Summary
マイクロバブルのInsonationは減少時間平均音響パワーで、同様に治療薬の標的化送達のための腫瘍切除のための有望な戦略である。本研究の目的は、皮下C6神経膠腫への非熱的血管アブレーションとペイロードの配信を最大にするためには、低いデューティサイクルの超音波パルス化戦略とナノキャリアを開発することである。
Abstract
我々は、透過性および/または微小血管系のアブレーションが超音波パルス化パラメータを変えることによって制御される低侵襲造影剤マイクロバブルベースの治療法を開発しています。具体的には、このようなアプローチは、薬物送達および微小血管アブレーションによって悪性の脳腫瘍を治療するために使用することができるかどうかをテストしています。予備研究は、標的薬物ベアリングナノ粒子の配信が100nmのポリ（ラクチド- co -グリコリド）（PLAGA）アルブミン殻を気泡に付着しているナノ粒子から成る"複合材料"配信エージェントの超音波の介在の破壊によって促進することができるかどうかを判断するために行われている。我々は、マイクロバブル、ナノ粒子複合剤（MNCAs）としてこれらのエージェントを表す。超音波で皮下C6神経膠腫を対象としたとき、我々はマイクロバブルナノ粒子と非処理腫瘍上8.5倍と同時投与で治療された腫瘍上MNCA処置された腫瘍のナノ粒子の配信が即座に4.6倍増加を観察した。さらに、多くの癌のアプリケーションでは、我々はそれが腫瘍の低酸素症とアポトーシスにつながる腫瘍微小循環、のアブレーションと一緒にターゲットを絞った薬物送達を行うことが望ましい場合があると信じています。この目的のために、我々はこのアプローチは、腫瘍灌流の減少、アポトーシス、大幅な成長の阻害、および壊死を誘発することを示す、非theramalキャビテーション誘発性血管アブレーションの有効性をテストしている。一緒に取られて、これらの結果は私たちの超音波をターゲットとしたアプローチは、微小血管のアブレーションおよび/または同時に神経膠腫の薬のペイロードを強化を通して腫瘍壊死を作成することにより、治療効率を向上させる可能性を秘めていることを示している。
Protocol
1。マイクロバブルの生産
- アルブミンマイクロバブルを（MBS）を準備するために、水相、上記ガスのブランケット（オクタフルオロプロパン）とフラスコで生理食塩水で血清アルブミンの1％溶液を置きます。簡単に言えば、拡張½"チタンプローブを備えた超音波粉砕機を備えたソリューションを（30秒）超音波処理。この製剤は、0.5〜1.2 × 10 9 MB単位/ mlの濃度範囲で提供されているOptison（GE Heathcare）、似ている。マルチサイザーコールターカウンターによるMBの直径を意味する。本研究で使用したアルブミンの平均MBの直径は1.93umいた± 1.63um決定する。
- 脂質のMBを製造するために、1 mg / mLのポリエチレングリコール- 40ステアリン酸（シグマケミカル社、セントルイス、MO）及び2 mg / mlのジステアロイルホスファチジルコリン（アバンティ極性脂質、アラバスタ、AL）の水性分散液を調製し、前述のようにsonciate decafluorobutaneガスを（1.1）に記載。マルチサイザーコールターカウンターでMBの平均直径が決まります。本研究で使用した平均脂質MBの直径は、2.01um ± 1.29umであった。
2。ナノ粒子の作製
- これらのメソッドは、Davda（2002）とチャペル（2008）によって記述された水中油中水型エマルション溶媒蒸発法から適応させた。
- 脱イオン（DI）水1000mlにPVAの20gを溶解することによって2％のポリ（ビニルアルコール）PVA溶液を準備します。ソリューションが完全に一晩撹拌プレート上解散することができます。 0.22μm滅菌フィルターで10分、フィルターを1000rpmで遠心分離ソリューションでは、任意の残留溶解していないPVAを除去する。
- ウシ血清アルブミン（BSA）、ロードされたポリ（乳酸 - コ - グリコール酸）（PLAGA）ナノ粒子（ナノ粒子）を作製するために、ガラスシンチレーションバイアルに6ミリリットルの塩化メチレン（MC）で上限なし85:15 PLAGAの180mgを溶解する。 2分間ボルテックスMC / PLAGAソリューション。
