जेब्राफिश कार्डियोमायोपैथी मॉडल: दवा प्रेरित कार्डियोटॉक्सीसिटी

Overview

यह वीडियो प्रयोगात्मक समूहों के बीच न्यूनतम विविधताओं के साथ एक जेब्राफिश कार्डियोमायोपैथी मॉडल बनाने की तकनीक का वर्णन करता है और नमूने में, हम दवा डॉक्सोरुबिकिन का उपयोग करके जेब्राफिश कार्डियोमायोपैथी मॉडल बनाते हैं।

Protocol

1. वयस्क मछली में DOX इंजेक्शन

1. एक विच्छेदन माइक्रोस्कोप के तहत, इसके अंदर एक स्पंज के साथ एक साफ 100 मिमी पेट्री डिश रखें, फिर ध्यान समायोजित करें। एक मछली को पकड़ने के लिए लंबाई में लगभग 4 सेमी की गुहा बनाने के लिए स्पंज काटें। एक बड़ी मछली के लिए एक लंबी गुहा बनाओ।
2. 10 माइक्रो-सिरिंज के साथ 34 जी सुई तैयार करें। सिरिंज और ट्यूबिंग से किसी भी बुलबुले और ब्लॉक को हटाने के लिए 1x एचबीबीएस बफर के साथ सुई कुल्ला।
3. 2 मिनट के लिए 0.16 मिलीग्राम/एमएल ट्राइकेन युक्त भ्रूण के पानी में वयस्क मछली को एनेस्थेटाइज करें।
   नोट:5 मिनट से अधिक लंबे समय तक एनेस्थेटाइजेशन के बाद DOX इंजेक्शन आसानी से मछली की मौत का कारण बन सकता है ।
4. त्रिकेन के साथ भ्रूण के पानी में स्पंज सोख लें, और इंजेक्शन के लिए स्पंज पर मछली स्थानांतरित करें।
5. नीचे वर्णित दो तरीकों में से किसी के द्वारा आईपी DOX इंजेक्शन प्रदर्शन करें।
   1. क्लासिक आईपी इंजेक्शन
      1. स्पंज की गुहा में पेट के साथ मछली की स्थिति। जल्दी से सुई डालें, मछली के शरीर को 45 डिग्री कोण के साथ पेल्विक पंखों के बीच मिडलाइन में, और लगभग 1-2 मिमी घुसना। धीरे-धीरे सभी डॉक्स समाधान जारी करें। सुई खींचने से पहले 5 एस रुको। मछली के पेट में एक दृश्य लाल रंग द्वारा DOX वितरण की जांच करें।
   2. वैकल्पिक आईपी इंजेक्शन
      1. मछली को बाद में स्पंज पर दाईं ओर पूर्वकाल के साथ रखें। धीरे-धीरे बाएं हाथ से एक कुंद अंत संदंश का उपयोग कर मछली को स्थिर करें, और दाहिने हाथ से माइक्रो-सिरिंज पकड़ो।
      2. पेल्विक फिन के ऊपर पार्श्व रेखा के नीचे सुई की स्थिति, बेवेल का सामना करना पड़ रहा है। 45 डिग्री कोण पर 7 बजे की स्थिति की ओर इशारा करते हुए, पेल्विक और गुदा पंख के बीच स्थित मछली गुहा में सुई 3-4 मिमी डालें, और फिर धीरे-धीरे गिरने वाले को दबाना। मछली के पेट में एक दृश्य लाल रंग द्वारा DOX वितरण की जांच करें।
6. मछली को ठीक करने की अनुमति देने के लिए ताजे सिस्टम के पानी से भरे एक साफ क्रॉसिंग टैंक में इंजेक्शन मछली को जल्दी से स्थानांतरित करें। इंजेक्शन के बीच 1x एचबीबीएस बफर के साथ एक बार सुई कुल्ला।

Materials

Name	Company	Catalog Number	Comments
Crossing tank	Aquaneering	ZHCT100	Fish breeding
Doxorubicin hydrochloride	Sigma	D1515-10MG
Hank's balanced salt solution (HBBS)	ThermoFisher	14025076	Vehicle for DOX
100 mm petri dish	Falcon	431741
10 μL NanoFil micro-syringe	WPI	NANOFIL	For injection
34 gauge needle	WPI	NF34BV-2	For injection
Tricaine	Argent		Anesthetizing fish