Summary
Detta protokoll beskriver upprättandet av en tredimensionell (3D) ex vivo-modell av cancercell-omentum-interaktion. Modellen ger en plattform för att belysa pro-tumörmekanismer inom fettnischen och för att testa nya terapier.
Abstract
Äggstockscancer är den dödligaste gynekologiska maligniteten. Bukhinnan spelar en nyckelroll för att tillhandahålla en stödjande mikromiljö för metastaserande äggstockscancerceller samt immunmodulerande signaler som möjliggör tumörtolerans. Vi har dock begränsade modeller som efterliknar samspelet mellan äggstockscancerceller och fettrika vävnader. För att ytterligare förstå de cellulära och molekylära mekanismerna genom vilka omentum ger en pro-tumoral mikromiljö, utvecklade vi en unik 3D ex vivo-modell av cancercell-omentuminteraktion. Med hjälp av humant omentum kan vi odla äggstockscancerceller i denna fettrika mikromiljö och övervaka de faktorer som är ansvariga för tumörtillväxt och immunreglering. Förutom att tillhandahålla en plattform för studier av denna fettrika tumörmikromiljö, ger modellen en utmärkt plattform för utveckling och utvärdering av nya terapeutiska metoder för att rikta in sig på metastaserande cancerceller i denna nisch. Den föreslagna modellen är lätt att generera, billig och tillämpbar på translationella undersökningar.
Introduction
Äggstockscancer är den dödligaste gynekologiska maligniteten i världen1. Livstidsrisken för att utveckla denna cancer är ungefär 1 på 70, med medianåldern för diagnos vid 63 år2. Primära ovariella maligniteter klassificeras histologiskt som antingen epitelial eller icke-epitel. Epitelial äggstockscancer (EOC) representerar över 90 % av tumörerna, och den vanligaste subtypen är höggradig serös cancer (HGSC), som står för cirka 70-80 % av EOC. För närvarande finns det inga effektiva screeningmetoder för att upptäcka sjukdom tidigt. Så de flesta patienter diagnostiseras i ett framskridet stadium (dvs. Fédération Internationale de Gynécologie et d'Obstétrique [FIGO] stadium III eller IV) efter att cancern har spridit sig i bukhålan2.
Standardbehandling i första linjen är cytoreduktiv kirurgi för att avlägsna all synlig makroskopisk sjukdom, följt av adjuvant platinabaserad kemoterapi för att förstöra eventuell kvarvarande mikroskopisk sjukdom. Även om det har gjorts många framsteg inom behandling av äggstockscancer under de senaste två decennierna, kommer cirka 70 % av patienterna med avancerad sjukdom att återfalla inom 3 år efter behandling3. Med tanke på den generellt dåliga prognosen för dessa patienter syftar pågående och framtida translationella forskningsinsatser inom EOC till att identifiera biomarkörer för tidig upptäckt, förhindra metastaser, förbättra nuvarande terapier för att undvika resistens och utveckla nya individanpassade cancerbehandlingar.
Generaliserad metastasering i bukhålan och dess associerade kemoresistens är två av de största begränsningarna för att förbättra behandlingen av patienter med äggstockscancer 4,5. Bukhinnan, en fet förklädesliknande struktur som hänger ner från magsäcken över tarmarna, är en huvudplats för äggstockscancermetastaser 6,7. Förutom sin funktion som en fysisk barriär har bukhinnan visat sig ha regenerativa och angiogena förmågor och ha immunaktiviteter, som tillsammans främjar vaskularisering, påskyndar sårläkning och begränsar infektion8. Den innehåller en hög koncentration av stamceller som kan differentiera till olika celltyper och kan hjälpa till att reparera skadade vävnader. Bukhinnan kan bli inflammerad som svar på skada eller infektion, vilket utlöser migrering av immunceller till platsen för skadan9. Dessa immunceller frigör tillväxtfaktorer och andra molekyler som hjälper till att främja reparation och regenerering av skadad vävnad. Immunceller, såsom makrofager, lymfocyter och plasmaceller, lokaliserade i omentum är strukturer som kallas "mjölkfläckar", som är ansvariga för att upptäcka och attackera patogener och reglera peritoneal immunitet. Omentum har också visat sig spela en roll för att inducera immuntolerans10, vilket är immunsystemets förmåga att tolerera självantigener och inte attackera friska vävnader. Samma immunrelaterade aktiviteter är dock också involverade i patologiska svar, såsom tillväxt av omentala tumörer, metastasering och undflyende immunövervakning 9,11. Tidigare studier från vårt laboratorium och andra har visat en unik och aktiv roll för fettmikromiljön i hämningen av antitumörimmunsvar och i förvärvet av kemoresistens12,13,14. Tyvärr har vi begränsad information om de cellulära och molekylära mekanismerna genom vilka omentum ger en pro-tumoral mikromiljö.
