Encyclopedia of Experiments: Biology
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- कार्डियोमायोपैथी एक ऐसी स्थिति है जिसमें दिल की मांसपेशी कमजोर हो जाती है और रक्त पंप करने की क्षमता खो देती है। इस स्थिति को जेब्राफिश में दोहराया जा सकता है। सबसे पहले, कई कामकाजी सांद्रता तैयार करने के लिए हैंक्स के संतुलित नमक समाधान में कार्डियोटॉक्ससिटी के लिए जिम्मेदार दवा का स्टॉक समाधान पतला करें। इसके बाद, एक ट्राइकेन एनेस्थेटाइज्ड मछली, वेंट्रल साइड अप रखें, एक विच्छेदन माइक्रोस्कोप के नीचे एक होल्डिंग स्पंज पर। क्षैतिज से 45 डिग्री कोण पर श्रोणि पंखों के बीच सुई की स्थिति।
अब धीरे-धीरे सुई को 1 से 2 मिलीमीटर पेरिटोनियल गुहा में धकेलें और धीरे-धीरे दवा समाधान इंजेक्ट करें। हल को लीक होने से रोकने के लिए सुई को बाहर निकालने से पांच सेकंड पहले प्रतीक्षा करें। तुरंत मछली को एक साफ टैंक में स्थानांतरित करें जिसमें ताजा सिस्टम पानी होता है। गंभीर कार्डियोटॉक्सिसिटी, हृदय की मांसपेशियों को नुकसान पहुंचाने के कारण प्रत्येक दिन मरने वाली मछलियों की संख्या रिकॉर्ड करें । दवा कार्डियोमायोसाइट सेल झिल्ली पर मौजूद मौत रिसेप्टर्स को बांधती है और एपोप्टोसिस को ट्रिगर करती है, जिसके परिणामस्वरूप गंभीर कार्डियोटोक्सीसिटी होती है ।
एक जीवित रहने की अवस्था बनाएं, प्रत्येक दवा एकाग्रता के लिए समय के साथ जीवित रहने की संभावना को प्रदर्शित करने वाला ग्राफ। उदाहरण में, हम दो तरीकों से वयस्क जेब्राफिश में कार्डियोमायोपैथी को प्रेरित करने के लिए डॉक्सोरुबिकिन या डॉक्स को इंजेक्ट करेंगे।
DOX के साथ मछली इंजेक्शन से पहले, 24 घंटे तक मछली को तेज करें. इसके बाद, मछली को समूह बनाएं. एनेस्थेटेड होने के दौरान, प्रत्येक मछली को सुखाने और उसके शरीर के वजन को मापने के लिए एक साफ फिल्टर पेपर का उपयोग करें। मछली के समूह बनाएं जो शरीर के वजन के 10% के भीतर हैं ताकि प्रत्येक समूह को DOX की एक ही खुराक के साथ इंजेक्ट किया जा सके। इसके बाद, प्रत्येक समूह को समाधान के पांच माइक्रोलीटर के साथ इंजेक्शन दिया जाता है और शरीर के वजन द्वारा एक ही खुराक प्राप्त करता है।
इसके बाद 1x एचबीएसएस में डॉक्स के स्टॉक को पतला करें। 1x एचबीएसएस में कमजोर पड़ने को पतला करें और फिर पल्स को एक साथ ट्यूब में पूल रखने के लिए पल्स स्पिन करें। इंजेक्शन के लिए, एक इंजेक्शन प्लेटफॉर्म तैयार करें। 100 मिलीमीटर पेट्री डिश में एक स्पंज रखें। एक विच्छेदन माइक्रोस्कोप की सहायता से एक पव्वेल को एक मछली पकड़ने के लिए स्पंज में कटौती करें, चार सेंटीमीटर आमतौर पर काम करता है ।
इसके बाद, 34 गेज की सुई पर, 10-माइक्रोलिटर माइक्रोसिरिंग संलग्न करें। फिर, सिरिंज और ट्यूबिंग से किसी भी बुलबुले या ब्लॉक को हटाने के लिए 1x एचबीबीएस के साथ सुई को कुल्ला करें। अब, वयस्क मछली को ट्राइकेन के साथ संक्षेप में एनेस्थेटाइज करें। फिर, भ्रूण के पानी में स्पंज को ट्राइकेन के साथ भिगो दें और एक मछली को इंजेक्शन के लिए अपने पेट के साथ स्पंज पर स्थानांतरित करें। अब, इंट्रापेरिटेली रूप से 1 से 2 मिलीमीटर गहरे श्रोणि पंखों के बीच मिडलाइन में 45 डिग्री कोण पर सुई डालकर डॉक्स समाधान इंजेक्ट करें।
फिर, धीरे-धीरे सभी डॉक्स समाधान को छोड़ दें। सुई से मुकर जाने से पहले, पांच सेकंड प्रतीक्षा करें। वैकल्पिक रूप से, मछली को इंटीरियर के साथ पार्श्व रूप से दाईं ओर तैनात किया जा सकता है। फिर, पेल्विक फिन के ऊपर पार्श्व रेखा को 45 डिग्री कोण और 3 से 4 मिलीमीटर गहरे 7 बजे की ओर इशारा करते हुए इंजेक्ट किया गया। यदि इंजेक्शन के लिए या तो विधि सफल होती तो पेट में लाल रंग की होती।
इंजेक्शन के बाद मछली को जल्दी से ताजे सिस्टम के पानी से भरे साफ-सुथरे क्रॉसिंग टैंक में ट्रांसफर करें, जहां यह ठीक हो सके । फिर, एचबीबीएस के साथ सुई कुल्ला और अगली मछली सुई के लिए आगे बढ़ना । बाद में, इंजेक्शन मछली को चलन के साथ एक प्रणाली को वापस करें लेकिन पार संदूषण से बचने के लिए मुख्य प्रणाली से अलग करें । अगले 24 घंटे के लिए, मछली को तेजी से जारी रखें । पहले सप्ताह के दौरान, पोस्ट इंजेक्शन, मछली दैनिक जांच और किसी भी मृत मछली को हटाने के लिए कुछ किया जाना ।