- PBS 1.5 mlに、目的のペイロード（BSAの15mg）を溶解する。断続的にボルテックスしながらPLAGA / MC解決する2つの部分にPBS / BSA溶液を加える。場所は5分、氷上でのソリューションと120秒のために45Wで超音波処理。
- 中間にボルテックスしながら2回に分けて、2％PVAの24ミリリットルにMC / PLAGA /ペイロード/ PBS溶液を加える。
- 5分氷上にソリューションを配置し、120のために45Wで超音波処理。
- MCとNP安定化の蒸発を可能にするためにはドラフト内で撹拌プレート上で12時間NPエマルジョンをかき混ぜる。
- ° C回NPSを分離し、残留PVAを除去するために4℃20,000 rpmで25分のためのサスペンションを遠心する。 4時1000年RMPで10分間、純水と遠心の8ミリリットルでペレットを再懸濁します° CはNPの100nmの人口を分離する。
- 上清とフラッシュが-80、それを凍結℃に48時間凍結したサンプルを凍結乾燥分離する。 -80デシケーター中で凍結乾燥粒子を保管° Cを使用時まで。
3。複合送達媒体の作製（プロトコルはVisEn化学ノートから引用）
- カルボキシ表面の機能にVivoTag680の変換
- 1.0 M HEPES、pHを7と25μLのDMSOの無水コハク酸（2.5 mgを、25 ìmol）50μLをVivoTag680の1バイアルを組み合わせる。十分に混合し、このソリューションに1.0 M NaOHを50μLを追加し、溶液が光から保護されて、室温で2時間反応することができます。 0.1 M MES緩衝液（pH6.0）で溶出するBio - Rad社バイオゲル（P100、培地）を用いて浄化する粒子。グリーンバンドを集める。
- カルボキシ変性VivoTag680の活性化
- 1mgの1 - エチル-3 - （3 - ジメチルアミノプロピル） - カルボジイミド（EDC）とN - hydroxysulfosuccinimide（スルホ- NHS）2.2ミリグラムで、0.1 M MES緩衝液、pH 6で得られたカルボキシ変性VivoTag680を組み合わせる。室温で2時間反応することができます。
- 0.1 M MES緩衝液、pH6.0で溶出するバイオラッドバイオゲルを（P100、培地）を用いたゲル濾過による過剰な活性化剤（EDC）から活性粒子を精製すると緑色のバンドを集める。すぐにアミン含有分子（例えばBSA -ロードされたナノ粒子）の活性粒子を共役。溶液を室温で2時間反応することができます。アミン共役ナノ粒子は、4℃で60分、20,000 rpmで遠心分離遠心分離後上清を注ぎ、0.1 MES緩衝液中で再懸濁することにより過剰なEDCから精製した。
- 薬物送達の研究のためのVivoTag680タグ付きナノ粒子を作製するためにここで終了。
- アルブミンマイクロバブルのカルボキシ変性PLGA - BSA - VivoTag680ナノ粒子（NP680）の抱合
- 1mgの1 - エチル-3 - （3 - ジメチルアミノプロピル） - カルボジイミド（EDC）とN -ヒドロキシスルホスクシン（スルホ- NHS）の2.2 mgを0.1 M MES緩衝液、pH 6で得られたNP680を組み合わせる。溶液を室温で1時間反応することができます。
- 遠心分離後上清を注ぎ、4℃で60分、20,000 rpmで遠心分離することによって過剰なEDCから活性化ナノ粒子を精製する。再懸濁し、0.1 MES緩衝液中でナノ粒子。
- アルブミンMB単位のソリューションから過剰BSAを除去する脱気したPBSで3回洗浄する。
- すぐにアミン含有分子（例えば、アルブミンマイクロバブル）に活性化粒子を共役。 NP680溶液が室温で2時間反応することができます。脱気したPBSで3回洗浄して非連結NP680sからNP680共役マイクロバブル（MNCA）を精製する。
- コールターカウンターを使用してMNCAsの濃度を決定する。
（4）腫瘍モデル
すべての動物実験では、バージニア州の動物実験委員会の大学で承認された動物のプロトコルに準拠していた。
