C. elegans Ensayo de supervivencia: Una prueba de toxicidad a corto plazo

Overview

Este video presenta un ensayo de supervivencia a corto plazo que prueba un tratamiento para la toxicidad aguda o prueba una cepa genética para la resistencia a una condición tóxica.  El protocolo de ejemplo muestra un ejemplo de ensayo de supervivencia en el que los gusanos son probados por su capacidad para resistir el estrés oxidativo inducido por paraquat (PQ).

Protocol

Este protocolo es un extracto de Possik and Pause, Measuring Oxidative Stress Resistance of Caenorhabditis elegans in 96-well Microtiter Plates, J. Vis. Exp. (2015).

1. Realización del ensayo de resistencia al estrés oxidativo

1. Pipeta 40 μl de la solución PQ de 100 mM (preparada fresca) a cada pozo de una placa de 96 pozos. Utilice al menos 12 pozos como réplicas de cada condición (tratamiento, mutante, etc.). Usando una selección de gusano de alambre de platino, transfiera 5-8 L4 animales a todos los pozos indicando la hora de inicio y la hora de finalización.
2. Al iniciar otra condición, tenga en cuenta la hora de inicio y la hora de finalización. Coloque la placa a 20 °C en el tiempo de incubación entre transferir los gusanos y puntuar animales muertos una hora más tarde a partir de la hora de inicio.
3. Usando el microscopio diseccionador, cuente la supervivencia cada hora. Agita suavemente el plato antes de empezar a contar. Indique los gusanos que no se mueven, incluso después de detectar una luz de alta intensidad, como animales muertos. También indique el número de animales vivos.
   NOTA: Mirar la forma del gusano, las colas y el movimiento de la cabeza a gran aumento, ayudar a determinar los gusanos muertos de vivos.
4. Repita este paso cada hora hasta que la mayoría de los gusanos estén muertos.

2. Determinación del porcentaje de supervivencia en cada punto de tiempo

1. Calcule el número total de animales por condición añadiendo el número total de animales transferidos a cada pozo. Ignora a los animales que son dañados o asesinados al ser transferidos.
2. Por cada punto de tiempo, calcule el número total de animales muertos por condición (suma de animales muertos en los 12 pozos). Para cada punto de tiempo, calcule el porcentaje de muerte (número de animales muertos dividido por el número total de animales y multiplicado por 100) y porcentaje de supervivencia (100 menos por ciento de muerte).
3. Repita este ensayo al menos 3 veces independientemente.

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Discovery v8 stereo zeiss microscope	Zeiss
96 well clear microtiter plate