Summary
Denne protokollen beskriver etableringen av en tredimensjonal (3D) ex vivo-modell for kreftcelle-omentum-interaksjon. Modellen gir en plattform for å belyse protumormekanismer innenfor fettnisjen og for å teste nye terapier.
Abstract
Eggstokkreft er den dødeligste gynekologiske maligniteten. Omentum spiller en nøkkelrolle i å gi et støttende mikromiljø til metastatiske eggstokkreftceller, samt immunmodulerende signaler som tillater tumortoleranse. Vi har imidlertid begrensede modeller som tett etterligner samspillet mellom eggstokkreftceller og fettrikt vev. For ytterligere å forstå de cellulære og molekylære mekanismene som omentumet gir et protumoralt mikromiljø, utviklet vi en unik 3D ex vivo-modell for kreftcelle-omentum-interaksjon. Ved hjelp av humant omentum er vi i stand til å dyrke eggstokkreftceller i dette fettrike mikromiljøet og overvåke faktorene som er ansvarlige for tumorvekst og immunregulering. I tillegg til å gi en plattform for studiet av dette fettrike tumormikromiljøet, gir modellen en utmerket plattform for utvikling og evaluering av nye terapeutiske tilnærminger for å målrette metastatiske kreftceller i denne nisje. Den foreslåtte modellen er enkel å generere, billig og anvendelig for translasjonsundersøkelser.
Introduction
Eggstokkreft er den dødeligste gynekologiske maligniteten over hele verden1. Livstidsrisikoen for å utvikle denne kreften erca. 1 av 70, med median alder for diagnose ved 63 år 2. Primære maligniteter i eggstokkene klassifiseres histologisk som enten epitelial eller ikke-epitelial. Epitelial eggstokkreft (EOC) representerer over 90% av svulstene, og den vanligste subtypen er høyverdig serøs karsinom (HGSC), som står for omtrent 70% -80% av EOCs. For tiden finnes det ingen effektive screeningmetoder for å oppdage sykdom tidlig. Så de fleste pasienter diagnostiseres på et avansert stadium (dvs. Fédération Internationale de Gynécologie et d'Obstétrique [FIGO] stadium III eller IV) etter at kreften har spredt seg gjennom bukhulen2.
Standard førstelinjebehandling er cytoreduktiv kirurgi for å fjerne all synlig makroskopisk sykdom, etterfulgt av adjuvant platinabasert kjemoterapi for å ødelegge eventuell gjenværende mikroskopisk sykdom. Mens det har vært mange fremskritt i eggstokkreftbehandling de siste to tiårene, vil ca 70% av pasientene med avansert sykdom komme tilbake innen 3 års behandling3. Gitt den generelle dårlige prognosen til disse pasientene, har pågående og fremtidig translasjonsforskningsinnsats i EOC som mål å identifisere biomarkører for tidlig deteksjon, forhindre metastase, forbedre nåværende terapier for å unngå resistens og utvikle nye personlige kreftbehandlinger.
Generalisert metastase i bukhulen og tilhørende kjemoresistens er to av de største begrensningene for forbedring av behandlingen av pasienter med eggstokkreft 4,5. Omentum, en fettforklelignende struktur som henger ned fra magen over tarmene, er et hovedsted for eggstokkreftmetastase 6,7. I tillegg til sin funksjon som en fysisk barriere, har omentumet vist seg å ha regenerativ og angiogen kapasitet og ha immunaktiviteter, som sammen fremmer vaskularisering, akselererer sårheling og begrenser infeksjon8. Den inneholder en høy konsentrasjon av stamceller som kan differensiere i forskjellige celletyper og kan bidra til å reparere skadet vev. Omentum kan bli betent som respons på skade eller infeksjon, noe som utløser migrasjon av immunceller til skadestedet9. Disse immuncellene frigjør vekstfaktorer og andre molekyler som bidrar til å fremme reparasjon og regenerering av skadet vev. Immunceller, som makrofager, lymfocytter og plasmaceller, lokalisert i omentumet, er strukturer kjent som "melkeflekker", som er ansvarlige for å oppdage og angripe patogener og regulere peritoneal immunitet. Omentum har også vist seg å spille en rolle i å indusere immuntoleranse10, som er immunsystemets evne til å tolerere selvantigener og ikke angripe sunt vev. Imidlertid er de samme immunrelaterte aktivitetene også involvert i patologiske responser, for eksempel vekst av omental svulster, metastase og rømning av immunovervåking 9,11. Tidligere studier fra vårt laboratorium og andre har vist en unik og aktiv rolle i fettmikromiljøet i inhiberingen av antitumorale immunresponser og i oppkjøpet av kjemoresistens12,13,14. Dessverre har vi begrenset informasjon om de cellulære og molekylære mekanismene som omentumet gir et protumoralt mikromiljø.
