分离和<em在体外激活线虫精子
Summary
一个来自男性的精子细胞的分离和激活的协议<em> C。线虫</em>这里描述。切割后结束精子的男性版本。蛋白酶此外，精子可以被激活。
Abstract
男性和雌雄同体自然就找到了两种线虫线虫性形式。变形虫精子产生的男性和雌雄同体。在配子发生的早期阶段，雌雄同体的生殖细胞分化成精子数量有限 – 约300 – ，并存储在一个小的“袋”之称的精囊。后来，雌雄同体不断产生卵母细胞 1。相比之下，男性产生专其整个成年的精子。男性产生这么多的精子，它在一个典型的成虫 2细胞总数的50％帐户。因此，隔离来自男性的精子是较雌雄同体容易。
只有一小部分男性是自然产生自发的非分离的X 染色体 3 。隧道与男性或更方便，引入的突变引起他（男性的高发病率）表型的雌雄同体的一些战略，通过它可以丰富男性人口3。
男性可以很容易地区别于雌雄同体通过观察尾部形态4。指出，雌雄同体的尾巴，而雄性的尾巴是交配结构的圆形。
切割尾部释放广大男性生殖道内储存的精子。夹层使用27表针的立体显微镜下进行。由于精子是不是身体与任何其他细胞相连，液压排出内部的内容包括男性身体精子 2 。
男性有直接解剖上的“精子中等”的小降。精子细胞是敏感的pH值的改变。因此，HEPES，一种化合物具有良好的缓冲能力是精子媒体使用。葡萄糖和其他盐类存在于精子媒体帮助维持渗透压，保持精子的完整性。
被称为减数分裂后的精子细胞分化成精子的精子或精子激活。震撼5，6尼尔森先前表明，圆形精子细胞能够被诱导分化成精子，通过添加各种活性化合物，包括链霉蛋白酶大肠杆菌在这里， 我们证明在体外精子的C 线虫精子使用链霉蛋白酶E。
成功的精子是生育的先决条件，因此，在精子缺陷的突变体是无菌的。迄今几个突变体已被证明特别是在有缺陷的精子形成过程7。异常时，发现在体外激活新型SPE（有缺陷的精子）的突变体，将有助于我们发现参与此事件的其他球员。
Protocol
Discussion
除了分析SPE突变体，该协议有其他重要的应用，如精子形态分析与衰老。使用此协议的精子细胞和精子分离出可用于在其他下游实验，如野生型和突变体的精子8，9，幻灯片10， 生理测量9，11，甚至人工授精12精子活力的免疫。
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
我们感谢，黛安C.塞缪尔沃德奶昔和格雷戈里纳尔逊这种技术的先驱。我们感谢帕Kadandale和布赖恩Geldziler视频显示激活精子，有益的讨论Singson实验室成员;株和美国国立卫生研究院的总部大楼为我们支持通过授予（R01HD054681）。
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| Tuberculin syringe | Becton Dickinson | 309623 | Syringe: 1 ml, needle: 27G X ½ in |
|
| Pap pen | Zymed | 00-8888 | ||
| VWR VistaVision HistoBond Microscope Slides |
VWR International | 16004-406 | Dimension: 75X25X1mm |
|
| Cover glass | VWR International | 48366045 | ||
| Protease | Sigma | P-6911 |
References
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