- C6 Gilomaのラットの腫瘍細胞株は、UVAの博士ジェイソンシーハン（シャーロッツビル、バージニア州）で提供されていました。
- セルラインは、細胞がマイコプラズマ自由だった確実にテストされています。
- 37で16％ウマ血清、3％ウシ胎児血清（FBS）と1％ペン連鎖球菌、（ギブコ、米国）℃、5％CO 2を添加したF - 12K栄養混合溶媒中での細胞株を維持する。
- 左後肢に皮下PBSを300μlに懸濁した3 × 10 6 C6 Gilomaの腫瘍細胞をC57BLJ6/Rag1マウス（ジャクソン）を接種する。 8〜10ミリメートルの最大直径を達するために12日間成長する腫瘍を許可。
（5） 生体内の超音波の応用で
- 治療に先立って塩酸ケタミン（60 mg / kg体重）及びキシラジン（0.1 mg / kg体重）の腹腔内（IP）の組み合わせの注射でマウスを麻酔。
- メンテナンス塩酸ケタミンの麻酔（20 mg / kg体重）及びキシラジン（0.3 mg / kg体重）を準備する。必要に応じて管理する。
- MB、MB / NPまたはMNCA液の静脈内（IV）投与のために各動物の尾静脈にカニューレを挿入する。
- 腫瘍血流の測定
- IVは、持続注入ポンプ（;ハーバード装置、ホリストン、マサチューセッツハーバード装置PHD 2000）に15μl/minの速度で脂質のMBのソリューション（0.9％生理食塩水0.3 mlの1 × 10 8 Mバイト/ g体重）煎じる。
- 8 13 MHzのリニア15L8プローブを備えたAcusonセコイア512超音波検査システム（シーメンスメディカルソリューションズ、マウンテンビュー、カリフォルニア州）は、造影腫瘍の血流を定量化するために本研究で使用されていました。水ベースの超音波ゲル（;パーカーラボラトリーズ、（株）、フェアフィールド、ニュージャージー州パーカーラボラトリーズAquasonic 100）と腫瘍のカップルは15L8プローブ。最高の結像面を得るためにB -モードでの腫瘍をスキャンします。
- コントラストパルスシーケンス（CPS）モードでは、13Hzのフレームレートで高振幅の"バースト"のパルスを5秒前に連続的なビデオキャプチャーマイクロバブルの信号強度を取得し、20以下。 fourイメージング平面内で測定を繰り返します。
- アルブミンMBを注入し、脂質のMBSは、循環からクリアできるようにする治療低周波治療を開始する10分待ち。
- 治療超音波治療
- 脇腹の腫瘍上の皮膚に、腫瘍血流の測定（5.3）より0.75 ''直径1 MHzの焦点の定まらないトランスデューサー（パナメトリクス、ウォルサム、マサチューセッツA314S）に続く10分。 IVは、アルブミンMB（0.9％生理食塩水0.3 mlの1 × 10 5のMB / gの体重）、MB / NP（0.9％0.3 mlの1 × 10 5のMB / Gと0.2 UGのナノ粒子/ gの体重生理食塩水）またはを吹き込むMNCA溶液（0.9％生理食塩水0.3 mlの1 × 10 5 MNCAs / g体重）。
- ドラッグデリバリー治療
- NPS、MBSおよびNPの同時注射、またはMNCAs（5.4.1）の持続注入時に"1 -バースト"パルスシーケンス（5.4.2.2）で60分のためのInsonate。
- "1 -バースト"脈打つシーケンスは、100回連続1 MHzの正弦波（デューティサイクル= 0.00002）波形発生器からのピーク振幅1Vのピークの各々（;テクトロニクス、オレゴン州ビーヴァートンAFG - 310）で構成されています。パワーアンプと55デシベルRF（;電子航法工業、リチャードソン、テキサス州ENI 3100LA）により、波形の信号を増幅する。
- アブレーション治療
- パルスシーケンス - "5 -バースト中"または"拡張5 -バースト"としかしinsonate、5.4.2.1と同じ
- "5 -バーストミディアム"パルスシーケンスは、5000 1 MHzの正弦波（デューティサイクル= 0.005）1Vのピークツーピークの振幅の各々で構成されています。 "5 -バーストExteneded"パルスシーケンスは、10000 1 MHzの正弦波（デューティサイクル= 0.01）1Vのピークツーピークの振幅の各々で構成されています。
