我们描述后fetilization(DPF)的斑马鱼幼虫诱发急性肾损伤(AKI)2天氨基糖甙类抗生素,庆大霉素,显微注射技术。我们还描述了一个整装免疫组织化学方法,塑料包埋,切片和斑马鱼幼虫形象化的AKI的介导的损伤。
在这个视频文章中,我们描述了AKI的斑马鱼模型为nephrotoxicant使用庆大霉素。该技术由静脉注射2 DPF斑马鱼microinjections。这项技术代表了一个高效,快速的方法来提供到斑马鱼幼虫体内的水溶性物质,从而为每小时15-20鱼注射。此外AKI的研究,这种显微注射技术也可以用于其他类型的实验研究,如血管造影。我们提供了一个详细的协议的技术设备所需的肾功能下降的视觉措施。此外,我们也证明了固定,整个装入一个肾曲小管标志,塑料包埋和幼虫斑马鱼切片免疫组化进程。我们表明,注射用庆大霉素表明斑马鱼幼虫形态特征符合亚希:水肿,细胞中的肾小管上皮细胞的极性损失,和肾小管形态破坏。
在这个视频文章中,我们展示了AKI的模型静脉显微注射技术,通过创建庆大霉素介导斑马鱼幼虫近端肾小管损伤。这种损害结果心包和/或严重水肿的形成,反映了无法调节水的平衡。我们还描述了一个标志着分化肾小管(马宗达等,2000)的一种抗体,免疫组织化学实验,显示损坏肾脏的肾小管上皮细胞极性和中断的损失。静脉microinjections代表到斑马鱼幼虫的血液提供一种可溶性物质的有效方法。这项技术是引进的多种物质的一个极好的工具,并用一种荧光标记统一注射的帮助,可反复多次超过允许一致的结果。
The authors have nothing to disclose.
这项工作是由美国国立卫生研究院(NIH)的赠款R01DK069403和P30DK079307研究院的资助。
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
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α6F mouse monoclonal | Developmental study Hbridoma Bank | |||
Block Holder EBH-2 | Polysciences, Inc. | 15899 | ||
Borosilicate Glass Capillaries | World Precision Instruments, INC | TW100-6 | ||
Capillary tubes R-6 Custom Glass Tubing | Drummond Scientific Company, Broomall PA | 9-000-3000 | ||
Catalyst Powder | Polysciences, Inc. | 02618 | ||
Cy3 | Jackson Immunoresearch Laboratories, Inc. | 155-165-003 | ||
Dextran 10k Lucifer yellow, lysine fixable | Molecular probes | D1825 | ||
DMSO | Sigma | D8418 | ||
Eyelash | Ted Pella | 113 | ||
Gentamicin sulfate | Sigma-Aldrich | G8648 | ||
Glass vials 4ml | Weathon | 225012 | ||
Iron plate | Nariscige | IP | ||
JB-4 Embedding Solution A | Polysciences Inc. | 0226A | ||
JB-4 Embedding Solution B | Polysciences, Inc. | 0226B | ||
Joystick micromanipulator | Narishige | MN 151 | ||
Magnetic stand | Narishige | MN-151 | ||
Manual microsyringe pump | World Precision Instruments, Inc | |||
Microinjection apparatus | World Precision Instruments, Inc. | PV820 | ||
Micromanipulator | World Precision Instruments, Inc. | M3301R | ||
Microtome | Thermo Electro Corporation | Shandon Finesse | ||
Mineral oil, light | Fisher Chemicals | 0121-1 | ||
Pipette puller | Kopf | 720 | ||
Plastic molding cup tray | Polysciences, Inc. | 16643A | ||
Razor blade | WVR Scientific | 55411-050 | ||
Slide warmer | Lab line | |||
Stage micrometer | Wards | 94 W 9910 | ||
Tilting base | World Precision Instruments, Inc. | TB 1 | ||
Tricaine powder | Sigma | A-5040 | ||
Tween 20 | Sigma | P7949 | ||
Microscope | Leica | S6F | Dissecting microscope | |
Microscope | Leica | M205FA | Fluorescent microscope |