Dang virüsü için potansiyel refrakter olarak bir gen tespit edildikten sonra, bu sivrisinek içinde viral enfeksiyonların önlenmesinde rolü için değerlendirilmesi gerekmektedir. Bu protokol, dang sivrisinek enfeksiyonların ölçüde test nasıl göstermektedir. Kültür, membran beslenmesi sivrisinek insan kanı virüs büyüyor ve sivrisinek midgut viral titreleri assaying teknikler gösterilmiştir.
Bu prosedürün amacı, bir laboratuvar durumu dang virüsü ile enfekte Aedes sivrisinek ve sivrisinek dokularda enfeksiyon ve virüs dinamik incelemek için. Bu protokol rutin özellikle vektör yetkinlik belirlemek mümkün roman ana faktörlerin belirlenmesi, sivrisinek-virüs etkileşimleri çalışmak için kullanılır. Tüm deney bir BSL2 laboratuarda yapılmalıdır. Plasmodium falciparum enfeksiyonları için uygun kıyafetleri, eldiven ve laboratuvar önlüğü dahil olmak üzere her zaman takılmalıdır. Deney sonra, virüs ile temas halinde gelen tüm malzemeler, normal yıkama ile devam etmeden önce% 75 etanol ve ağartılmış tedavi edilmesi gerekir. Tüm diğer malzemeler atarak onları önce otoklava gerekir.
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
Incubator | with 5% CO2, 37oC | |||
50 mL conical tubes | plastic | |||
human serum and blood | O+ | |||
pipette tip | for tissue culture | |||
pipettman | ||||
Pasteur pipetts | glass, sterile | |||
water bath | 37C | |||
centrifuge | ||||
parafilm | ||||
circulating water bath | ||||
glass membrane feeders | with rubber tubing to fit feeders | |||
mosquito cups | ||||
75% ethanol | ||||
10% bleach | ||||
Tissue-culture plates | 6-well, 24-well and 96-well plates | |||
Petri dish | glass | |||
Slides | ||||
fine-tip forceps | ||||
PBS | 1X, sterile | |||
dissecting microscope | Microscope | |||
C6/36 cells | cells | For virus propagation | ||
C6/36 medium | MEM with 10% heat inactivated FBS, 1% L-glutamine and non-essential amino acid and 1% (v/v) Penicillin-Streptomycin. | |||
3’-Diaminobenzidine terrahydrochloride | Sigma | D5905 | 1 tablet in 20 ml of 1 X PBS, dissolve and then add 8 µl of 30% hydrogen peroxidase | |
30% hydrogen peroxidase | ||||
A. aegypti | Animal | mosquito |