For bedre å forstå interaksjonene mellom kreftceller og omentumet ble det utviklet et 3D-kultursystem bestående av humane eggstokkreftceller og pasientavledede omentumeksplanter. Protokollen beskrevet her representerer en ny ex vivo-modell for peritoneal karsinomatose. Denne modellen etterligner den naturlige utviklingen av eggstokkreft tumorigenesis i dette fettrike vevet. Den foreslåtte modellen er enkel å generere, billig og potensielt anvendelig for translasjonsundersøkelser i eggstokkreftforskning.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Følgende forskningsprotokoll ble gjennomgått og godkjent av Wayne State University Institutional Review Board (IRB). Informert samtykke ble innhentet fra alle pasientene før operasjonen. Figur 1 illustrerer de tre generelle trinnene i denne protokollen.
1. Fremstilling av humant omentumvev
- Tilberede omentumdyrkningsmedier (DMEM/F12 + 10 % fosterbovint serum + 1 % penicillin-streptomycin) og oppbevares ved 4 °C. Aliquot 30-40 ml av dette mediet i en steril 50 ml konisk rør eller kirurgisk prøvebeholder.
- Få kirurgiske prøver fra omental biopsi eller omentektomi kirurgi. Senk den sterile prøven i omentumkulturmedier umiddelbart etter fjerning i operasjonen. Hvis arbeidsflyten ikke tillater dette, legg prøven i omentumkulturmedier så snart som mulig. Overfør prøven ved å legge den på is og oppbevar ved 4 °C frem til behandling.
MERK: Størrelsen på omentumprøven som fjernes, bestemmer mengden brukbart vev. - Behandle omentumprøven innen 1-2 timer etter oppsamling ved hjelp av en laminær strømningshette. Sørg for at alle materialer og verktøy er sterile eller steriliserte.
- Fjern omentumet fra oppsamlingsbeholderen og overfør det til en 100 mm kulturskål. Dypp prøven i 1x fosfatbufret saltvann (1x PBS) og vask prøven forsiktig for å fjerne blodpropper eller rusk.
- Klipp vevet i stykker (0,5 cm x 0,5 cm eller 100-200 mg; Figur 2A) ved hjelp av enten liten kirurgisk saks eller en 10-15 mm skalpell. Bruk små kirurgiske tang for å manipulere vevet og unngå å knuse omentumet. Hvis en energienhet ble brukt til kirurgisk fjerning av omentumprøven, må du unngå å bruke det forvrengte vevet ved den forseglede kanten.
- Plasser hvert stykke kuttet omentum i individuelle brønner på en 24-brønns kulturplate og fyll brønnene med 500 μL omentumkulturmedier eller til et volum som er nok til å dekke omentumet uten å la omentumstykket flyte over brønnbunnen (figur 2B).
- Oppbevar omentumbiter i ferske kulturmedier ved 4 °C til de er klare til injeksjon.
2. Forberedelse av eggstokkreftceller
- Dyrkning av humane eggstokkreftceller i en 75 cm 2 dyrkningskolbe ved 37 °C og 5 % CO2 til minst 75 % sammenløp på dagen for omentuminnsamling.
MERK: Denne protokollen benytter mCherry-positive OCSC1-F2 humane eggstokkreftceller tidligere beskrevet15,16,17,18. Det kan endres til en hvilken som helst kreftcellelinje merket med et fluorescenssignal. - Forbered celler inne i en laminær strømningshette umiddelbart etter innsamling av omentumprøven. Sørg for at alle materialer og verktøy er sterile eller steriliserte.
