Summary

Устные Администрации Ротенон использованием принудительного кормления и анализ изображений Альфа-синуклеина включений в кишечной нервной системы

Published: October 26, 2010
doi:

Summary

Болезнь Паркинсона была связана с воздействием пестицидов. Здесь мы показываем, метод для доставки пестицидов помощью желудочного зонда на нужной концентрации и метод для анализа их влияния в альфа-синуклеина накопления в кишечной нервной системы.

Abstract

При болезни (PD) Паркинсона пациентов, сопутствующей патологии следует характерная картина с участием, в частности, кишечной нервной системы (ENS) 1,2, обонятельной луковице (OB), спинной ядра двигатель блуждающего (DMV) 3, intermediolateral ядре спинного мозга и 4 черной субстанции, что обеспечивает основу для постановки нейропатологических заболевания 4,5. ENS и ОВ наиболее подверженных нервных структур и первыми пострадают. Интересно, что PD было связано с пестицидами 6-8. Здесь мы показываем, подробно двух методов, используемых в нашем предыдущем исследовании 9. Для того чтобы проанализировать последствия ротенон действовать локально на ENS, мы вводить ротенон помощью желудочного зонда до одной летний C57/BL6 мышей. Ротенон является широко используются пестициды, что сильно тормозит митохондриального комплекса I 10. Очень липофильными и плохо всасывается в желудочно-кишечном тракте 11. Наши результаты показали, что введение 5 мг / кг ротенон не ингибирует митохондриальный комплекс Я активности в мышцах или головном мозге. Таким образом, предполагая, что с помощью нашего метода администрации ротенон не пересекали портальный системы и действовал исключительно на ENS. Здесь мы показываем, метод для управления использованием пестицидов зонд и протокола анализа изображений используется для анализа воздействия пестицидов в альфа-синуклеина накопления в ENS. Первая часть показывает метод, который позволяет внутрижелудочного введения пестицидов (ротенон) на желаемую точные концентрации. Второй метод показывает, полуавтоматическая анализа изображений для анализа протоколов альфа-синуклеина накопления в ENS использованием программного обеспечения для анализа изображений.

Protocol

1) внутрижелудочного введения Ротенон Взвесьте животных. Рассчитать общий объем ротенон / транспортное средство решения необходимо. В этом случае 0,01 мл на грамм веса животного. Зарядка 1 мл шприц с ранее расчетный объем ротенон решение (0,625 мг / мл ротенон, 4% карбоксимети?…

Discussion

Внутрижелудочного введения была ранее выполнявшего 12. Однако, по рукописи Inden, в ротенон вводили растворенный в 0,5% соли карбоксиметилцеллюлозы натрия (CMSS) в одиночку. Ротенон является высокая liphophylic вещества. Таким образом, ротенон не может быть распущен в 0,5% CMSS в одиночку и будет ?…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Барри Педро де ла Маса Фонд поддержал эту работу.

Materials

Material Name Type Company Catalogue Number Comment
Rotenone   SIGMA-Aldrich R8875 Germany
Chloroform   Carl Roth 3313.1 Germany
Carboxymethylcellulose   SIGMA-Aldrich C5678 Germany
Gavage 1,2 mm x 60 mm   Unimed   Switzerland
LSM 510   Zeiss Microscopes    
FIJI   http://pacific.mpi-cbg.de    

References

  1. Braak, H., de Vos, R. A., Bohl, J., Del Tredici, K., K, . Gastric alpha-synuclein immunoreactive inclusions in Meissner’s and Auerbach’s plexuses in cases staged for Parkinson’s disease-related brain pathology. Neurosci Lett. 396, 67-72 (2006).
  2. Wakabayashi, K., Takahashi, H., Ohama, E., Ikuta, F. Parkinson’s disease: an immunohistochemical study of Lewy body-containing neurons in the enteric nervous system. Acta Neuropathol. 79, 581-583 (1990).
  3. Wakabayashi, K. Restricted occurrence of Lewy bodies in the dorsal vagal nucleus in a patient with late-onset parkinsonism. J Neurol Sci. 165, 188-191 (1999).
  4. Braak, H., Sastre, M., Bohl, J. R., de Vos, R. A., Del Tredici, K. Parkinson’s disease: lesions in dorsal horn layer I, involvement of parasympathetic and sympathetic pre- and postganglionic neurons. Acta Neuropathol. 113, 421-429 (2007).
  5. Braak, H., Ghebremedhin, E., Rub, U., Bratzke, H., Del Tredici, K. Stages in the development of Parkinson’s disease-related pathology. Cell Tissue Res. 318, 121-134 (2004).
  6. Gorell, J. M., Johnson, C. C., Rybicki, B. A., Peterson, E. L., Richardson, R. J. The risk of Parkinson’s disease with exposure to pesticides, farming, well water, and rural living. Neurology. 50, 1346-1350 (1998).
  7. Semchuk, K. M., Love, E. J., Lee, R. G. Parkinson’s disease and exposure to agricultural work and pesticide chemicals. Neurology. 42, 1328-1335 (1992).
  8. Butterfield, P. G., Valanis, B. G., Spencer, P. S., Lindeman, C. A., Nutt, J. G. Environmental antecedents of young-onset Parkinson’s disease. Neurology. 43, 1150-1158 (1993).
  9. Pan-Montojo, F. Progression of Parkinson’s disease pathology is reproduced by intragastric administration of rotenone in mice. PLoS One. 5, e8762-e8762 (2010).
  10. Sherer, T. B. Mechanism of toxicity in rotenone models of Parkinson’s disease. J Neurosci. 23, 10756-10764 (2003).
  11. Bove, J., Prou, D., Perier, C., Przedborski, S. Toxin-induced models of Parkinson’s disease. NeuroRx. 2, 484-494 (2005).
  12. Inden, M. Neurodegeneration of mouse nigrostriatal dopaminergic system induced by repeated oral administration of rotenone is prevented by 4-phenylbutyrate, a chemical chaperone. J Neurochem. 101, 1491-1504 (2007).

Play Video

Cite This Article
Pan-Montojo, F. J., Funk, R. H. Oral Administration of Rotenone using a Gavage and Image Analysis of Alpha-synuclein Inclusions in the Enteric Nervous System. J. Vis. Exp. (44), e2123, doi:10.3791/2123 (2010).

View Video