Retardada de hipersensibilidad (DTH) es una reacción inflamatoria mediada por CCR7-efector linfocitos T de memoria. Aquí se demuestra la forma de inducir DTH activa en ratas Lewis y controlar la respuesta inflamatoria.
Abstract
Retardada de hipersensibilidad (DTH) es una reacción inflamatoria mediada por CCR7-efector linfocitos T de memoria que se infiltran en el sitio de la inyección de un antígeno contra el que ha sido el sistema inmunológico preparado. La reacción inflamatoria se caracteriza por enrojecimiento e inflamación del sitio de estímulos antigénicos. Es un modelo práctico para determinar la eficacia in vivo de los inmunosupresores. DTH cutánea puede ser inducido, ya sea por transferencia adoptiva de linfocitos T antígeno-específicos o mediante la inmunización activa con un antígeno, y el desafío posterior intradérmica con el antígeno para inducir la reacción inflamatoria en la piel de una zona determinada. Respuestas DTH pueden ser inducidas a diversos antígenos, por ejemplo, la ovoalbúmina, la tuberculina, toxoide tetánico, o hemocianina de lapa hemocianina (KLH).
Aquí se demuestra la forma de inducir una reacción activa de DTH en ratas Lewis. En primer lugar, preparará una emulsión de agua en aceite de KLH, nuestro antígeno de interés, en el adyuvante completo de Freund e inyectar esta emulsión por vía subcutánea a ratas. Esto se preparan al sistema inmunológico para desarrollar células T de memoria dirigidos a KLH. Siete días después, nos pondrá a prueba a las ratas por vía intradérmica en la espalda con KLH en un lado y con la ovoalbúmina, un antígeno irrelevante, en el otro lado. La reacción inflamatoria será visible 16-72 horas más tarde y en la zona roja e hinchada se medirá como una indicación de la gravedad de DTH.
Protocol
1. Preparación de la emulsión La emulsión es una mezcla de 1:1 de antígeno (DTH pueden ser inducidas a varios antígenos: ovoalbúmina, toxoide tetánico, hemocianina de lapa hemocianina ….) en una solución acuosa añade adyuvante completo de Freund. Es muy importante añadir el antígeno al adyuvante y no al revés! Hay una gran cantidad de residuos y la hora de hacer la inyección de una emulsión, por lo que siempre preparan 1,5 o 2 veces más de lo que usted necesita. <br…
Discussion
Para una medición más precisa de la reacción de DTH se recomienda un desafío a las ratas con el antígeno en el pabellón de la oreja. La reacción se puede medir una diferencia de inflamación del oído entre las autoridades de antígeno desafío auditivo y el oído desafió con solución salina sola o con el antígeno irrelevante. Una demostración del problema en el oído se muestra en 1.
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Materials
Material Name
Type
Company
Catalogue Number
Comment
Complete Freund’s adjuvant H37Ra
Reagent
Difco
231131
Distributed by Fisher under catalog # DF 311-360-5
Keyhole Limpet hemocyanin
Reagent
Sigma
H-5654
Ovalbumin
Reagent
Sigma
A-5503
5 ml glass syringes
Tool
Fisher
14-823-10 B
Need two 5 ml syringes for each batch of 5 ml of emulsion
18G metal bridge
Tool
Fisher
14-825-17L
Lewis rats
Animal
Harlan Sprague Dawley
Female rats 7-9 weeks old
23G 1″ needles
Tool
Fisher
14-826 AA
It is best to change needles between rats
3 ml Luer Lock syringes
Tool
Fisher
05-561-63
DPBS
Reagent
Gibco/Invitrogen
14040-182
1 ml regular tip syringes
Tool
Fisher
22-257-154
27G 1/2″ needles
Tool
Fisher
14-826-48
Electric cordless trimmer
Tool
Braintree Scientific
CLP-32130
To shave the rats before antigen challenge in the back.
Use sterile solutions reagents and syringes. The glass syringes and 18G bridges can be autoclaved.
Read material data sheet before handling a reagent for the first time and wear appropriate protective equipment.
Beeton, C., Chandy, K. G. Induction and Monitoring of Active Delayed Type Hypersensitivity (DTH) in Rats. J. Vis. Exp. (6), e237, doi:10.3791/237 (2007).