Induktion och övervakningen av en aktiv Fördröjda överkänslighetsreaktioner (DTH) hos råttor

Summary

Fördröjd överkänslighet (DTH) är en inflammatorisk reaktion medierad av CCR7-effektor lymfocyter minne T. Här visar vi hur du framkalla aktiv DTH i Lewis råttor och övervaka det inflammatoriska svaret.

Abstract

Fördröjd överkänslighet (DTH) är en inflammatorisk reaktion medierad av CCR7-effektor lymfocyter minne T som infiltrerar injektionsstället av ett antigen mot vilket immunförsvaret har primade. Den inflammatoriska reaktionen kännetecknas av rodnad och svullnad på platsen antigena utmaning. Det är en praktisk modell för att bestämma in vivo-effekten av immunosuppressiva medel. Kutan DTH kan induceras antingen genom adoptiv transfer av antigen-specifika T-lymfocyter eller genom aktiv immunisering med ett antigen, och efterföljande intradermalt utmaning med det antigen att framkalla den inflammatoriska reaktionen i ett visst hudområde. DTH svar kan förmås att olika antigener, t.ex. äggalbumin, tuberkulin, stelkramp, eller nyckelhål ostronpest hemocyanin (KLH).

Här kan vi visa hur man framkalla en aktiv DTH reaktion i Lewis råttor. Vi kommer först fram en vatten-i-olja emulsion av KLH, vår antigen av intresse, i fullständig Freunds adjuvans och injicera denna emulsion subkutant till råttor. Detta kommer att prime immunförsvaret att utveckla celler minne T riktad till KLH. Sju dagar senare kommer vi att utmana råttor intradermalt på baksidan med KLH på ena sidan och med äggalbumin, en irrelevant antigen, på andra sidan. Den inflammatoriska reaktionen kommer att vara synlig 16-72 timmar senare och de röda och svullna området kommer att mätas som en indikation på DTH svårighetsgrad.

Protocol

1. Beredning av emulsion Emulsionen är en 1:1 blandning av antigen (DTH kan förmås att olika antigener: äggalbumin, tillade stelkramp, nyckelhålet ostronpest hemocyanin ….) i vattenlösning för att slutföra Freunds adjuvans. Det är mycket viktigt att lägga antigen i adjuvant och inte tvärtom! Det finns en hel del avfall när de gör och injicera en emulsion, så alltid förbereda 1,5 eller 2 gånger mer än vad du behöver. Lös antigen i saltlösning fö…

Discussion

För en mer exakt mätning av DTH-reaktionen rekommenderar vi utmanar råttorna med antigenet i ytterörat av örat. Reaktionen kan då mätas som en skillnad i örat svullnad mellan de berörda antigen-utmanade örat och örat utmanas med antingen koksaltlösning ensam eller med irrelevanta antigen. En demonstration av utmaningen i örat visas i 1.

Materials

Material Name	Type	Company	Catalogue Number	Comment
Complete Freund’s adjuvant H37Ra	Reagent	Difco	231131	Distributed by Fisher under catalog # DF 311-360-5
Keyhole Limpet hemocyanin	Reagent	Sigma	H-5654
Ovalbumin	Reagent	Sigma	A-5503
5 ml glass syringes	Tool	Fisher	14-823-10 B	Need two 5 ml syringes for each batch of 5 ml of emulsion
18G metal bridge	Tool	Fisher	14-825-17L
Lewis rats	Animal	Harlan Sprague Dawley		Female rats 7-9 weeks old
23G 1″ needles	Tool	Fisher	14-826 AA	It is best to change needles between rats
3 ml Luer Lock syringes	Tool	Fisher	05-561-63
DPBS	Reagent	Gibco/Invitrogen	14040-182
1 ml regular tip syringes	Tool	Fisher	22-257-154
27G 1/2″ needles	Tool	Fisher	14-826-48
Electric cordless trimmer	Tool	Braintree Scientific	CLP-32130	To shave the rats before antigen challenge in the back.

Use sterile solutions reagents and syringes. The glass syringes and 18G bridges can be autoclaved. Read material data sheet before handling a reagent for the first time and wear appropriate protective equipment.