- 実験モニター腫瘍温度の経時変化の間に腫瘍に針熱電対プローブ（オメガT -タイプ、HYP1-30-1/2-TG-60-SMPW-M）2センチメートルを挿入することによって。記録温度測定は5分ごと。
- としての治療、治療後5.3、10分で説明されている腫瘍灌流の測定を繰り返します。
6。腫瘍灌流の定量化
- セコイアのCPSプログラムを使用して、ACQモードに入ります。目を選択します。完全な腫瘍体積を包括利益のE領域。灌流の回復曲線は、フォームから生成されるY = A（1 - E -βT）+ C（Sadlowski 2002;クロマ2001;葉2004）CPSのデータに合わされるように。 β、赤血球の速度、前処理と後処理の相対的な尺度を評価する。
- オフライン解析のためのCPSファイルをエクスポートします。 aviファイルにデータを変換する。フレームごとの画像シーケンスにaviファイルを分割します。インテルCompaq Visual Fortan、または類似のソフトウェアパッケージを使用して、時間が破壊的なパルスに続く破壊的なパルスから8秒にすべてのフレームの画像を平均生成する。
- 灌流腫瘍領域を決定するには、ImageJのソフトウェアを使用して、8咬傷時に247の閾値を適用するCPSの画像を平均化し、腫瘍体積内にパーセント強化されたピクセルを定量化する。時間で対応するBモード画像を重ね合わせるには正確に腫瘍領域を定義するために閾値画像を平均した。
- 平均パーセントは、特定の腫瘍のために与えられた時点で最終的な潅流領域を取得する4つのCPSクリップの最小の領域を灌流。
- 相対的な腫瘍血流を決定するパーセント灌流領域（6.4）とβ（0.1）の積を取る。
7。腫瘍のナノ粒子の生体内分布
- 前の低alfasprot食（ハーラン、インディアナポリスIN）で蛍光標識ナノ粒子の代わりにマウスでの治療に12日間は通常のマウスチャウイメージングによって引き起こされる自己蛍光を低減する。
- すべての毛を削除するイメージングサイト（肝臓への側面）をシェーブ。
- このようなNairさんなどの化学脱毛剤、残留する毛を取り除きます。
- 全ての残留化学物質の脱毛剤のすすぎや化学燃焼が発生する可能性があります。
- として5.4.2で説明されて治療後の治療、0、1、4、および24時間前FMTシステム（VisEnメディカル）上の画像のマウス。
- イメージングの前には、塩酸ケタミン（60 mg / kg体重）及びキシラジン（0.1 mg / kg体重）のIPの組み合わせを注入してマウスを麻酔。イメージングカートリッジの上に置いてマウス。白色光と蛍光灯モードで反射率の画像を取得する。 VT680チャンネルで蛍光断層イメージングを行う。
- 正規化されたボーン式を利用して画像データの3次元再構成を生成するためにFMTソフトウェアを採用しています。再建に続いて、全3イメージング平面（X、Y、Z）に関心領域（ROIの）を描画することにより、関心のボリューム（VOIの）を選択します。蛍光標識BSAナノ粒子による平均蛍光値と合計VOIの体積と蛍光色素濃度は、、VOIのは、足と肝臓を網羅するために生成されます。
8。腫瘍成長率
- デジタルキャリバーを使用して毎日測定を行うことにより腫瘍体積を評価する。楕円体近似を用いて腫瘍体積を計算し、V = 1 / 6πABC。ここで、a、b、およびcは、3つの直交する平面で測定された腫瘍の最大径です。
9。腫瘍の処理と解析
- 治療の安楽死の動物後7日間。 2％の10ミリリットルと左心室と血を抜く血液をカニューレを挿入するには、10ミリリットルトリス塩化カルシウム緩衝液（0.68 mM）の、100 mmHgの10分間ごとに続いてトリスのCaCl 2緩衝液（0.68 mM）を灌流し、ヘパリン化。
- 100 mmHgので10分のためのPBS中4％パラホルムアルデヒド（4 ° C）の注入による灌流フィックス組織。サンプルは60分間固定することができます。
- 物品税標本は、パラフィンに埋め込み、5ミクロンの切片に切断。
- 超音波暴露の結果として発生した可能性のある組織学的変化を評価する標準的なヘマトキシリン - エオシン染色を行います。