För att bättre förstå interaktionerna mellan cancerceller och omentum utvecklades ett 3D-odlingssystem bestående av humana äggstockscancerceller och explantat av omentum från patienter. Protokollet som beskrivs här representerar en ny ex vivo-modell av peritoneal karcinomatos. Denna modell efterliknar den naturliga utvecklingen av äggstockscancertumörgenes i denna fettrika vävnad. Den föreslagna modellen är lätt att generera, billig och potentiellt tillämpbar på translationella undersökningar inom äggstockscancerforskning.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Följande forskningsprotokoll har granskats och godkänts av Wayne State University Institutional Review Board (IRB). Informerat samtycke inhämtades från alla patienter före operationen. Figur 1 illustrerar de tre allmänna stegen i detta protokoll.
1. Beredning av vävnad från människans omentum
- Bered odlingssubstrat för omentum (DMEM/F12 + 10 % fetalt bovint serum + 1 % penicillin-streptomycin) och förvara vid 4 °C. Fördela 30-40 ml av detta medium i ett sterilt 50 ml koniskt rör eller kirurgisk provbehållare.
- Skaffa kirurgiska prover från omental biopsi eller omentektomikirurgi. Sänk ner det sterila provet i odlingssubstrat för omentum omedelbart efter avlägsnandet i operationssalen. Om arbetsflödet inte tillåter detta, placera provet i omentumodlingsmedia så snart som möjligt. Överför provet genom att lägga det på is och förvara vid 4 °C tills bearbetningen.
OBS: Storleken på det borttagna omentumprovet avgör mängden användbar vävnad. - Bearbeta omentumprovet inom 1-2 timmar efter insamlingen med hjälp av en laminär flödeshuva. Se till att alla material och verktyg är sterila eller steriliserade.
- Ta ut bukhindret ur uppsamlingsbehållaren och överför det till en 100 mm stor odlingsform. Sänk ner provet i 1x fosfatbuffrad koksaltlösning (1x PBS) och tvätta försiktigt provet för att ta bort eventuella blodproppar eller skräp.
- Skär vävnaden i bitar (0,5 cm x 0,5 cm eller 100-200 mg; Figur 2A) Använd antingen en liten kirurgisk sax eller en 10-15 mm skalpell. Använd en liten kirurgisk pincett för att manipulera vävnaden och undvika att krossa bukhinnan. Om en energianordning användes för att kirurgiskt ta bort omentumprovet, undvik att använda den förvrängda vävnaden vid den förseglade kanten.
- Placera varje bit av det skurna omentumet i enskilda brunnar på en odlingsplatta med 24 brunnar och fyll brunnarna med 500 μl odlingssubstrat för omentum eller till en volym som är tillräcklig för att täcka omentumet utan att låta omentumdelen flyta över brunnsgolvet (figur 2B).
- Förvara omentumbitarna i färskt odlingssubstrat vid 4 °C tills de är klara för injektion.
2. Beredning av äggstockscancerceller
- Humana äggstockscancerceller odlas i en 75 cm 2 odlingskolv vid 37 °C och 5 % CO2 till minst 75 % sammanflöde på dagen för omentumsamlingen.
OBS: Detta protokoll använder mCherry-positiva OCSC1-F2 humana äggstockscancerceller som tidigare beskrivits15,16,17,18. Den kan modifieras till vilken cancercellinje som helst som är märkt med en fluorescenssignal. - Förbered cellerna inuti en huva med laminärt flöde omedelbart efter insamling av omentumprovet. Se till att alla material och verktyg är sterila eller steriliserade.
