af cellesuspension uden at lække. Når en mindre nål (dvs. 30 G eller smallere) blev brugt til injektion, var der bekymring for cellefragmentering, da celleproliferation blev reduceret. Vi testede forskellige injektionsteknikker, cellenumre og cellesuspensionsvolumener og fandt konsistente resultater med protokollen beskrevet ovenfor. Samtidig anerkender vi, at sådanne variationer i protokollen sandsynligvis stadig vil give lignende resultater i betragtning af cellernes ondartede karakter. Tilsætningen af Matrigel gjorde injektionstrinnet lettere, da den ekstracellulære matrix holdt cellesuspensionen bedre; Denne metode er imidlertid dyrere og producerede ikke konsekvent en højere tumorbyrde i prøverne. Samlet set var det sjældent, at nogen af omentumprøverne ikke voksede tumorer, men antallet af tumorer og væksthastigheden varierede.
Denne model simulerede et kendetegn ved ovariecancertumorigenese ved at replikere tidlig metastase til fedtrige peritoneale væv. Denne protokol tillader variation uden nødvendige færdigheder, er let at replikere og genererer et system med potentiel translationel værdi. Sammenlignet med eksisterende in vitro- og ex vivo-modeller i ovariecancer kombinerer metoden beskrevet her flere teknikker til at producere en model, der bevarer tumorarkitektur og TME over en lang levetid. Derudover observerede vi, at når en omentumprøve med flere tumorer blev overført til en ny brønd og dyrket med kræftfri omentum (dvs. ikke injiceret), blev det naive omentum podet med kræftceller inden for 7 dage. Dette fund tyder på, at de replikerede tumorer bevarer metastatisk potentiale via epitel-mesenkymal overgang. Vi identificerede ikke nogen lignende modeller for kræft i æggestokkene i litteraturen, der dyrkede vævsbiopsier i længere perioder. Denne tilgang understøttes af et tidligere fund af, at mesothelceller isoleret fra museomentum kunne dyrkes i mere end 30 passager efter indsamling23.
Modellen beskrevet i denne undersøgelse kan anvendes til yderligere at forstå effekten af direkte interaktion mellem ovariecancerceller og cellerne i det fedtrige omentum. Kræftceller kan adskilles fra omentumvævene og opnås til transkriptomisk eller immunhistokemi (IHC) analyse. Derudover kan celler anvendes til lægemiddelresponsundersøgelser.
De primære begrænsninger ved denne model er, at antallet af tumorer, tumorvæksthastighed og placering af tumorer var uforudsigelige. Manglende standardisering og variation på tværs af stikprøver kan begrænse anvendelsen af denne model. Vi fremsatte også flere bemærkninger, som vil kræve yderligere undersøgelse under udarbejdelsen af denne protokol. For eksempel var "kontrol" replikaterne i et eksperiment faktisk ikke kræftfri, da patienten efterfølgende blev diagnosticeret med omental mikrometastase; Imidlertid forblev de ikke-injicerede tumorer levedygtige i hele forsøgsperioden. Fremtidige anvendelser af denne model vil omfatte molekylære undersøgelser af TME under tidlig tumorgenese, manipulation af TME ved injektion af immunceller og lægemiddelresponsundersøgelser. Sammenfattende mener vi, at den prækliniske model, der er beskrevet her, vil føje til repertoiret af eksisterende forskningsværktøjer og hjælpe med at belyse molekylære mekanismer for TME i kræft i æggestokkene.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne har intet at afsløre.
Acknowledgments
Denne undersøgelse er delvist finansieret af The Janet Burros Memorial Foundation. Vi anerkender patienterne og Karmanos Cancer Institute Gynecologic Oncology Department for indsamling af omentumprøver. Vi anerkender også Biobank og Correlative Sciences Core på Karmanos Cancer Institute for koordinering af patientrekruttering og forberedelse af patologiske dias. Biobank og Correlative Sciences Core støttes delvist af NIH Center-bevilling P30 CA22453 til Karmanos Cancer Institute ved Wayne State University.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 0.05% Trypsin-EDTA (1x) | Gibco | 25300054 | |
| 1 mL Insulin Syringe with 26 G detachable needle | BD | 329652 | |
| 10 mL Serological Pipets | CELLTREAT | 229010B | |
| 100 mm Tissue Culture Dish | Fisherbrand | FB012924 | |
| 15 mL Centrifuge Tube | CELLTREAT | 229411 | |
| 24 Well Cell Culture Plate | Costar | 3524 | |
| 50 mL Centrifuge Tube | CELLTREAT | 229421 | |
| 75 cm2 Tissue Culture Flask | CELLTREAT | 229341 | |
| Corning Cell Counter | Corning | 9819000 | |
| Cytation 5 imager | Biotek | ||
| DMEM/F12 (1:1) (1x), +L-Glutamine, +2.438 g/L Sodium Bicarbonate | Gibco | 11320033 | |
| Fetal Bovine Serum, Qualified | Gibco | 1043028 | |
| Matrigel | Corning | 356230 | Basement membrane matrix |
| No. 10 Stainless Steel Disposable Scalpel | Integra-Miltex | 4410 | |
| Penicillin Streptomycin | Gibco | 15140122 | |
| Phosphate Buffered Saline, pH 7.4 (1x) | Gibco | 10010023 | |
| Revolve microscope | Echo |
References
- Siegel, R. L., Miller, K. D., Wagle, N. S., Jemal, A.
