Overview
يقدم هذا الفيديو فحصا قصير الأجل للبقاء على قيد الحياة يختبر علاجا للسمية الحادة أو يختبر سلالة جينية لمقاومة حالة سامة. يظهر البروتوكول المثال مثالا على اختبار البقاء على قيد الحياة حيث يتم اختبار الديدان لقدرتها على مقاومة الإجهاد التأكسدي الناجم عن الباراكوات (PQ).
Protocol
هذا البروتوكول هو مقتطف من بوسيك ووقفة، وقياس مقاومة الإجهاد التأكسدي من elegans Caenorhabditis في لوحات Microtiter 96 جيدا، J. Vis. Exp. (2015).
1. إجراء اختبار مقاومة الإجهاد التأكسدي
- ماصة 40 ميكرولتر من محلول PQ 100 mM (أعدت طازجة) إلى كل بئر من لوحة بئر 96. استخدام ما لا يقل عن 12 بئرا كما يكرر كل حالة (العلاج، متحولة، الخ). باستخدام انتقاء دودة سلكية بلاتينية ، قم بنقل يرقات 5-8 L4 إلى كل بئر تشير إلى وقت البدء ووقت النهاية.
- عند بدء تشغيل شرط آخر، لاحظ وقت البدء ووقت الانتهاء. ضع اللوحة عند 20 درجة مئوية في وقت الحضانة بين نقل الديدان وتسجيل الحيوانات النافقة بعد ساعة من وقت البدء.
- باستخدام المجهر تشريح، عد البقاء على قيد الحياة كل ساعة. يهز بلطف لوحة قبل البدء في العد. تشير إلى الديدان التي لا تتحرك، حتى بعد اكتشاف ضوء عالي الكثافة، كحيوانات ميتة. أيضا تشير إلى عدد من الحيوانات على قيد الحياة.
ملاحظة: بالنظر إلى شكل الدودة وذيولها وحركة الرأس عند التكبير العالي ، ساعد في تحديد الديدان الميتة من على قيد الحياة. - كرر هذه الخطوة كل ساعة حتى تموت معظم الديدان.
2. تحديد نسبة البقاء على قيد الحياة في كل نقطة زمنية
- حساب العدد الإجمالي للحيوانات لكل شرط بإضافة العدد الإجمالي للحيوانات المنقولة إلى كل بئر. تجاهل الحيوانات التي تضررت أو قتلت عند نقلها.
- لكل نقطة زمنية، حساب العدد الإجمالي للحيوانات الميتة لكل حالة (مجموع الحيوانات النافقة في الآبار 12). في كل نقطة زمنية، احسب النسبة المئوية للوفيات (عدد الحيوانات النافقة مقسوما على العدد الإجمالي للحيوانات وضربها ب 100) والنسبة المئوية للبقاء على قيد الحياة (100 ناقص الموت في المائة).
- كرر هذا المقايسة على الأقل 3 مرات مستقلة.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Discovery v8 stereo zeiss microscope | Zeiss | ||
| 96 well clear microtiter plate |