- Tilsett 10 ml steril 1x PBS til kulturkolben og vask cellene ved å vugge kolben forsiktig. Fjern 1x PBS og tilsett deretter 3 ml 0,05% Trypsin-EDTA.
- Gyng forsiktig kulturkolben for å belegge alle celler, og legg deretter kolben i en inkubator (37 ° C og 5% CO2) i ikke mer enn 5 minutter. Trykk på kulturkolben for å løsne cellene helt, og nøytraliser deretter trypsin ved å tilsette 3 ml omentumkulturmedier.
- Bland cellesuspensjonen ved pipettering, og overfør deretter suspensjonen til et 15 ml konisk rør. Sentrifuger suspensjonen i 5 minutter ved 1 200 x g ved 24 °C. Fjern supernatanten og resuspender cellepelleten i 6 ml ferske omentumkulturmedier.
- Telle cellene ved hjelp av et hemacytometer. Fortynn cellesuspensjonen til minst 100 000 celler per 100-200 μL suspensjon. Dette er injeksjonsvolumet i hvert kuttstykke omentum.
- Overfør et passende antall celler til en ny kulturkolbe for å fortsette cellepassasjen.
3. Injeksjon av eggstokkreftceller
- Bruk en 1 ml sprøyte til å trekke opp cellesuspensjonen, og fest deretter en 26 G kanyle. Ikke trekk opp cellesuspensjonen ved hjelp av nålen, da dette kan fragmentere cellene.
- Bruk små kirurgiske tang for å plukke opp et stykke kuttet omentum. Overfør omentumet til en separat steril form for å lette injeksjonen. Stikk forsiktig hull på omentumet med nålespissen og injiser et lite volum cellesuspensjon inn i vevet (figur 2C).
- Gjenta injeksjonen over flere områder av omentum til et totalt volum på minst 100 μL eller 100 000 celler. Merk at mye av celleopphenget kan se ut til å samle seg rundt prøven. Hvis det er bekymring angående kvaliteten på injeksjonen, gjenta injeksjonen eller injiser et større volum cellesuspensjon i prøven.
- Returner de injiserte omentumprøvene i hver brønn på en 24-brønns kulturplate. Vær oppmerksom på at volumet av omentum kulturmedier er til et nivå som dekker omentum uten å la det flyte. Håndter platen forsiktig og legg den i en inkubator (37 ° C og 5% CO2).
- VALGFRITT: Bruk Matrigel (kjellermembranmatrise) for å suspendere omentumvev i en solid matrise for å muliggjøre enklere injeksjon og mer konsentrert celleoppheng.
- Tine membranmatrisen i kjelleren ved 4 °C og bland i forholdet 1:1 med omentumdyrkningsmedier umiddelbart før bruk. Oppbevar matriksblandingen av kjellermembranen på is eller ved 4 °C til injeksjon. Fyll tomme brønner med nok kjellermembranmatriksblanding til å fordype et kuttet stykke omentum.
- Plasser prøver i kjellermembranmatriseblandingen og plasser deretter 24-brønnkulturplaten i en inkubator (37 ° C og 5% CO2) i 20 minutter. Når blandingen har stivnet, fortsett injeksjonen som beskrevet ovenfor.
- Bekreft vellykket injeksjon ved hjelp av fluorescerende bildebehandling. Sørg for at en stripe med fluorescerende signal visualiseres på injeksjonsstedene (figur 2D). Merk at det faktiske antallet celler festet til omentumet etter injeksjon er uforutsigbart.
4. Samkultur av humane omentum- og eggstokkreftceller
- Bytt medier hver 48-72 h ved å legge til 500-2000 μL ferske omentumkulturmedier. Ikke pipett media direkte oppå omentumvev, da dette kan fortrenge kreftceller. Merk at hvis mediefargen blir gul, må du endre mediet.
MERK: Frekvensen av medieendring vil avhenge av volumet av media som brukes og banen for kreftcellevekst. Når kreftcellene har sådd omentumet, er det ikke lenger viktig om omentumbiten flyter eller ikke. - VALGFRITT: Hvis en kjellermembranmatrise ble brukt, ville matrisen vanligvis bli oppløst ved tidspunktet for den første medieendringen.