- Tillsätt 10 ml steril 1x PBS till odlingskolven och tvätta cellerna genom att försiktigt gunga kolven. Ta bort 1x PBS och tillsätt sedan 3 ml 0,05 % trypsin-EDTA.
- Vispa odlingskolven försiktigt så att alla celler täcks och placera sedan kolven i en inkubator (37 °C och 5 % CO2) i högst 5 minuter. Knacka på odlingskolven för att helt lossa cellerna och neutralisera sedan trypsin genom att tillsätta 3 ml odlingssubstrat för omentum.
- Blanda cellsuspensionen genom pipettering och överför sedan suspensionen till ett 15 ml koniskt rör. Centrifugera suspensionen i 5 minuter vid 1 200 x g vid 24 °C. Ta bort supernatanten och återsuspendera cellpelleten i 6 ml färskt odlingssubstrat för omentum.
- Räkna cellerna med hjälp av en hemacytometer. Späd cellsuspensionen till minst 100 000 celler per 100–200 μl suspension. Detta är injektionsvolymen i varje skuren bit av omentum.
- Överför ett lämpligt antal celler till en ny odlingskolv för att fortsätta cellpassagen.
3. Injektion av äggstockscancerceller
- Använd en 1 ml spruta för att dra upp cellsuspensionen och fäst sedan en 26 G nål. Dra inte upp cellsuspensionen med nålen, eftersom det kan fragmentera cellerna.
- Använd en liten kirurgisk pincett för att plocka upp en bit av den skurna omentum. Överför omentum till en separat, steril arbetsskål för att underlätta injektionen. Stick försiktigt hål i bukhinnan med nålspetsen och injicera en liten volym cellsuspension i vävnaden (Figur 2C).
- Upprepa injektionen över flera områden av omentum till en total volym på minst 100 μL eller 100 000 celler. Observera att en stor del av cellsuspensionen kan tyckas samlas runt provet. Om det finns oro för kvaliteten på injektionen, upprepa injektionen eller injicera en större volym cellsuspension i provet.
- Sätt tillbaka de injicerade omentumproverna i varje brunn på en odlingsplatta med 24 brunnar. Observera att volymen av omentumodlingsmedia är på en nivå som täcker omentum utan att låta den flyta. Hantera plattan försiktigt och placera den i en inkubator (37 °C och 5 % CO2).
- VALFRITT: Använd Matrigel (basalmembranmatris) för att suspendera omentumvävnad i en fast matris för att möjliggöra enklare injektion och mer koncentrerad cellsuspensionstillförsel.
- Tina basalmembranets matris vid 4 °C och blanda i förhållandet 1:1 med omentumodlingssubstrat omedelbart före användning. Förvara matrisblandningen av basalmembran på is eller vid 4 °C fram till injektion. Fyll tomma brunnar med tillräckligt med basalmembranmatrisblandning för att sänka ner en skuren bit av omentum.
- Placera proverna i basalmembranmatrisblandningen och placera sedan odlingsplattan med 24 brunnar i en inkubator (37 °C och 5 % CO2) i 20 minuter. När blandningen har stelnat, fortsätt med injektionen enligt beskrivningen ovan.
- Bekräfta lyckad injektion med hjälp av fluorescerande avbildning. Se till att en strimma av fluorescerande signal visualiseras vid injektionsställena (Figur 2D). Observera att det faktiska antalet celler som är bundna till omentum efter injektion är oförutsägbart.
4. Samodling av humana celler från buk- och äggstockscancer
- Byt medium var 48-72:e timme genom att tillsätta 500-2000 μL färska omentumodlingsmedier. Pipettera inte media direkt ovanpå omentumvävnaden, eftersom detta kan tränga undan cancerceller. Observera att om mediefärgen blir gul ska du byta ut mediet.
OBS: Frekvensen av mediebyte beror på volymen av media som används och banan för cancercelltillväxt. När cancercellerna har sått fröet till omentum är det inte längre viktigt om omentumbiten flyter eller inte. - VALFRITT: Om en basalmembranmatris användes, skulle matrisen vanligtvis vara upplöst vid tidpunkten för det första mediebytet.
