大鼠主动迟发型超敏反应（DTH）的诱导和监控

Summary

迟发型超敏反应（DTH）是一个CCR7的效应记忆T淋巴细胞介导的​​炎症反应。在这里，我们演示了如何在Lewis大鼠诱发积极的DTH和监测炎症反应。

Abstract

迟发型超敏反应（DTH）是一个CCR7的效应记忆T淋巴细胞浸润针对其免疫系统已催芽的抗原注射部位介导的炎症反应。炎症反应的特点是由抗原挑战的部位的皮肤发红和肿胀。这是一个方便的模型，以确定在体内的免疫抑制剂的疗效。可诱发皮肤直接到户，抗原特异性T淋巴细胞过继转移或与抗原的主动免疫，并随后在给定面积的皮肤，诱发炎症反应的抗原皮内挑战。 DTH反应，可诱发各种抗原，如卵清蛋白，结核菌素，破伤风类毒素，或锁孔戚血蓝蛋白（KLH）。

在这里，我们将演示如何在Lewis大鼠诱发积极的DTH反应。首先，我们将准备在完全弗氏佐剂了，我们感兴趣的抗原，KLH的油包水型乳化液和乳液皮下注入大鼠。这将总理的免疫系统的开发记忆性T细胞向KLH。七天以后，我们将挑战老鼠皮内与KLH的一方和一个不相关的抗原卵清蛋白，背面，在另一边。炎症反应将是可见的16-72小时后，红肿的面积将测量的DTH严重性的迹象。

Protocol

1。乳液的制备乳液是一种抗原（DTH可诱发各种抗原卵清蛋白，破伤风类毒素，钥匙孔戚血蓝蛋白在水溶液中….)完全弗氏佐剂1:1混合。添加抗原的辅助，而不是反过来，这是非常重要的！ 决策和乳状液注射时，有大量的浪费，所以总是比你需要更多的准备1.5或2倍。 准备了2毫克/毫升溶液溶解在生理盐水抗原。不过滤，因为你不想松散的聚合！ <…

Discussion

对于DTH反应更精确的测量，我们建议挑战与抗原在耳的耳廓大鼠。测得的反应，然后可以在耳肿胀相关抗原挑战的耳朵，或者生理盐水单独或与不相关的抗原挑战耳之间的差异。在耳边的挑战示范如图1所示。

Materials

Material Name	Type	Company	Catalogue Number	Comment
Complete Freund’s adjuvant H37Ra	Reagent	Difco	231131	Distributed by Fisher under catalog # DF 311-360-5
Keyhole Limpet hemocyanin	Reagent	Sigma	H-5654
Ovalbumin	Reagent	Sigma	A-5503
5 ml glass syringes	Tool	Fisher	14-823-10 B	Need two 5 ml syringes for each batch of 5 ml of emulsion
18G metal bridge	Tool	Fisher	14-825-17L
Lewis rats	Animal	Harlan Sprague Dawley		Female rats 7-9 weeks old
23G 1″ needles	Tool	Fisher	14-826 AA	It is best to change needles between rats
3 ml Luer Lock syringes	Tool	Fisher	05-561-63
DPBS	Reagent	Gibco/Invitrogen	14040-182
1 ml regular tip syringes	Tool	Fisher	22-257-154
27G 1/2″ needles	Tool	Fisher	14-826-48
Electric cordless trimmer	Tool	Braintree Scientific	CLP-32130	To shave the rats before antigen challenge in the back.

Use sterile solutions reagents and syringes. The glass syringes and 18G bridges can be autoclaved. Read material data sheet before handling a reagent for the first time and wear appropriate protective equipment.