- アポトーシス細胞を検出するには、ターミナルデオキシヌクレオチジルトランスフェラーゼを介したデオキシウリジン三リン酸ニック末端標識（TUNEL）アッセイ（ApoptTagキット、Intergen（株）、アトランタ、ジョージア州、米国）を使用します。
10。代表的な結果
1。ナノ粒子の作製（2.0）
- このプロトコルは、光散乱法によって決定される、NPは、形状が球形になるように電子縮小コピーを作る（SEM）を走査することによって決定され、100nmの周りのガウス分布を持って適切に予備成形されている場合。代表的な結果を図1に示されています。
2。標的ドラッグデリバリー（5.4.1）
- 我々の研究室（ソング2002、チャペル2008年）及び図2に、腫瘍組織への血管内ナノ粒子の増加した輸送における超音波マイクロバブルの破壊の結果に存在する未発表の結果で実施発表された研究に基づく。我々はまた高められたナノ粒子の配信における当社MNCAの配信技術の結果はすぐに治療を以下のことが示されている。
3。腫瘍アブレーション（5.4.3）
- 我々は、比較的低デューティサイクルではその長引く超音波マイクロバブルの破壊、（0.005〜0.01）、の機械的なアブレーションの結果が示されている腫瘍の成長の腫瘍の微小血管系と回帰。 （II）腫瘍血行動態（図4）、（ⅲ）壊死領域、および（iv）アポトーシスこのプロトコルが正しく実行される場合、1つは、腫瘍の成長（図3）の（i）速度の変化を想定する必要があります。
BSAが付いたPLAGAナノ粒子の1。特性図 。きちんとつくられたナノ粒子の（A）SEM像。不適切に製造されたナノ粒子の（B）のSEM像。
図2超音波の（）蛍光を介したトモグラフィー（FMT）の画像が（一番下）治療（上）と処理した対照皮下神経膠腫ナノ粒子（NPは）680蛍光シグナルが上に重畳されている軸受されているMNCAs、直ちに以下の処置は、平面グレースケール励起光のイメージ。
図3。五バースト拡張パルス化プロトコルを持つマイクロバブルinsonation以下の腫瘍の成長の代表倍に変化。
図4 B -モード（A、C）と造影超音波検査（B、D）マウスでの皮下C6グリオーマ腫瘍の画像。最初の前処理の画像（）で主に低エコーの腫瘍の境界は青でトレースされています。造影剤の静脈注射後の時間の平均値の向上は、（B）前処理に示されています。治療後は、造影前に、腫瘍は再び（D）主に低エコーである。造影後、腫瘍が有意に少なく強化があります。
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Discussion
重要なステップ
マウスの尾静脈のカニュレーション：
マウスの尾静脈に静脈注射が困難なプロシージャを指定できます。しかし、尾静脈カテーテルは、大きく成功するインジェクションの可能性を向上させることができます。それは、ハブから解除するまでカテーテルを作るために、繰り返し前後に25ゲージの針を曲げ。 PE 20チューブの端に平滑末端を挿入し、シリコン接着剤との接続をシールします。カニュレーションのためにカテーテルを準備するには、キャサに生理食塩水ヘパリン1％ロードされたシリンジを接続し、カテーテルのデッドスペースに液体を注入する。外側尾静脈が表示されているので、その側に麻酔マウスを合わせます。暖かい水（ - 110 ° F 105 °）と尾を広げる。静脈に針を挿入します。成功した血液は、通常、カテーテルを入力する場合。針は、生理食塩水に少量の静脈をクリアすることで静脈になっていることを確認します。輸液ポンプにシリンジを接続する前にテープでカテーテルを固定します。
ナノ粒子の再懸濁。
ナノ粒子は凝集体は、次凍結乾燥することがあります。 PBSで再懸濁し、粒子、超音波ウォーターバスで繰り返しボルテックスと超音波処理について簡単に（10秒）。それは適切に凍結乾燥サンプルを再懸濁することが重要です。凍結乾燥および再懸濁、以下のSEM顕微鏡や光散乱法とサスペンションを特徴づける。
実行可能な変更：