- Overvåk veksten av eggstokkreft svulster ved hjelp av fluorescerende bildebehandling. Frekvensen av avbildning er etter etterforskerens skjønn. Forvent tegn på små svulster etter ca. 14 dager (figur 3A-C). Resultatene kan variere avhengig av kvaliteten på injeksjonen.
- Avslutt eksperimentet basert på eksperimentendepunktet.
MERK: Tumorvekst og integritet av omentumvev har blitt observert i løpet av 50 dager.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Vellykket etablering av eggstokkreftceller i omentumprøver ble påvist ca. dag 14 (figur 3A-C). Minst 24 replikater ble fremstilt og injisert per innsamlet prøve for å tillate videre eksperimentering. Tumorvekst ble overvåket ved å ta fluorescerende bilder (figur 3D,E). Bilder måtte tolkes nøye, da det også vokste et monolag av kreftceller i bunnen av hver brønn som ikke var festet til omentumet. Vi foretrakk å ta bilder av omentumet når det var suspendert i media for å unngå overlappende fluorescerende signaler med kreftcellemonolaget.
Fraværet av et fluorescerende signal ved dag 14 kan betraktes som mislykkede injeksjoner. Det ble observert at kreftcellene først spredte seg over overflaten av omentumet i løpet av de første 7 dagene, men over tid samlet de seg for å danne svulster (figur 3A-D). Et surrogatmål for tumorbelastning mellom prøvene var hastigheten der omentumkulturmedier endret farge fra rødt til gult (figur 3F). Vi benyttet fluorescerende bildebehandling, histologisk gjennomgang og grov inspeksjon for å bekrefte tumorvekst og levedyktighet av mentalt vev etter 50 dager med samkultur (figur 4).
Figur 1: Illustrasjon av generelle trinn i protokollen. (A) Trinn 1: Forberedelse av omentum; (B) Trinn 2: injeksjon av kreftceller; (C) Trinn 3: etablering av kreft celle-omentum mikromiljø. (Figur utarbeidet i BioRender.com). Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
Figur 2 Fremstilling og injeksjon av kreftceller i omentum. (A) Omentum er kuttet i 1x1 cm stykker. (B) Hvert stykke er plassert i en brønn med en 24-brønns plate og dekket med 500 μL medier. (C) Injeksjon av kreftceller i omentum stykke. (D) En stripe fluorescerende kreftceller observeres etter injeksjon. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
Figur 3: Representative bilder etter 14 og 25 dager med samkultur. (A-C) Representative bilder etter 14 dager med samkultur: (A) fase, (B) mCherry-kanal, (C) slått sammen. (D-E) Representative bilder etter 25 dager med samkultur. (F) Endring i mediefarge fra rosa til gul er en indikasjon på vellykket kreftcelleinjeksjon og etablering av samkultur. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
Figur 4: Grovmorfologi og farging av hematoksylin og eosin (H&E). (A,B) Representativ bruttomorfologi av kokulturer på dag 50; piler peker på steder for vekst av mCherry+ eggstokkreftceller. (C,D) Representativ H&E-farging av samkulturer på dag 50. Klikk her for å se en større versjon av denne figuren.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Ved hjelp av denne protokollen ble en preklinisk modell av peritoneal karsinomatose for eggstokkreft utviklet ved hjelp av en kombinasjon av grunnleggende in vitro og ex vivo teknikker. En progressiv tumorvekst ble observert over 50 dager med samkultur etter såing av omentumprøver med mCherry+ OCSC1-F2 humane eggstokkreftceller. Denne metoden ble utviklet og optimalisert på tvers av flere eksperimentelle forsøk ved bruk av forskjellige omentumprøver. Vellykket tumorvekst var avhengig av kvaliteten på omentum, levedyktigheten til kreftceller og effektiviteten av injeksjonen. I denne rapporten brukte vi bare mCherry+ OCSC1-F2-celler og mCherry+ R182 humane eggstokkreftlinjer som tidligere er rapportert i flere publikasjoner 12,15,16,17,18,19,20,21,22. Ved å bruke disse to cellelinjene med forskjellige doblingstider (16 timer for OCSC1-F2 og 36 timer for R182), ble det observert en forskjell i tiden for å oppnå logaritmisk vekst i det orentale vevet. Likevel lyktes vi med å etablere begge cellelinjene i samkultursystemet.