- Berek, J. S., Renz, M., Kehoe, S., Kumar, L., Friedlander, M. Cancer of the ovary, fallopian tube, and peritoneum: 2021 update. Int J Gynaecol Obstet. 155 (Suppl 1), 61-85 (2021).
- Ledermann, J. A., et al. Newly diagnosed and relapsed epithelial ovarian carcinoma: ESMO clinical practice guidelines for diagnosis, treatment and follow-up. Ann Oncol. 24 (Suppl 6), vi24-32 (2013).
- Jelovac, D., Armstrong, D. K. Recent progress in the diagnosis and treatment of ovarian cancer. CA Cancer J Clin. 61 (3), 183-203 (2011).
- Morgan, R. J. Jr, et al. Ovarian cancer. Clinical practice guidelines in oncology. J Natl Compr Canc Netw. 6 (8), 766-794 (2008).
- Nieman, K. M., et al. Adipocytes promote ovarian cancer metastasis and provide energy for rapid tumor growth. Nat Med. 17 (11), 1498-1503 (2011).
- Motohara, T., et al. An evolving story of the metastatic voyage of ovarian cancer cells: cellular and molecular orchestration of the adipose-rich metastatic microenvironment. Oncogene. 38 (16), 2885-2898 (2019).
- Di Nicola, V. Omentum a powerful biological source in regenerative surgery. Regen Ther. 11, 182-191 (2019).
- Meza-Perez, S., Randall, T. D.
- Liu, M., Silva-Sanchez, A., Randall, T. D., Meza-Perez, S. Specialized immune responses in the peritoneal cavity and omentum. J Leukoc Biol. 109 (4), 717-729 (2021).
- Lee, W., et al. Neutrophils facilitate ovarian cancer premetastatic niche formation in the omentum. J Exp Med. 216 (1), 176-194 (2019).
- Cardenas, C., et al. Adipocyte microenvironment promotes Bclxl expression and confers chemoresistance in ovarian cancer cells. Apoptosis. 22 (4), 558-569 (2017).
- Wu, Q., et al. Cancer-associated adipocytes: key players in breast cancer progression. J Hematol Oncol. 12 (1), 95 (2019).
- Zhang, Z., Scherer, P. E. Adipose tissue: The dysfunctional adipocyte - a cancer cell's best friend. Nat Rev Endocrinol. 14 (3), 132-134 (2018).
- Alvero, A. B., et al. TRX-E-002-1 Induces c-Jun-dependent apoptosis in ovarian cancer stem cells and prevents recurrence in vivo. Mol Cancer Ther. 15 (6), 1279-1290 (2016).
- Alvero, A. B., et al. Novel approach for the detection of intraperitoneal micrometastasis using an ovarian cancer mouse model. Sci Rep. 7, 40989 (2017).
- Craveiro, V., et al. Phenotypic modifications in ovarian cancer stem cells following Paclitaxel treatment. Cancer Med. 2 (6), 751-762 (2013).
- Sumi, N. J., et al. Murine model for non-invasive imaging to detect and monitor ovarian cancer recurrence. J Vis Exp. (93), e51815 (2014).
- Agarwal, R., et al. Macrophage migration inhibitory factor expression in ovarian cancer. Am J Obstet Gynecol. 196 (4), 348.e1-348.e5 (2007).
- Kelly, M. G., et al. TLR-4 signaling promotes tumor growth and paclitaxel chemoresistance in ovarian cancer. Cancer Res. 66 (7), 3859-3868 (2006).
- Li, J., et al. CBX7 binds the E-box to inhibit TWIST-1 function and inhibit tumorigenicity and metastatic potential. Oncogene. 39 (20), 3965-3979 (2020).
- Tedja, R., et al. Generation of stable epithelial-mesenchymal hybrid cancer cells with tumorigenic potential. Cancers (Basel). 15 (3), 15030684 (2023).
- Dauleh, S., et al. Characterisation of cultured mesothelial cells derived from the murine adult omentum. PLoS One. 11 (7), e0158997 (2016).
