Замедленного типа гиперчувствительности (DTH) является воспалительная реакция опосредована CCR7-эффекторные лимфоциты памяти T. Здесь показано, как вызвать активный DTH у крыс Льюиса и контролировать воспалительную реакцию.
Abstract
Замедленного типа гиперчувствительности (DTH) является воспалительная реакция опосредована CCR7-эффекторные Т-лимфоциты памяти, что проникнуть в месте введения антигена, против которого иммунная система была загрунтовать. Воспалительная реакция характеризуется покраснением и отеком сайт антигенный вызов. Это удобная модель для определения в естественных условиях эффективность иммунодепрессанты. Кожные DTH могут быть вызваны либо приемных передачи антиген-специфические Т-лимфоциты или активной иммунизации с антигеном, и последующие внутрикожные проблема с антигеном, чтобы вызвать воспалительную реакцию в данной области кожи. DTH реакции могут быть вызваны на различные антигены, например, яичный альбумин, туберкулин, столбняка, или замочную скважину блюдечко гемоцианин (KLH).
Здесь показано, как вызвать активную реакцию в DTH Льюис крыс. Мы сначала подготовить водно-нефтяной эмульсии из KLH, наш антиген представляющих интерес, в полном адъюванте Фрейнда и придать этой эмульсии подкожно крыс. Это будет премьер иммунной системы, чтобы развить память Т-клеток, направленных на KLH. Семь дней спустя мы будем вызов крыс внутрикожно на спине с KLH с одной стороны и с овальбумина, не имеет значения антиген, с другой стороны. Воспалительная реакция будет виден 16-72 часов спустя и красные и опухшие области будет оцениваться как указание DTH тяжести.
Protocol
1. Подготовка эмульсии Эмульсия смеси 1:1 антигена (DTH могут быть вызваны на различные антигены: яичный альбумин, столбняка, замочную скважину блюдечко гемоцианин ….) в водном растворе добавляется полный адъювант Фрейнда. Это очень важно, чтобы добавить антигена адъювантной а не нао…
Discussion
Для более точного измерения DTH реакцию мы рекомендуем сложных крыс с антигеном в ушной раковины из уха. Реакция может быть измерена как разница в ухе опухоль между соответствующим антигеном оспаривается уха и ухо оспаривается ни с солевым в одиночку или с антигеном не имеет значения. Демонстрация…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Materials
Material Name
Type
Company
Catalogue Number
Comment
Complete Freund’s adjuvant H37Ra
Reagent
Difco
231131
Distributed by Fisher under catalog # DF 311-360-5
Keyhole Limpet hemocyanin
Reagent
Sigma
H-5654
Ovalbumin
Reagent
Sigma
A-5503
5 ml glass syringes
Tool
Fisher
14-823-10 B
Need two 5 ml syringes for each batch of 5 ml of emulsion
18G metal bridge
Tool
Fisher
14-825-17L
Lewis rats
Animal
Harlan Sprague Dawley
Female rats 7-9 weeks old
23G 1″ needles
Tool
Fisher
14-826 AA
It is best to change needles between rats
3 ml Luer Lock syringes
Tool
Fisher
05-561-63
DPBS
Reagent
Gibco/Invitrogen
14040-182
1 ml regular tip syringes
Tool
Fisher
22-257-154
27G 1/2″ needles
Tool
Fisher
14-826-48
Electric cordless trimmer
Tool
Braintree Scientific
CLP-32130
To shave the rats before antigen challenge in the back.
Use sterile solutions reagents and syringes. The glass syringes and 18G bridges can be autoclaved.
Read material data sheet before handling a reagent for the first time and wear appropriate protective equipment.
Beeton, C., Chandy, K. G. Induction and Monitoring of Active Delayed Type Hypersensitivity (DTH) in Rats. J. Vis. Exp. (6), e237, doi:10.3791/237 (2007).