C. 埃莱甘斯 生存分析：短期毒性测试

Overview

此视频引入了短期生存检测，测试急性毒性的治疗方法或测试对毒性条件的耐药性遗传菌株。 示例协议显示了一个示例生存检测，其中蠕虫测试其抵抗由百草枯 （PQ） 引起的氧化应激的能力。

Protocol

本协议摘自波西克和暂停，测量氧化抗应激性卡诺哈布迪蒂斯电子在96井微酸盐板，J.Vis.Exp.（2015年）。

1. 执行氧化抗应激检测

1. 100 mM PQ 解决方案（新鲜准备）的 Pipette 40 μl 到 96 井板的每口井。使用至少 12 口井作为每个条件的复制品（治疗、突变等）。使用铂线蠕虫采摘，将 5-8 L4 幼虫动物转移到每口井，指示开始时间和结束时间。
2. 启动其他条件时，请注意开始时间和结束时间。将盘子放置在20°C的孵化时间，从开始时间开始一小时后转移蠕虫和给死动物打分。
3. 使用解剖显微镜，每小时计算一次存活率。在开始计数之前轻轻摇动盘子。指示不移动的蠕虫，即使在发现高强度光后，作为死亡动物。还指示活着的动物数量。
   注： 观察蠕虫的形状、尾巴和头部在高倍增度下的运动，帮助确定活蠕虫的死蠕虫。
4. 每小时重复这一步，直到大多数蠕虫死亡。

2. 确定每个时间点的存活率

1. 通过添加转移到每口井的动物总数来计算每个条件的动物总数。忽略转移时损坏或死亡的动物。
2. 对于每个时间点，计算每个条件的死动物总数（12口井中死亡动物的总和）。对于每个时间点，计算死亡百分比（死亡动物的数量除以动物总数，乘以100）和生存百分比（100减去死亡）。
3. 重复此分析至少3次独立时间。

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Discovery v8 stereo zeiss microscope	Zeiss
96 well clear microtiter plate