Effektiv kommunikasjon mellom forskere, forskningskoordinatorer og kirurgiske team var avgjørende for innsamling og behandling av omentumprøver. Etterforskeren identifiserte protokollkandidater, forskningskoordinatorene innhentet samtykke fra pasienter før operasjonen, og etterforskeren samlet prøvene fra operasjonssalen. Gitt denne arbeidsflyten måtte utprøverens tidsplan være fleksibel ettersom mange faktorer på pasientsiden som påvirket innsamlingen var uforutsigbare (f.eks. operasjonen ble kansellert, operasjonstidspunktet endret, utilstrekkelig eller ingen omentum fjernet). Direkte visualisering og utvelgelse av vev fra operasjonen sikret prøveintegritet, kirurgisk sterilitet og rettidig behandling. I starten ble prøvetakingen delegert til forskningskoordinatorer; Men etter at noen få prøver ble samlet, bemerket vi at tiden til behandling ble forsinket (dvs. >4 timer) og kvaliteten på omentum var grovt dårligere (f.eks. vev var i stykker). I en eksperimentell studie ble mentalt vev lagret ved 4 °C i 48 timer før injeksjon fordi kreftcellene ikke var klare i tide. Lignende tumorvekst ble fortsatt observert, men denne sekvensen ble ikke gjentatt da temperaturendringer er kjent for å påvirke tumormikromiljøet (TME).
Før prøvetaking var det viktig å ha tilstrekkelig konfluente kreftceller i henhold til operasjonsplanen. Siden antall prøver samlet hver måned varierte, ble aktive kulturer av eggstokkreftceller ikke alltid opprettholdt. De frosne cellene ble tint minst 1 uke i forveien, belagt ved hjelp av en standardprotokoll, og deretter passerte cellene minst en gang for å sikre levedyktighet. Cellelinjene som ble brukt i denne protokollen var relativt motstandsdyktige; Imidlertid opplevde vi fortsatt tilfeller der celler ikke hadde gjenopprettet innen operasjonsdagen og ikke kunne injiseres. I denne studien var det ikke noe forsøk på å injisere kreftceller som var mindre enn 50% sammenflytende. Påfølgende forsinkelser relatert til cellepreparasjon ble redusert ved å bruke god steril teknikk og splitte celler i forhold for å opprettholde konfluens avhengig av forventet prøveinnsamlingsplan. Vi begrenset protokollen til kun to fluorescerende merkede kreftcellelinjer, men det er viktig å merke seg at andre etablerte kreftcellelinjer eller primære kreftceller uten fluorescerende proteiner også kunne benyttes.
Til slutt var frekvensen av tumorvekst korrelert med sammenløpet av kreftceller ved siden av og i adipocytter umiddelbart etter injeksjon. Dette ble bestemt ved å ta fluorescerende bilder av alle omentumprøver etter injeksjon. Sammenlignet med tumorcelleinokulering av faste organer eller subkutant vev, var injeksjon av kreftceller i omentalvev mer utfordrende. Den løse strukturen og fettkonsistensen til omentum hindrer vevet i effektivt å holde volumer av cellesuspensjon uten å lekke. Når en mindre nål (dvs. 30 G eller smalere) ble brukt til å injisere, var det bekymring for cellefragmentering da celleproliferasjonen ble redusert. Vi testet ulike injeksjonsteknikker, cellenumre og cellesuspensjonsvolumer og fant konsistente resultater med protokollen beskrevet ovenfor. Samtidig erkjenner vi at slike variasjoner i protokollen sannsynligvis fortsatt vil gi lignende resultater gitt cellens ondartede natur. Tilsetningen av Matrigel gjorde injeksjonstrinnet lettere da den ekstracellulære matriksen holdt cellesuspensjonen bedre; Denne metoden er imidlertid dyrere og ga ikke konsekvent en høyere tumorbelastning i prøvene. Totalt sett var det sjelden at noen av omentumprøvene ikke dyrket svulster, men antall svulster og veksthastighet varierte.
