تشريح عدسة العين: تقنية لمراقبة مورفولوجيا عدسة حمار وحشي

Overview

يصف هذا الفيديو البروتوكول الذي تم تطويره لتشريح عدسات حمار وحشي للبالغين واليرقات لتحليل مورفولوجيا العدسة القشرية والسلامة الهيكلية لغرز العدسة.

Protocol

1. تشريح اليرقات وعدسات حمار وحشي الكبار

1. تخدير الأسماك من 6 يرقات dpf إلى مرحلة البلوغ مع tricaine حتى عدم الاستجابة للمس ولكن لا تزال تظهر ضربات قلب قوية. قياس طول الأسماك القياسية وفقا لشيلنغ (2002) للالتدريج.
2. على الفور استئصال العيون باستخدام مقص تشريح الصغرى ومكان في طبق تشريح في برنامج تلفزيوني (الشكل 1 هو مبين لعيون البالغين).
   1. جعل طبق مخصص 35 ملم مليئة السيليكون لتشريح العدسة. مرة واحدة وقد وضعت السيليكون، استئصال divot حوالي 2-3 ملم في القطر و 0.5 ملم عميق لشل عيون الكبار / العدسات أثناء تشريح.
3. تشريح عدسات حمار وحشي الكبار
   1. وضع العين الكبار في الجانب الخلفي divot الطبق حتى مليئة برنامج تلفزيوني. شل حركة العين عن طريق إدخال ملقط في زاوية < 45 درجة من خلال القرص البصري. يجب الحرص على عدم أو ضغط العدسة. إجراء شقين أو ثلاثة شق شعاعي من خلال شبكية العين والشد من القرص البصري إلى المنطقة الوسطى مع مقص تشريح.
   2. قشر مرة أخرى شبكية العين والقبضة مثل بتلات الزهور وعكس العين، قرنية الجانب حتى. شل العدسة بشكل غير مباشر عن طريق التلاعب في تصلب القرنية مع الجانب المسطح من المقص، في حين سحب بعيدا شبكية العين والأنسجة المرفقة مع ملقط. تقليم بعناية الأنسجة الزائدة من العدسة.
      ملاحظة: من الضروري تشريح بعناية للحصول على عدسات صحية باستمرار.
4. تشريح عدسات حمار وحشي اليرقات
   1. ضع الجانب الخلفي للعين اليرقة على الجزء المسطح من طبق السيليكون المملوء ب PBS واستخدم إبرة التنغستن الحادة لإجراء جروح شعاعية عبر شبكية العين والشد أثناء شل حركة العين بإبرة التنغستن أو ملقط آخر.
      ملاحظة: يجب الحرص على عدم تلف العدسة.
      1. شحذ غيض من طول 2 سم من 0.1 مم سلك التنغستن كهربائيا عن طريق تعليق طرف الأسلاك إلى 10٪ (ث / v) NaOH وتطبيق الجهد المنخفض بالتناوب-current14. تأمين الإبرة في ماصة باستور عن طريق ذوبان نهاية الزجاج باستخدام الموقد بونسن.
         ملاحظة: كما يمكن استخدام أدوات تشريح غرامة بديلة.
         تحذير: NaOH هو تآكل.
   2. استخرج العدسة برفق من العين المفككة بجانب حاد من الإبرة ، واسحب الأنسجة المرفقة بعناية.

Representative Results

الشكل 1: تشريح عدسة حمار وحشي. (أ) يتم تشريح العينين من الأسماك المخدرة ووضع الجانب الخلفي لأعلى (B). (ج) يتم شل حركة العينين بواسطة ملقط عبر القرص البصري (od) ويتم إجراء شقين إلى ثلاثة شقوق شعاعية في شبكية العين والشد من القرص البصري إلى الزونات. (د) أضعاف اللوحات للكشف عن العدسة. (ه) تدوير العين لمواجهة القرنية، شل العدسة بشكل غير مباشر عن طريق القرنية وسحب بعيدا تصلب الشبكية. (F) تقليم بعيدا الشبكية المتبقية ومنطقة سيليلي / zonules من العدسة

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Phosphate buffered saline (PBS)	Fisher Scientific	BP399
Glass bottom microwell dish (35mm Petri dish, 14 mm microwell, #1.5 coverglass)	MatTek Corporation	P35G-1.5-14-C
Dumont #5 forceps	Dumont & Fils		Keep forceps sharpened
Vannas micro-dissection scissors	Ted Pella Inc	1346	Sharp/sharp straight tips
Confocal microscope	Nikon		Eclipse Ti-E
Sodium Hydroxide beads	Fisher Scientific	S612-3	CAUTION - corrosive/irritating to eyes and skin, target organ - Journal of Visualized Experiments www.jove.com Copyright © 2019 Journal of Visualized Experiments Page 2 of 2 respiratory system, corrosive to metals
Disposable Pasteur glass pipets	Fisherbrand	13-678-20A