- Övervaka tillväxten av äggstockscancertumörer med hjälp av fluorescerande avbildning. Bildfrekvensen bestäms av utredaren. Förutse tecken på små tumörer med cirka 14 dagar (Figur 3A-C). Resultaten kan variera beroende på injektionens kvalitet.
- Avsluta experimentet baserat på experimentslutpunkten.
OBS: Tumörtillväxt och integritet hos omentumvävnad har observerats under de senaste 50 dagarna.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Framgångsrik etablering av äggstockscancerceller i omentumprover var uppenbar omkring dag 14 (Figur 3A-C). Minst 24 replikat bereddes och injicerades per insamlat prov för att möjliggöra ytterligare experiment. Tumörtillväxten övervakades genom att ta fluorescerande bilder (Figur 3D,E). Bilderna måste tolkas noggrant eftersom ett monolager av cancerceller också växte på botten av varje brunn som inte var fäst vid bukhinnan. Vi föredrog att ta bilder av bukhinnan när den var suspenderad i media för att undvika överlappande fluorescerande signaler med cancercellens monolager.
Frånvaron av en fluorescerande signal vid dag 14 kan betraktas som misslyckade injektioner. Det observerades att cancercellerna till en början spred sig ut över ytan av bukhinnan under de första 7 dagarna, men med tiden samlades de för att bilda tumörer (Figur 3A-D). Ett surrogatmått för tumörbörda mellan proverna var hur snabbt omentumodlingsmedia ändrade färg från rött till gult (Figur 3F). Vi använde fluorescerande avbildning, histologisk granskning och grov inspektion för att bekräfta tumörtillväxt och omental vävnadsviabilitet efter 50 dagars samodling (Figur 4).
Figur 1: Illustration av allmänna steg i protokollet. A) Steg 1: Beredning av omentum. B) Steg 2: injektion av cancerceller. (C) Steg 3: Etablering av mikromiljön mellan cancerceller och omentum. (Figur utarbetad BioRender.com). Klicka här för att se en större version av denna figur.
Figur 2: Beredning och injektion av cancerceller i bukhinnan . (A) Omentum skärs i 1x1 cm stora bitar. (B) Varje del placeras i en brunn med 24 brunnar och täcks med 500 μL media. (C) Injektion av cancerceller i omentumbiten. (D) En strimma av fluorescerande cancerceller observeras efter injektion. Klicka här för att se en större version av denna figur.
Figur 3: Representativa bilder efter 14 och 25 dagars samkultur. (A-C) Representativa bilder efter 14 dagars samkultur: (A) fas, (B) mCherry-kanal, (C) sammanslagna. (D-E) Representativa bilder efter 25 dagars samkultur. (F) Förändring av medias färg från rosa till gul är en indikation på framgångsrik injektion av cancerceller och etablering av samkultur. Klicka här för att se en större version av denna figur.
Figur 4: Grov morfologi och färgning av hematoxylin och eosin (H&E). (A,B) Representativ bruttomorfologi för samkulturer vid dag 50; pilar pekar på tillväxtställen för mCherry+ äggstockscancerceller. (C,D) Representativ H&E-färgning av samkulturer på dag 50. Klicka här för att se en större version av denna figur.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Med hjälp av detta protokoll utvecklades en preklinisk modell av peritonealcancer för äggstockscancer med hjälp av en kombination av grundläggande in vitro- och ex vivo-tekniker. En progressiv tumörtillväxt observerades under 50 dagars samodling efter sådd av omentumprover med mCherry+ OCSC1-F2 humana äggstockscancerceller. Denna metod utvecklades och optimerades i flera experimentella försök med olika omentumprover. Framgångsrik tumörtillväxt berodde på kvaliteten på omentum, livskraften hos cancercellerna och effektiviteten av injektionen. I denna rapport använde vi endast mCherry+ OCSC1-F2-celler och mCherry+ R182 humana äggstockscancerlinjer som tidigare rapporterats i flera publikationer 12,15,16,17,18,19,20,21,22. Genom att använda dessa två cellinjer med olika fördubblingstider (16 timmar för OCSC1-F2 och 36 timmar för R182) noterades en skillnad i tiden för att uppnå logaritmisk tillväxt i den omentala vävnaden. Ändå lyckades vi etablera båda cellinjerna i samodlingssystemet.