Denne modellen simulerte et kjennetegn på eggstokkreft tumorigenesis ved å replikere tidlig metastase til fettrike peritoneale vev. Denne protokollen tillater variasjon uten nødvendige ferdigheter, er enkel å replikere, og genererer et system med potensiell oversettelsesverdi. Sammenlignet med eksisterende in vitro og ex vivo modeller i eggstokkreft, kombinerer metoden beskrevet her flere teknikker for å produsere en modell som beholder tumorarkitektur og TME over en lang levetid. I tillegg observerte vi at når en omentumprøve med flere svulster ble overført til en ny brønn og dyrket med kreftfritt omentum (dvs. ikke injisert), ble det naive omentumet sådd med kreftceller innen 7 dager. Dette funnet antyder at de replikerte svulstene beholder metastatisk potensial via epithelial-mesenkymal overgang. Vi identifiserte ingen tilsvarende eggstokkreftmodeller i litteraturen som dyrket vevsbiopsier over lengre tid. Denne tilnærmingen støttes av et tidligere funn om at mesotelceller isolert fra museomentum kunne dyrkes i mer enn 30 passasjer etter innsamling23.
Modellen beskrevet i denne studien kan brukes til å forstå effekten av direkte interaksjon mellom eggstokkreftceller og cellene i det fettrike omentumet. Kreftceller kan dissosieres fra omentumvevet og oppnås for transkriptomisk eller immunhistokjemi (IHC) analyse. I tillegg kan celler brukes til legemiddelresponsstudier.
De primære begrensningene i denne modellen er at antall svulster, hastighet på tumorvekst og plassering av svulster var uforutsigbare. Mangel på standardisering og variasjon på tvers av utvalg kan begrense anvendelsen av denne modellen. Vi har også gjort flere observasjoner som vil kreve ytterligere undersøkelser under utviklingen av denne protokollen. For eksempel var "kontroll" replikatene i ett eksperiment faktisk ikke kreftfrie da pasienten senere ble diagnostisert med omental mikrometastase; Imidlertid forblir de ikke-injiserte svulstene levedyktige gjennom hele eksperimentelle perioden. Fremtidige anvendelser av denne modellen vil inkludere molekylære studier av TME under tidlig tumorigenese, manipulering av TME ved å injisere immunceller og legemiddelresponsundersøkelser. Oppsummert tror vi at den prekliniske modellen beskrevet her vil legge til repertoaret av eksisterende forskningsverktøy og bidra til å belyse molekylære mekanismer for TME i eggstokkreft.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Forfatterne har ingenting å avsløre.
Acknowledgments
Denne studien er delvis finansiert av The Janet Burros Memorial Foundation. Vi anerkjenner pasientene og Karmanos Cancer Institute Gynecologic Oncology Department for innsamling av omentumprøver. Vi anerkjenner også Biobank and Correlative Sciences Core ved Karmanos Cancer Institute for koordinering av pasientrekruttering og utarbeidelse av patologiske lysbilder. Biobanken og Correlative Sciences Core støttes delvis av NIH Center grant P30 CA22453 til Karmanos Cancer Institute ved Wayne State University.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| 0.05% Trypsin-EDTA (1x) | Gibco | 25300054 | |
| 1 mL Insulin Syringe with 26 G detachable needle | BD | 329652 | |
| 10 mL Serological Pipets | CELLTREAT | 229010B | |
| 100 mm Tissue Culture Dish | Fisherbrand | FB012924 | |
| 15 mL Centrifuge Tube | CELLTREAT | 229411 | |
| 24 Well Cell Culture Plate | Costar | 3524 | |
| 50 mL Centrifuge Tube | CELLTREAT | 229421 | |
| 75 cm2 Tissue Culture Flask | CELLTREAT | 229341 | |
| Corning Cell Counter | Corning | 9819000 | |
| Cytation 5 imager | Biotek | ||
| DMEM/F12 (1:1) (1x), +L-Glutamine, +2.438 g/L Sodium Bicarbonate | Gibco | 11320033 | |
| Fetal Bovine Serum, Qualified | Gibco | 1043028 | |
| Matrigel | Corning | 356230 | Basement membrane matrix |
| No. 10 Stainless Steel Disposable Scalpel | Integra-Miltex | 4410 | |
| Penicillin Streptomycin | Gibco | 15140122 | |
| Phosphate Buffered Saline, pH 7.4 (1x) | Gibco | 10010023 | |
| Revolve microscope | Echo |
References
- Siegel, R. L., Miller, K. D., Wagle, N. S., Jemal, A.