ナノ粒子製造のプロトコルを調整するという点で、BSAは、サロゲート薬として機能し、治療薬の多くのために交換することができます。治療薬の溶解度に応じて、ナノ粒子は、水中油型エマルジョンとして、または油中水中油型エマルションとして製造することができる。必要に応じてPLAGAナノ粒子からの治療剤の積載効率と放出は、また大幅に調整されることがあります。積載効率を高めるために、NP製造パラメータの最適化を介してポリマーのキャリアに薬物の重量/重量の負荷を増加させる。調整治療薬の放出速度に、分子量の変化とPLAGAの乳酸/グリコール比を経由して加水分解速度定数を変化する。積載効率と治療薬の放出速度の両方をtalioringことにより、PLAGA NPSでとから、希望の局所濃度が組織に送達することができる。配信プロトコルの調整の面では、最も重要な要因は、超音波MNCA破壊し、微小血管透過性の度合いです。それは、アルブミン、シェルでマイクロバブルは、1.3の半減期は± 0.69分（平均± SD）（Optison 2008）があることが報告されている。我々は、連続的なエージェントの注入と長引く超音波のアプリケーションが微小血管透過性の程度を増加すると仮定した。増加する処理時間によって我々は、一過性微小血管の透過性を高めることを目指しています。
非熱的機械的なアブレーションのプロトコルは、MBの濃度や超音波のピーク圧力を変えることによって調整されることがあります。それはMBの濃度および/または超音波のピーク圧力を増加させると、腫瘍血管系への損傷の度合いを高めることが期待されます。
アプリケーション：
我々は、所望の治療効果を達成するために経頭蓋高密度焦点式超音波（HIFU）で必要とされる音響パワーを低減する技術を開発しています。
周囲の組織の頭蓋骨と重要性を介して治療に関連する合併症のため一部で、高強度集束超音波（HIFU）による熱腫瘍組織の切除はまだ脳腫瘍の治療オプションとして広く普及を達成していない。臨床列車の最初の3人の患者からの予備的な結論は、頭蓋加熱（McDannold 2009）のサブアブレーティブ焦点温度の結果で脳深部HIFUの治療を示している。脳腫瘍の頭蓋治療のための臨床治療としてHIFUの成功の鍵は、適切に区切られた領域に音響エネルギーの配信をローカライズする能力です。音響エネルギーを提供する能力は、頭蓋骨と超音波のエネルギーが伝播経路（Tanter 1998）に沿って減衰するように位相とパワー収差を生成する前の外科的切除、として、骨や空気のインターフェイスによって複雑になる。これらの収差は、多くの場合、事前に焦点加熱（McDonnald 2009）と健康な組織のキャビテーションに寄与する。
過去数年にわたり、ターゲットを絞った、可逆BBBの中断や腫瘍の切除のための音響パワーを下げるためにマイクロバブルを使用すると、（; 2006B、Meairs 2005 Hynynen 2001、Sheikov 2004年McDannold 2006A）多くの研究の関心を集めている。 McDannold ら （2006A）は、HIFU治療の時の微小気泡の血管内注入が91％削減をもたらしたことが実証されているはマイクロバブルが低下した温度の上昇とともに病変を生成するための可能性を示し、存在していないれたコントロールと比較して機械的な損傷のための時間平均音響パワーのしきい値。順番に病変を形成するための熱閾値を小さくすると、オフ標的組織または骨の熱の蓄積の確率を低下させる。さらに、病変形成に必要なものよりも大きさの約2桁低い力を持つ一時的な、ローカライズされた、BBBの開口部に超音波治療の結果の時にマイクロバブルの静脈内投与することが示されている。
それは、経頭蓋HIFUで必要とされる低音響パワーの両方に超音波、マイクロバブル技術を開発し、微小血管透過性の度合いを制御するには、この作業の目標です。脳のこの作品の二つの特定治療への応用は、薬物送達と非熱的アブレーションをターゲットにしています。透過性の増大や恒久的なアブレーションの相対的なレベルは重点が改善された薬物送達、恒久的な微小血管の切除、または薬物送達および永久的な微小血管アブレーションの組み合わせに基づいているかどうかに応じて、音響パワーレベルを調節することによって制御することができます。血管の応答方法を制御するために、この潜在的な能力は、特定の経頭蓋治療用途のための私達の治療戦略の異なる順列を開発する機会を作成します。我々は、このアプローチは、脳の腫瘍がどのように扱われるか大幅に変革させる可能性があると考えています。