Effektiv kommunikation mellan utredare, forskningssamordnare och kirurgiska team var avgörande för insamling och bearbetning av omentumprover. Utredaren identifierade protokollkandidater, forskningskoordinatorerna inhämtade samtycke från patienter före operationen och utredaren samlade in proverna från operationssalen. Med tanke på detta arbetsflöde var prövarens schema tvunget att vara flexibelt eftersom många patientsidiga faktorer som påverkade insamlingen var oförutsägbara (t.ex. operationen avbröts, operationstiden ändrades, otillräcklig eller ingen omentum avlägsnades). Direkt visualisering och urval av vävnader från operationssalen säkerställde provintegritet, kirurgisk sterilitet och snabb bearbetning. Till en början delegerades provinsamlingen till forskningssamordnare; Men efter att några prover hade samlats in noterade vi att tiden till bearbetning var försenad (dvs. >4 timmar) och kvaliteten på omentum var grovt sämre (t.ex. vävnaden var i bitar). I en experimentell studie förvarades omental vävnad vid 4 °C i 48 timmar före injektion eftersom cancercellerna inte var klara i tid. Liknande tumörtillväxt observerades fortfarande, men denna sekvens upprepades inte eftersom temperaturförändringar är kända för att påverka tumörens mikromiljö (TME).
Före provtagningen var det viktigt att ha tillräckligt sammanflytande cancerceller enligt operationsschemat. Eftersom antalet prover som samlades in varje månad varierade, bibehölls inte alltid aktiva kulturer av äggstockscancerceller. De frysta cellerna tinades upp minst 1 vecka i förväg, pläterades med ett standardprotokoll och passerade sedan cellerna minst en gång för att säkerställa livskraften. Cellinjerna som användes i detta protokoll var relativt motståndskraftiga; Vi stötte dock fortfarande på fall där celler inte hade återhämtat sig på operationsdagen och inte kunde injiceras. I denna studie gjordes inga försök att injicera cancerceller som var mindre än 50 % sammanflytande. Efterföljande förseningar relaterade till cellberedning mildrades genom att använda god steril teknik och dela celler i förhållanden för att upprätthålla sammanflödet beroende på det förväntade provtagningsschemat. Vi begränsade protokollet till endast två fluorescerande märkta cancercellinjer, men det är viktigt att notera att andra etablerade cancercellinjer eller primära cancerceller utan fluorescerande proteiner också kan användas.
Slutligen var tumörtillväxthastigheten korrelerad till sammanflödet av cancerceller intill och inom adipocyter omedelbart efter injektionen. Detta bestämdes genom att ta fluorescerande bilder av alla omentumprover efter injektionen. Jämfört med tumörcellsinokulering av solida organ eller subkutana vävnader var det mer utmanande att injicera cancerceller i omental vävnad. Den lösa strukturen och fettkonsistensen i omentum hindrar vävnaden från att effektivt hålla volymer av cellsuspension utan att läcka. När en mindre nål (d.v.s. 30 G eller smalare) användes för att injicera, fanns det oro för cellfragmentering eftersom cellproliferationen minskade. Vi testade olika injektionstekniker, cellantal och cellsuspensionsvolymer och fann konsekventa resultat med det protokoll som beskrivs ovan. Samtidigt är vi medvetna om att sådana variationer i protokollet sannolikt fortfarande kommer att ge liknande resultat med tanke på cellernas maligna natur. Tillsatsen av Matrigel gjorde injektionssteget lättare eftersom den extracellulära matrisen höll cellsuspensionen bättre; Denna metod är dock dyrare och gav inte konsekvent en högre tumörbörda i proverna. Sammantaget var det sällsynt att något av benhinneproverna inte växte tumörer, men antalet tumörer och tillväxthastigheten varierade.
