Summary

Enterik Sinir Sistemi Alpha-sinüklein İçermelerin bir sonda ve Görüntü Analizi kullanarak Rotenone Oral İdaresi

Published: October 26, 2010
doi:

Summary

Parkinson hastalığı, pestisitlere maruz kalma ile ilgili olmuştur. Burada bir gastrik tüp istenen konsantrasyon ve enterik sinir sistemi alfa-sinüklein birikimi etkilerini analiz etmek için bir yöntem kullanarak pestisitler sağlamak için bir yöntem gösteriyor.

Abstract

Parkinson hastalığında (PH) olan hastalarda, ilgili patoloji, diğerlerinin yanı sıra enterik sinir sistemi (ENS) 1,2, koku ampul (OB), vagus (DMV) 3 dorsal motor çekirdeği, intermediolateral içeren bir karakteristik bir yol izler omurilik 4 ve substantia nigra çekirdeği, hastalığın 4,5 nöropatolojik evreleme için bir temel sağlamaktadır. ENS ve OB en çok maruz kalan sinir yapıları ve ilk etkilenecek olanlar. İlginçtir, PD pestisit maruziyetinin 6-8 ile ilgili olmuştur. Burada ayrıntılı olarak, önceki çalışmada 9 kullanılan iki yöntem gösteriyor . ENS üzerinde yerel olarak hareket rotenone etkilerini analiz etmek için, biz, bir yıl eski C57/BL6 fareler bir sonda kullanarak rotenone yönetilmektedir. Rotenone güçlü mitokondriyal Kompleksi Ben 10 inhibe yaygın olarak kullanılan pestisit. Bu yüksek lipofilik ve kötü gastrointestinal sistem 11 emilir. Bizim sonuçlarımız, 5 mg / rotenone kg yönetimi mitokondriyal Kompleksi kas veya beyin aktivitesi inhibe etmediğini gösterdi. Böylece, bizim yönetim yöntemi rotenone kullanarak hepatoportal sistemi çapraz vermedi ve sadece ENS üzerinde hareket ediyordu düşündüren. Burada pestisitler ENS alfa-sinüklein birikimi pestisit etkilerini analiz etmek için kullanılan bir sonda ve görüntü analizi protokolü kullanarak yönetmek için bir yöntem. Ilk bölümünde istenen hassas konsantrasyonda pestisitler (rotenone) intragastrik yönetimi sağlayan bir yöntem gösterir. İkinci yöntem, bir görüntü analiz yazılımı kullanarak ENS alfa-sinüklein birikimi analiz etmek için bir yarı-otomatik görüntü analiz protokolünü gösterir.

Protocol

1) Rotenone intragastrik İdaresi Hayvan tartılır. Gerekli rotenone / araç çözüm toplam hacmi hesaplayın. Bu durumda hayvan ağırlığı gram başına 0,01 ml. Önceden hesaplanmış rotenone çözüm hacmi (0.625 mg / ml rotenone,% 4 karboksimetilselüloz ve% 1.25 kloroform) veya araç çözüm (% 4 karboksimetilselüloz ve kloroform% 1.25) ile 1 ml şırınga şarj edin. Bu durumda, bir 5 mg / kg rotenone doz karşılık gelir. Öte yandan ilk iki parmakları ile çeker…

Discussion

Intragastrik yönetiminin daha önce 12 yapılmıştır . Ancak,% 0.5 karboksimetilselüloz sodyum tuzu (CMSS) tek başına Inden Kullanıcı el yazmasına göre, rotenone verildi çözülmüş. Rotenone yüksek bir liphophylic madde. Bu nedenle, rotenone yalnız% 0.5 CMSS içinde çözünmüş olamaz ve eğer bunu çöktürmek olacaktır. Kloroform yağış kaçınarak eşit olarak dağıtılmış bir rotenone süspansiyon oluşturur. Ayrıca, yüksek konsantrasyonlarda CMSS pestisit nedeniyle, uygulanan ç?…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

– Pedro Barrie de la Maza Vakfı bu çalışmaları destekledi.

Materials

Material Name Type Company Catalogue Number Comment
Rotenone   SIGMA-Aldrich R8875 Germany
Chloroform   Carl Roth 3313.1 Germany
Carboxymethylcellulose   SIGMA-Aldrich C5678 Germany
Gavage 1,2 mm x 60 mm   Unimed   Switzerland
LSM 510   Zeiss Microscopes    
FIJI   http://pacific.mpi-cbg.de    

References

  1. Braak, H., de Vos, R. A., Bohl, J., Del Tredici, K., K, . Gastric alpha-synuclein immunoreactive inclusions in Meissner’s and Auerbach’s plexuses in cases staged for Parkinson’s disease-related brain pathology. Neurosci Lett. 396, 67-72 (2006).
  2. Wakabayashi, K., Takahashi, H., Ohama, E., Ikuta, F. Parkinson’s disease: an immunohistochemical study of Lewy body-containing neurons in the enteric nervous system. Acta Neuropathol. 79, 581-583 (1990).
  3. Wakabayashi, K. Restricted occurrence of Lewy bodies in the dorsal vagal nucleus in a patient with late-onset parkinsonism. J Neurol Sci. 165, 188-191 (1999).
  4. Braak, H., Sastre, M., Bohl, J. R., de Vos, R. A., Del Tredici, K. Parkinson’s disease: lesions in dorsal horn layer I, involvement of parasympathetic and sympathetic pre- and postganglionic neurons. Acta Neuropathol. 113, 421-429 (2007).
  5. Braak, H., Ghebremedhin, E., Rub, U., Bratzke, H., Del Tredici, K. Stages in the development of Parkinson’s disease-related pathology. Cell Tissue Res. 318, 121-134 (2004).
  6. Gorell, J. M., Johnson, C. C., Rybicki, B. A., Peterson, E. L., Richardson, R. J. The risk of Parkinson’s disease with exposure to pesticides, farming, well water, and rural living. Neurology. 50, 1346-1350 (1998).
  7. Semchuk, K. M., Love, E. J., Lee, R. G. Parkinson’s disease and exposure to agricultural work and pesticide chemicals. Neurology. 42, 1328-1335 (1992).
  8. Butterfield, P. G., Valanis, B. G., Spencer, P. S., Lindeman, C. A., Nutt, J. G. Environmental antecedents of young-onset Parkinson’s disease. Neurology. 43, 1150-1158 (1993).
  9. Pan-Montojo, F. Progression of Parkinson’s disease pathology is reproduced by intragastric administration of rotenone in mice. PLoS One. 5, e8762-e8762 (2010).
  10. Sherer, T. B. Mechanism of toxicity in rotenone models of Parkinson’s disease. J Neurosci. 23, 10756-10764 (2003).
  11. Bove, J., Prou, D., Perier, C., Przedborski, S. Toxin-induced models of Parkinson’s disease. NeuroRx. 2, 484-494 (2005).
  12. Inden, M. Neurodegeneration of mouse nigrostriatal dopaminergic system induced by repeated oral administration of rotenone is prevented by 4-phenylbutyrate, a chemical chaperone. J Neurochem. 101, 1491-1504 (2007).

Play Video

Cite This Article
Pan-Montojo, F. J., Funk, R. H. Oral Administration of Rotenone using a Gavage and Image Analysis of Alpha-synuclein Inclusions in the Enteric Nervous System. J. Vis. Exp. (44), e2123, doi:10.3791/2123 (2010).

View Video