- Berek, J. S., Renz, M., Kehoe, S., Kumar, L., Friedlander, M. Cancer of the ovary, fallopian tube, and peritoneum: 2021 update. Int J Gynaecol Obstet. 155 (Suppl 1), 61-85 (2021).
- Ledermann, J. A., et al. Newly diagnosed and relapsed epithelial ovarian carcinoma: ESMO clinical practice guidelines for diagnosis, treatment and follow-up. Ann Oncol. 24 (Suppl 6), vi24-32 (2013).
- Jelovac, D., Armstrong, D. K. Recent progress in the diagnosis and treatment of ovarian cancer. CA Cancer J Clin. 61 (3), 183-203 (2011).
- Morgan, R. J. Jr, et al. Ovarian cancer. Clinical practice guidelines in oncology. J Natl Compr Canc Netw. 6 (8), 766-794 (2008).
- Nieman, K. M., et al. Adipocytes promote ovarian cancer metastasis and provide energy for rapid tumor growth. Nat Med. 17 (11), 1498-1503 (2011).
- Motohara, T., et al. An evolving story of the metastatic voyage of ovarian cancer cells: cellular and molecular orchestration of the adipose-rich metastatic microenvironment. Oncogene. 38 (16), 2885-2898 (2019).
- Di Nicola, V. Omentum a powerful biological source in regenerative surgery. Regen Ther. 11, 182-191 (2019).
- Meza-Perez, S., Randall, T. D.
- Liu, M., Silva-Sanchez, A., Randall, T. D., Meza-Perez, S. Specialized immune responses in the peritoneal cavity and omentum. J Leukoc Biol. 109 (4), 717-729 (2021).
- Lee, W., et al. Neutrophils facilitate ovarian cancer premetastatic niche formation in the omentum. J Exp Med. 216 (1), 176-194 (2019).
- Cardenas, C., et al. Adipocyte microenvironment promotes Bclxl expression and confers chemoresistance in ovarian cancer cells. Apoptosis. 22 (4), 558-569 (2017).
- Wu, Q., et al. Cancer-associated adipocytes: key players in breast cancer progression. J Hematol Oncol. 12 (1), 95 (2019).
- Zhang, Z., Scherer, P. E. Adipose tissue: The dysfunctional adipocyte - a cancer cell's best friend. Nat Rev Endocrinol. 14 (3), 132-134 (2018).
- Alvero, A. B., et al. TRX-E-002-1 Induces c-Jun-dependent apoptosis in ovarian cancer stem cells and prevents recurrence in vivo. Mol Cancer Ther. 15 (6), 1279-1290 (2016).
- Alvero, A. B., et al. Novel approach for the detection of intraperitoneal micrometastasis using an ovarian cancer mouse model. Sci Rep. 7, 40989 (2017).
- Craveiro, V., et al. Phenotypic modifications in ovarian cancer stem cells following Paclitaxel treatment. Cancer Med. 2 (6), 751-762 (2013).
- Sumi, N. J., et al. Murine model for non-invasive imaging to detect and monitor ovarian cancer recurrence. J Vis Exp. (93), e51815 (2014).
- Agarwal, R., et al. Macrophage migration inhibitory factor expression in ovarian cancer. Am J Obstet Gynecol. 196 (4), 348.e1-348.e5 (2007).
- Kelly, M. G., et al. TLR-4 signaling promotes tumor growth and paclitaxel chemoresistance in ovarian cancer. Cancer Res. 66 (7), 3859-3868 (2006).
- Li, J., et al. CBX7 binds the E-box to inhibit TWIST-1 function and inhibit tumorigenicity and metastatic potential. Oncogene. 39 (20), 3965-3979 (2020).
- Tedja, R., et al. Generation of stable epithelial-mesenchymal hybrid cancer cells with tumorigenic potential. Cancers (Basel). 15 (3), 15030684 (2023).
- Dauleh, S., et al. Characterisation of cultured mesothelial cells derived from the murine adult omentum. PLoS One. 11 (7), e0158997 (2016).
