המודל של העכבר<em> בתוך הרחם</em> השתלת הוא כלי רב צדדי, שניתן להשתמש בהם כדי ללמוד את יישומים קליניים פוטנציאל של השתלת תא גזע ו ריפוי גנטי בעובר. בפרוטוקול זה, אנו מציגים גישה כללית ביצוע הטכניקה הזו
השתלת בתאי גזע ווירוסים ברחם יש פוטנציאל עצום בטיפול בהפרעות מולדים בעובר אנושי. לדוגמה, השתלה ברחם (IUT) של בתאי גזע hematopoietic שימש בהצלחה לטיפול בחולים עם כשל חיסוני חמור 1,2. משולב בתנאים אחרים, לעומת זאת, IUT כבר ניסו ללא הצלחה. 3 בהתחשב אלה תוצאות מעורבות, בזמינות מודל לא אנושיים יעיל ללמוד את sequelae הביולוגי של השתלת תא גזע ו ריפוי גנטי הוא קריטי כדי לקדם את התחום. אנו ואחרים השתמשו במודל עכבר של IUT ללמוד הגורמים המשפיעים engraftment מוצלח של ברחם התאים המושתלים גזע hematopoietic הן wild-type 4-7 עכברים ואנשים עם מחלות גנטיות. 8,9 סביבת העובר גם מציע יתרונות ניכרים עבור ההצלחה של בריפוי גנטי ברחם. לדוגמה, משלוח של 10 adenoviral, adeno הקשורים נגיפית 10, retroviral 11, 12,13 ו וקטורים lentiviral לתוך העובר הביא התמרה של איברים מרובים רחוקים הזריקה במבט לטווח ארוך גן. ברחם ריפוי גנטי ולכן עשוי להיחשב כאסטרטגיה טיפול אפשרי להפרעות גן יחיד, כגון ניוון שרירים או סיסטיק פיברוזיס. יתרון נוסף של IUT פוטנציאל הוא היכולת לגרום סובלנות החיסון אנטיגן ספציפי. כפי שראינו אצל עכברים עם המופיליה, את ההקדמה של פקטור IX מוקדם בתוצאות פיתוח סובלנות חלבון זה. 14
בנוסף השימוש בו בחקירת טיפולים פוטנציאל אנושי, המודל של העכבר IUT יכול להיות כלי רב עוצמה כדי לחקור שאלות בסיסיות בביולוגיה של התא התפתחותיים גזע. לדוגמה, ניתן להעביר מולקולות קטנות שונות כדי לעורר או לעכב ביטוי גנים ספציפיים בשלבים הריונית מוגדרת ולטפל מסלולים התפתחותיים. ההשפעה של שינויים אלה ניתן להעריך את timepoints שונים לאחר ההשתלה הראשונית. יתר על כן, אפשר להשתיל pluripotent או שושלת ובתאים ספציפיים לסביבה העובר ללמוד בתאי גזע בידול בסביבה לארח לא מוקרן ו בשלוות נפש.
במודל עכבר של IUT סיפקה כבר תובנות רבות בתחומי אימונולוגיה, ביולוגיה של התא התפתחותיים גזע. בפרוטוקול וידאו מבוסס זה, אנו מתארים גישה צעד אחר צעד לביצוע IUT בעוברים העכבר מתאר את הצעדים ביקורתית בעיות פוטנציאליות של טכניקה זו.
מעל 50 שנים, בילינגהם, ברנט, ו מךוואר בשימוש ברחם השתלה בעכברים כדי לגרום סובלנות החיסונית חלבונים זרים. 16 מאז, כמה וריאציות של טכניקה זו שימשו כדי לענות על שאלות באימונולוגיה וביולוגיה בתאי גזע.
פרוטוקול מפורט כאן היא א?…
The authors have nothing to disclose.
ברצוננו להודות מקורות המימון שלנו: המכון בקליפורניה הרגנרציה לרפואה קלינית הדרכה עמית גרנט (), הקרן הלאומית למדע (MW), פרס איירין Perstein (TCM), הקולג' האמריקאי של המנתחים (TCM), האגודה האמריקאית לרפואת ילדים כירורגי ( TCM), ואת מצעד הפרוטות (TCM).
Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
---|---|---|---|---|
Pipettes | Kimble | 71900-100 | ||
Pipette puller | Sutter Instruments Company | Model P-30 | ||
Microinjector | Narishige | IM-300 | ||
Pipette sharpener | Sutter Instruments Company | Model BV-10 |