Denna modell simulerade ett kännetecken för äggstockscancertumörgenes genom att replikera tidig metastasering till fettrika peritonealvävnader. Detta protokoll tillåter variation utan nödvändig skicklighet, är lätt att replikera och genererar ett system med potentiellt translationellt värde. Jämfört med befintliga in vitro - och ex vivo-modeller vid äggstockscancer kombinerar den metod som beskrivs här flera tekniker för att producera en modell som bibehåller tumörarkitektur och TME under en lång livslängd. Dessutom observerade vi att när ett omentumprov med flera tumörer överfördes till en ny brunn och odlades med cancerfritt omentum (dvs. inte injicerades), såddes det naiva omentumet med cancerceller inom 7 dagar. Detta fynd tyder på att de replikerade tumörerna behåller metastaserande potential via epitel-mesenkymal övergång. Vi identifierade inga liknande äggstockscancermodeller i litteraturen som odlade vävnadsbiopsier under längre tidsperioder. Detta tillvägagångssätt stöds av ett tidigare fynd att mesotelceller isolerade från musomentum kunde odlas för mer än 30 passager efter samling23.
Modellen som beskrivs i denna studie kan användas för att ytterligare förstå effekten av direkt interaktion mellan äggstockscancerceller och cellerna i det fettrika omentumet. Cancerceller kan separeras från omentumvävnaderna och erhållas för transkriptomisk eller immunhistokemisk (IHC) analys. Dessutom kan celler användas för läkemedelsresponsstudier.
De primära begränsningarna med denna modell är att antalet tumörer, tumörtillväxthastigheten och placeringen av tumörer var oförutsägbara. Brist på standardisering och variation mellan urval kan begränsa tillämpningen av denna modell. Vi gjorde också flera observationer som kommer att kräva ytterligare granskning under utvecklingen av detta protokoll. Till exempel var "kontrollreplikaten" i ett experiment faktiskt inte cancerfria eftersom patienten senare diagnostiserades med omentala mikrometastaser; De icke-injicerade tumörerna förblev dock livskraftiga under hela experimentperioden. Framtida tillämpningar av denna modell kommer att omfatta molekylära studier av TME under tidig tumörbildning, manipulation av TME genom injicering av immunceller och undersökningar av läkemedelsrespons. Sammanfattningsvis tror vi att den prekliniska modell som beskrivs här kommer att utöka repertoaren av befintliga forskningsverktyg och bidra till att belysa de molekylära mekanismerna för TME vid äggstockscancer.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Författarna har inget att avslöja.
Acknowledgments
Denna studie är delvis finansierad av Janet Burros Memorial Foundation. Vi tackar patienterna och Karmanos Cancer Institute Gynecologic Oncology Department för insamling av omentumprover. Vi tackar också Biobank and Correlative Sciences Core vid Karmanos Cancer Institute för samordning av patientrekrytering och förberedelse av patologiglas. Biobank and Correlative Sciences Core stöds delvis av NIH Center grant P30 CA22453 till Karmanos Cancer Institute vid Wayne State University.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 0.05% Trypsin-EDTA (1x) | Gibco | 25300054 | |
| 1 mL Insulin Syringe with 26 G detachable needle | BD | 329652 | |
| 10 mL Serological Pipets | CELLTREAT | 229010B | |
| 100 mm Tissue Culture Dish | Fisherbrand | FB012924 | |
| 15 mL Centrifuge Tube | CELLTREAT | 229411 | |
| 24 Well Cell Culture Plate | Costar | 3524 | |
| 50 mL Centrifuge Tube | CELLTREAT | 229421 | |
| 75 cm2 Tissue Culture Flask | CELLTREAT | 229341 | |
| Corning Cell Counter | Corning | 9819000 | |
| Cytation 5 imager | Biotek | ||
| DMEM/F12 (1:1) (1x), +L-Glutamine, +2.438 g/L Sodium Bicarbonate | Gibco | 11320033 | |
| Fetal Bovine Serum, Qualified | Gibco | 1043028 | |
| Matrigel | Corning | 356230 | Basement membrane matrix |
| No. 10 Stainless Steel Disposable Scalpel | Integra-Miltex | 4410 | |
| Penicillin Streptomycin | Gibco | 15140122 | |
| Phosphate Buffered Saline, pH 7.4 (1x) | Gibco | 10010023 | |
| Revolve microscope | Echo |
References
- Siegel, R. L., Miller, K. D., Wagle, N. S., Jemal, A.
