Synnerven transection är en allmänt använd modell av vuxna CNS-skada. Denna modell är idealisk för att utföra ett antal experimentella manipulationer som inriktar sig på näthinnan globalt eller direkt riktade till den skadade neuronala befolkning retinal ganglion celler.
Retinal ganglion celler (RGC: er) är CNS-nervceller som utdata visuell information från näthinnan till hjärnan via synnerven. Synnerven kan nås inom bana i ögat och helt transected (axotomized), skära av axoner av hela RGC befolkningen. Synnerven transection är en reproducerbar modell av apoptotiska nervcellsdöd i vuxna CNS 1-4. Denna modell är särskilt attraktiva eftersom glaskroppen kammare i ögat fungerar som en kapsel för drug delivery till näthinnan, som möjliggör experimentella manipulationer via intraokulära injektioner. Spridning av kemikalier genom glaskroppen vätska ser till att de agerar på hela RGC befolkningen. Virala vektorer, plasmider eller korta interfererande RNA (siRNA) kan även levereras till glaskroppen kammaren för att infektera eller transfektera näthinnans celler 5-12. Den höga tropism av Adeno-associerade virus (AAV) vektorer är fördelaktigt att rikta RGC: er, med en infektion takt närmar sig 90% av cellerna i närheten av injektionsstället 6, 7, 13-15. Dessutom kan RGC: er vara selektivt transfekterade genom att tillämpa siRNA, plasmider eller virala vektorer på den avskurna ändan av synnerven 16-19 eller injicera vektorer i sitt mål den överlägsna colliculi 10. Detta gör det möjligt för forskare att studera apoptotiska mekanismer i den skadade neuronala befolkningen utan störande effekter på andra åskådare nervceller eller omgivande Glia. RGC apoptos har en karakteristisk tid-kurs där celldöd är försenad 3-4 dagar postaxotomy, varefter cellerna snabbt urarta. Detta ger ett fönster för experimentella manipulationer som riktas mot involverade i apoptos. Manipulationer som inriktas direkt på RGC: er från transected synnerven stubbe utförs vid axotomy, omedelbart efter styckning nerven. Däremot när ämnena levereras via en intraokulär väg, de kan injiceras före operationen eller inom de första tre dagarna efter operation, före initiering av apoptos i axotomized RGC: er. I denna artikel visar vi flera metoder för experimentella manipulationer efter synnerven transection.
Synnerven transection är en mycket reproducerbar modell för vuxna CNS-neuron apoptos. Den experimentella manipulationer visas i detta manuskript möjliggöra studier av mekanismer RGC apoptos efter skada.
Intraokulära injektioner är användbara för global inriktning av näthinnan. Denna procedur kräver lite övning, eftersom det är avgörande att inte skada linsen med spetsen på glaspipett. Lens skada har visat sig orsaka utsläpp av tillväxtfaktorer, ändra cellöverlevnad och för…
The authors have nothing to disclose.
PDK stöds av en CIHR driftsbidrag (MOP 86.523)
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
Stereotaxic Frame | Stoelting, Kopf, WPI | |||
Rat Gas Mask | Stoelting, Kopf, WPI | |||
Anesthesia System | VetEquip | 901806 | ||
Isoflurane (PrAErrane) | Baxter Corp | DIN 02225875 | ||
Surgical Microscope | WPI, Zeiss, Leica | |||
Alcaine Eye Drops | Alcon | |||
Tears Naturale P.M. | Alcon | |||
Fine tip Dumont forceps | Fine Science Tools | 11252-00 | ||
10 μl Hamilton Syringe (1701RN; 26s/2”/2) | Hamilton Syringe Co. | 80030 | ||
1/16 inch Compression Fittings | Hamilton Syringe Co. | 55751-01 | ||
1/16 inch OD, 0.010 inch ID, PEEK Tubing | Supelco, Bellefonte, PA | Z226661 | ||
Dual RN Glass Coupler | Hamilton Syringe Co. | 55752-01 | ||
Mineral Oil Priming Kit: includes syringe, needles, rubber septa | Hamilton Syringe Co. | PRMKIT |