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Disclosures
利害の衝突は宣言されません。
Acknowledgments
NIH R01 HL74082、ハートウェル財団、および集束超音波手術Foundationによってサポートされています。
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| ApoptTag kit | Intergen Co. | S7110 | |
| un-capped 85:15 poly(lactic-co-glycolic acid) (PLAGA) | Lakeshore Biomaterials | Custom | |
| Vivo Tag 680 | VisEn Medical | 10120 | Used to Tag BSA |
| Poly(vinyl alcohol) | Sigma-Aldrich | 363136 | |
| MicroTip Sonicator | Misonix | S-4000 | |
| Sequoia | Simons Medical | P.O.A | Equipped with CPS |
| FreeZone 2.5 | Labconco Corp. | 7670020 | Equipped with Nitrogen Trap |
| Methylene chloride (CH2Cl2) | Fisher Scientific | D37-500 | |
| FMT 250 | VisEn Medical | P.O.A | |
| F-12K Nutrient Mixture | GIBCO, by Life Technologies | 21127-022 | |
| polyethyleneglycol-40 stearate | Sigma-Aldrich | 9004-99-3 | |
| distearoyl phosphatidylcholine | Avanti Polar Lipid, Inc | 770365 | |
| Multisizer Coulter Counter | Beckman Coulter Inc. | P.O.A | |
| Waveform Generator | Tektronix, Inc. | AFG-310 | |
| water-based ultrasound gel | Parker Laboratories Inc. | Aquasonic 100 | |
| Infusion pump | Harvard Apparatus | Harvard Apparatus PHD 2000 | |
| 1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)-carbodiimide (EDC) | Pierce, Thermo Scientific | 25952-53-8 | |
| N-hydroxysulfosuccinimide (Sulfo-NHS) | Pierce, Thermo Scientific | 106627-54-7 | |
| Succinic anhydride | Sigma-Aldrich | 603902 | |
| Power Amplifier | Electronic Navigation Industries | ENI 3100LA | |
| Needle Thermocouple Probe | Omega Engineering, Inc. | HYP1-30-1/2-T-G-60-SMPW-M | |
| BioGel (P100, medium) | Bio-Rad | 150-4170 | |
| .75’’ diameter 1 MHz unfocused transducer | Panametrics | A314S |
References
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