- Berek, J. S., Renz, M., Kehoe, S., Kumar, L., Friedlander, M. Cancer of the ovary, fallopian tube, and peritoneum: 2021 update. Int J Gynaecol Obstet. 155 (Suppl 1), 61-85 (2021).
- Ledermann, J. A., et al. Newly diagnosed and relapsed epithelial ovarian carcinoma: ESMO clinical practice guidelines for diagnosis, treatment and follow-up. Ann Oncol. 24 (Suppl 6), vi24-32 (2013).
- Jelovac, D., Armstrong, D. K. Recent progress in the diagnosis and treatment of ovarian cancer. CA Cancer J Clin. 61 (3), 183-203 (2011).
- Morgan, R. J. Jr, et al. Ovarian cancer. Clinical practice guidelines in oncology. J Natl Compr Canc Netw. 6 (8), 766-794 (2008).
- Nieman, K. M., et al. Adipocytes promote ovarian cancer metastasis and provide energy for rapid tumor growth. Nat Med. 17 (11), 1498-1503 (2011).
- Motohara, T., et al. An evolving story of the metastatic voyage of ovarian cancer cells: cellular and molecular orchestration of the adipose-rich metastatic microenvironment. Oncogene. 38 (16), 2885-2898 (2019).
- Di Nicola, V. Omentum a powerful biological source in regenerative surgery. Regen Ther. 11, 182-191 (2019).
- Meza-Perez, S., Randall, T. D.
- Liu, M., Silva-Sanchez, A., Randall, T. D., Meza-Perez, S. Specialized immune responses in the peritoneal cavity and omentum. J Leukoc Biol. 109 (4), 717-729 (2021).
- Lee, W., et al. Neutrophils facilitate ovarian cancer premetastatic niche formation in the omentum. J Exp Med. 216 (1), 176-194 (2019).
- Cardenas, C., et al. Adipocyte microenvironment promotes Bclxl expression and confers chemoresistance in ovarian cancer cells. Apoptosis. 22 (4), 558-569 (2017).
- Wu, Q., et al. Cancer-associated adipocytes: key players in breast cancer progression. J Hematol Oncol. 12 (1), 95 (2019).
- Zhang, Z., Scherer, P. E. Adipose tissue: The dysfunctional adipocyte - a cancer cell's best friend. Nat Rev Endocrinol. 14 (3), 132-134 (2018).
- Alvero, A. B., et al. TRX-E-002-1 Induces c-Jun-dependent apoptosis in ovarian cancer stem cells and prevents recurrence in vivo. Mol Cancer Ther. 15 (6), 1279-1290 (2016).
- Alvero, A. B., et al. Novel approach for the detection of intraperitoneal micrometastasis using an ovarian cancer mouse model. Sci Rep. 7, 40989 (2017).
- Craveiro, V., et al. Phenotypic modifications in ovarian cancer stem cells following Paclitaxel treatment. Cancer Med. 2 (6), 751-762 (2013).
- Sumi, N. J., et al. Murine model for non-invasive imaging to detect and monitor ovarian cancer recurrence. J Vis Exp. (93), e51815 (2014).
- Agarwal, R., et al. Macrophage migration inhibitory factor expression in ovarian cancer. Am J Obstet Gynecol. 196 (4), 348.e1-348.e5 (2007).
- Kelly, M. G., et al. TLR-4 signaling promotes tumor growth and paclitaxel chemoresistance in ovarian cancer. Cancer Res. 66 (7), 3859-3868 (2006).
- Li, J., et al. CBX7 binds the E-box to inhibit TWIST-1 function and inhibit tumorigenicity and metastatic potential. Oncogene. 39 (20), 3965-3979 (2020).
- Tedja, R., et al. Generation of stable epithelial-mesenchymal hybrid cancer cells with tumorigenic potential. Cancers (Basel). 15 (3), 15030684 (2023).
- Dauleh, S., et al. Characterisation of cultured mesothelial cells derived from the murine adult omentum. PLoS One. 11 (7), e0158997 (2016).
